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1.
为制备绵羊早孕因子(EPF)单克隆抗体,以纯化的EPF重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA方法筛选单克隆抗体细胞株,将筛选的细胞株注入小鼠腹腔得到腹水型抗体,用G-sepharose柱亲合层析法对小鼠腹水型抗体进行纯化,应用SDS-PAGE和Western blot分析抗体纯化后的纯度及特异性。结果显示,细胞融合后得到了1株抗绵羊EPF单克隆抗体的细胞株B4D5,纯化后的腹水型单克隆抗体纯度较高,具有较强的特异性,应用单克隆抗体检测绵羊妊娠准确率为81.3%。表明,制备的绵羊早孕因子单克隆抗体为特异性抗绵羊EPF抗体。 相似文献
2.
采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG. 经SDS-PAGE电泳鉴定, 纯化的IgG达到电泳纯. 以此纯化的IgG, 采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠, 取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合, 融合率为90.3%. 建立间接ELISA, 用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体. 初检阳性率为13.9%. 经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 命名为6B4、 4B8. ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG, 6B4、 4B8经反复冻存, 复苏及多次传代, 仍能分泌高效价抗体, 分泌抗体均属IgG1、κ型. 本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用. 相似文献
3.
采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG.经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的IgG达到电泳纯.以此纯化的IgG,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,融合率为90.3%.建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体.初检阳性率为13.9%.经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6B4、4B8.ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG,6B4、4B8经反复冻存,复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体,分泌抗体均属IgG1、κ型.本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用. 相似文献
4.
周珍辉 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2011,37(1):78-81
为有效防治鸭肝炎,建立特异性强、敏感性高、简便快速的DHV检测方法,对分离的DHV进行纯化,并制备单克隆抗体.鸭胚尿囊液中的DHV经冻融、氯仿反复处理、PEG浓缩和超速离心纯化后,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术,通过间接ELISA法筛选及多次亚克隆,成功获得8株阳性杂交瘤细胞,分别命名为DHV-1、DHV-6、DH... 相似文献
5.
[目的]研制鸭肝炎病毒的单克隆抗体。[方法]将DHV-W株的鸭胚尿囊液经冻融、氯仿处理和超速离心纯化后,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,探讨DHV特异性强、敏感性高、简便快速的DHV抗原诊断方法。[结果]经间接ELISA筛选获得1株能稳定分泌DHV的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5G8。特性鉴定结果表明该株单抗ELISA效价较高且特异性好,中和特性稍差。杂交瘤细胞冻存6个月和12个月后复苏能稳定分泌特异性抗体。[结论]HDV的McAb成功制备为DHV的快速诊断、筛选特定基因探针等技术奠定了基础。 相似文献
6.
以含有鲤春病毒血症病毒核蛋白基因的质粒N-RFP为模板,通过PCR方法扩增N基因编码区全长,大小为1 254bp。将该基因连接到pGEX-KG载体上,构建了SVCV-N-KG重组质粒。将重组质粒转化到BL21菌株中进行诱导表达,采用SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳分析鲤春病毒血症病毒N蛋白的表达情况。以纯化后的N蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA测定免疫小鼠的血清效价。将血清效价较高的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,4次亚克隆后,通过ELISA及染色体数目分析筛选出1株杂交瘤细胞,命名为N-2。将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔制备单克隆抗体。经间接免疫荧光和免疫印迹实验证明该抗体可以特异性识别鲤春病毒血症病毒N蛋白。进一步分析表明,该抗体识别的靶位点位于N蛋白第227~336位氨基酸之间。 相似文献
7.
