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免胚胎细胞核移植重组胚的发育力 总被引：1，自引：0，他引：1
以兔为模型 ,对影响胚胎细胞核移植重组胚发育力的电融合与激活参数、体外培养系统进行了探索性研究。结果表明 ,有利于重组胚发育力的适宜电融合与激活参数为 2 0 0 V/ m m的电场强度、10 0μs的脉冲宽度 ;在不同的体外培养系统中 ,TCM- 199培养液内于兔胎儿成纤维细胞饲养层 (REF feeder)上共同培养的重组胚获得了最高的 2～ 4-细胞发育率和桑椹胚或囊胚的发育率 ,分别为 6 5 .7%和 2 2 .9%;移植 111枚重组胚给 9只假孕母兔 ,其中 2只妊娠 ,1只完成足月妊娠产出 2只克隆仔兔 ,另 1只在妊娠 2 2 d流产 1只克隆死胎。 相似文献
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卵母细胞体外成熟与体细胞核移植 总被引：1，自引：1，他引：0
赵磊文 《上海畜牧兽医通讯》2006,(5):56-57
众所周知,体细胞核移植中体细胞必须在去核的卵母细胞内进行重编程,以恢复其全能性,而卵母细胞的成熟程度则会直接影响体细胞的重编程过程。所以卵母细胞的体外成熟,作为体细胞核移植过程中的一个关键环节而为人们所关注。哺乳动物在胎儿出生前后就形成了一定数量的卵母细胞,在胎儿时期,卵巢内有相当数量的由原生殖细胞形成的卵原细胞,卵原细胞进一步形成初级卵母细胞(此期又称为GV期),此时卵母细胞生长极不明显可持续几个月到几十年。性成熟后,卵母细胞进入迅速生长阶段,形成大量卵黄,积累各种营养物质,完成了卵质的分化,合成储存了胚胎早… 相似文献
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曲古抑菌素A处理克隆胚对囊胚发育率的影响 总被引：5，自引：0，他引：5
[目的]探讨曲古抑菌素A（Trichostatin A,TSA）处理对囊胚发育率的影响。[方法]以牛胎儿成纤维细胞作为供体核,以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植,用80 nmol/L TSA处理供体细胞12 h,核移植后继续处理克隆胚胎0、6、12和24 h,应用激光共聚焦显微镜检测供体细胞组蛋白H4K12乙酰化水平,并通过核移植检测TSA不同时间处理的克隆胚胎囊胚发育率。[结果]TSA处理12 h的供体细胞组蛋白H4K12乙酰化水平显著增高（P〈0.05）;80 nmol/LTSA处理12 h的克隆胚的囊胚发育率（21.9%）高于未处理组（16.5%）,差异显著（P〈0.05）。[结论]供体细胞和克隆胚胎经TSA处理的12 h的克隆胚胎,显著提高了体外发育能力。 相似文献
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小鼠卵母细胞化学去核及手工构建核移植胚胎 总被引：1，自引：1，他引：0
为优化脱羰秋水仙碱（DC）诱导去核程序,研究以DC去核卵母细胞为核受体的、无透明带体细胞核移植方法在小鼠体细胞核移植中的应用,试验比较了乙醇、SrCl2两种激活方法及脱羰秋水仙碱处理开始时间对小鼠MⅡ期卵母细胞去核效率的影响;将DC诱导去核成功的卵母细胞去除透明带,与胎儿成纤维细胞粘合、电融合和SrCl2激活后,体外培养重构胚。结果显示,7%乙醇激活后0 min起始DC处理可得到最高的诱导去核率（66.4%）;而在8 mmol/L SrCl2中激活15 min后用DC处理可得到最高的诱导去核率（64.3%）;目前重构胚可以体外发育到8-细胞。试验结果首次证明了SrCl2在小鼠卵母细胞DC诱导去核中的作用效果与乙醇相当,初步证明了将DC诱导去核技术与无透明带技术相结合手工克隆生产小鼠重构胚的可能性,它的成功将大大简化核移植程序。 相似文献
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综述了哺乳动物卵母细胞孤雌生殖的主要研究进展,包括卵母细胞的成熟与激活、孤雌发育,以及游离Ca2 浓度的测定。为卵母细胞成熟体系、胚胎发育体系和胚胎干细胞体系的建立,以及体细胞核移植试验提供适宜的方法。 相似文献
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《饲料工业》2005,26(3):53-53
<正>在山东农大动物胚胎工程中心实验羊场,即将满月的"白雪"蹦蹦跳跳,活泼可爱。它时而拱到"母亲"的身下吃奶,时而钻过窄窄的栅栏撒欢,时而看着人昂头鸣叫。该校动物胚胎工程实验中心主任谭景和教授介绍,体细胞核移植克隆山羊的研究,得到了国家重点基础研究发展(973)计划和山东省"三O"工程项目资助。在研究过程中,他们将体外成熟卵丘细胞,经显微操作,植入山羊体外成熟卵母细胞卵周隙,并经电刺激使供核细胞与去核卵母细胞融合而组成克隆胚胎,再用特殊方法处理激活克隆胚胎,然后将培养发育好的49枚克隆胚胎,经手术移植到自然同步发情的5只受体母羊输卵管内。 相似文献
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亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞对牛体细胞克隆胚体外发育的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
为探索用亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞是否有利于牛体细胞克隆胚的体外发育,将采集的卵母细胞分成3组:对照组,采集后的卵母细胞直接放入成熟液培养,不用亮甲酚蓝处理;控制对照组,卵母细胞于PBS 中放置90 min后放入成熟液中培养;试验组,将采集的卵母细胞在含有26 μmol/L亮甲酚蓝的PBS中放置90 min.然后将处理过的卵母细胞根据着色情况分为两组,即BCB+(胞质呈蓝色,成熟卵母细胞)和BCB-(胞质未着色,生长期卵母细胞).各组卵母细胞24 h体外成熟培养,统计各组卵母细胞成熟率.分别用成熟后的各组卵母细胞用于细胞核移植,统计体细胞核移植的卵裂数、囊胚数和囊胚细胞数.结果表明,BCB+组卵母细胞的成熟率明显高于BCB-组卵母细胞的成熟率(74.0%,53.4%),差异显著(P<0.05).BCB+组的囊胚率(45.0%)与对照组、控制对照组和BCB-组的囊胚率(34.9%,36.4%和5.2%)相比差异显著(P<0.05).另外BCB+组的囊胚细胞总数(114.5±7.5)较其他组差异显著(P<0.05).表明通过亮甲酚蓝染色法筛选出成熟的高质量牛卵母细胞用于体细胞核移植,可以获得更高的克隆囊胚率. 相似文献
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影响牛卵母细胞体外发育能力的因素 总被引：2，自引：0，他引：2
本文重点从三个方面探讨了影响卵母细胞成熟发育能力的制约因素：（1）通过分析卵母细胞核成熟和胞质成熟的过程及成熟时各细胞器的状态，指出在体外培养系统中卵母细胞的核成熟，并不代表胞质的成熟，推迟卵母细胞减数分裂的恢复能够有效促使胞质成熟；（2）针对母牛卵巢的功能结构和形态变化，卵泡发育程度及母牛发情周期的不同阶段等有关内容的实验材料，分析了卵泡发育过程中的几种关键因素对卵母细胞发育能力的影响，为了获得较多具有发育潜力的卵母细胞，提出了采集母牛卵巢的适宜情期阶段；（3）根据卵母细胞发育的不同的阶段，提出改善培养体系能提高卵母细胞的发育力。 相似文献
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《中国草食动物科学》2017,(2)
在细胞核移植过程中,体细胞必须在卵母细胞内进行重编程以恢复其全能性,卵母细胞成熟度直接影响体细胞重编程,故卵母细胞体外成熟培养是体细胞核移植极其重要的环节,而卵母细胞又受环境、培养液浓度、培养温度等影响。文章通过探讨不同浓度的FSH和LH及HMG影响山羊卵母细胞体外成熟因素的研究,建立了山羊卵母细胞体外成熟体系,为山羊核移植及以后的优良育种奠定基础。 相似文献
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广西大学动物繁殖研究所兔胚胎细胞核移植课题研究获得突破性进展 ,我区首例克隆兔于 5月 1 3日顺利诞生。目前 ,克隆兔生长发育良好。该课题研究是在博士生导师石德顺研究员指导下 ,硕士研究生崔奎青等具体操作完成的。研究始于 2 0 0 1年 5月 ,经过近一年的不懈努力 ,研究人员攻克了兔细胞核移植中的显微操作、激活、融合、体外培养、胚胎移植等技术难关 ,最终获得了克隆兔的诞生。此项科研成果是继 1 995年该所成功诞生胚胎细胞克隆牛以来 ,获得的第二头克隆动物 ,克隆牛是与华南师范大学合作完成 ,而克隆兔则由本研究所独立完成 ,标志着… 相似文献
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对哺乳动物胚胎细胞核移植克隆技术的基本环节，以及细胞周期阶段对细胞核移植克隆胚胎效率影响的研究进行系统综述 相似文献
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本文对哺乳动物胚胎细胞体细胞核移植克隆技术中显微操作的基本环节,以及细胞周期阶段对细胞核移植克隆胚胎效率影响的研究进行综述。 相似文献
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《动物医学进展》2015,(9)
为了评估兔超排后卵巢残留卵泡内卵母细胞用作体细胞核移植的潜力,应用PMSG或FSH诱导母兔超排,排卵结束(hCG注射14h)后,抽吸卵巢表面卵泡回收卵母细胞(抽吸组/处理组)用于体细胞核移植(SCNT),同时与自然排卵到输卵管内的卵母细胞(排出组/对照组)进行比较。结果表明,PMSG和FSH超排获得的抽吸组成熟卵母细胞(以可见第一极体为准)的比率分别极显著和显著低于各自的排出组(PMSG:70.7%vs94.6%,P0.01;FSH:81.5%vs94.6%,P0.05),且PMSG和FSH抽吸组间卵母细胞的成熟率差异显著(70.7%vs 81.5%,P0.05)。PMSG和hCG超排的抽吸组成熟卵母细胞的去核效率也显著低于各自的排出组(PMSG:抽吸vs排出=69.2%vs83.6%,P0.05;FSH:抽吸vs排出=71.6%vs81.0%,P0.05)。抽吸组成熟的卵母细胞注核效率以及此类卵母细胞用作胞质受体经体细胞移植后的重构胚在融合率、分裂率以及分裂胚胎发育至囊胚的比例与排出组差异均不显著(P0.05)。另外,抽吸组卵母细胞孤雌激活后胚胎的发育能力以及囊胚细胞总数与排出组差异也不显著(P0.05)。但是,PMSG超排后的抽吸组成熟卵母细胞体细胞核移植的总体效率显著低于相应的排出组(8.4%vs11.5%,P0.05),而FSH超排的卵母细胞抽吸组与排出组差异则不显著(10.2%vs11.6%,P0.05)。结果显示,抽吸自超排兔卵巢表面卵泡内的卵母细胞大多数都已经成熟,虽然去核效果要差些,但获得的重构胚与源自排出到输卵管内的卵母细胞的重构胚具有等同的发育能力,可以不经体外成熟培养而直接用于体细胞核移植,而且FSH超排获得的抽吸组卵母细胞体细胞核移植的总体效率与自然排卵到输卵管内的卵母细胞没有显著差别。 相似文献