【目的】制备小鼠抗Luman-N端融合蛋白单克隆抗体。【方法】将GST-Luman-N端载体转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并进行SDS-PAGE电泳,用电洗脱的方法纯化融合蛋白;以纯化的融合蛋白为抗原免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用间接ELISA方法筛选阳性孔,采用有限稀释法进行亚克隆,筛选具有抗体分泌活性的单克隆细胞株;应用Western Blot、间接ELISA等方法进行克隆株稳定性、抗体特性的鉴定。【结果】获得1株能稳定分泌抗Luman-N端融合蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C8),其腹水ELISA单抗效价为1∶1×107。亚型鉴定和亲和力常数分析表明,2C8产生的单克隆抗体亚型为IgG2b型,其亲和力常数约为1×107。Western Blot分析证明,该株单抗能与原核表达的Luman-N端融合蛋白特异性结合,与GST-LRF-N端融合蛋白没有特异性结合。染色体分析结果表明,2C8细胞株染色体数目为(53±2)对。【结论】获得了抗Luman-N端融合蛋白的抗体,该抗体具有良好的特异性和结合活性,可用于对Luman-N端蛋白的进一步研究。 相似文献
8.
钙调蛋白(CaM)作为重要的抗逆信号转导蛋白,在调控木薯抗逆境和块根采后生理腐烂中起重要作用,为给快速检测木薯在不同生长环境中CaM蛋白的表达水平提供优良抗体,克隆木薯CaM基因并将目的基因插入原核表达载体,经Escherichia coli表达并纯化,用纯化的融合蛋白ACP-CaM免疫Balb/C小鼠,间接ELISA测定小鼠血清效价后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选能产生抗CaM单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、ELISA等方法对制备的单克隆抗体进行初步鉴定。Western blot分析结果显示原核表达重组质粒在E.coli中能高效表达CaM,免疫小鼠后取效价高的2#小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,共获得7株效价均达到106以上、能稳定分泌抗CaM抗体的细胞株,这7株单抗与淀粉磷酸化酶、His、BSA均无交叉反应,4D5株与标签蛋白ACP有交叉反应,表明其余6株均为CaM特异性抗体;抗体亚型鉴定结果显示7株单抗均为IgG型抗体。 相似文献
9.
为了鉴定弓形虫特异性重组GRA3蛋白的抗原表位,以原核表达并纯化的融合蛋白GRA3免疫BALB/c小鼠,利用快速免疫法进行免疫,通过ELISA进行筛选,获得8株能够稳定分泌抗GRA3蛋白特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。这8株McAbs亚类鉴定均为IgG型,特异性强,ELISA检测结果均为阳性,抗体效价均大于1∶200 000。该结果为进一步探索GRA3蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。所生产的McAb可用于免疫组化和疫苗的制备,并可大大提高诊断的特异性。 相似文献
10.
为了制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体(MAb),本试验将Vero细胞中增殖的PEDV超速离心纯化,作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术和PEDV重组S蛋白为基础的间接ELISA方法,制备并筛选能稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞;分别采用间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验,对单克隆抗体的亚型、特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明,本试验成功获得了1株稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞株5C3。MAb亚类鉴定为IgM,轻链为k型。杂交瘤细胞连续传至20代,细胞培养上清液和小鼠腹水抗体效价分别稳定在1∶600和1∶10 000。特异性试验结果显示,MAb不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PrV)、猪圆环病毒(PCV2)发生交叉反应。western-blot结果显示,MAb能特异性识别PEDV的重组S蛋白。IFA试验结果表明,MAb能与PEDV感染的vero细胞产生特异性荧光。说明本试验获得的MAb能特异性识别重组及天然的PEDV S蛋白,具有良好的抗原性和特异性。 相似文献
11.
口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体的制备与鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
用E.coli原核表达并纯化的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)非结构蛋白3B免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA筛选出分泌鼠IgG的杂交瘤细胞株,将该杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水,用间接ELISA法筛选获得6株能稳定分泌抗3B蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3E5、4B1、4D7、4E11、7B2、8B11.鉴定结果显示,4B1和4E11细胞分泌IgG1,其余4株细胞分泌IgG2b;纯化后6株腹水单抗的纯度达90%以上,对3B蛋白的ELISA滴度均可达到1:100 000以上;6株单抗均不与FMDV结构蛋白VP1和3D非结构蛋白发生反应;间接免疫荧光试验证明所制备的单抗能够识别3B蛋白;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存6个月后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定. 相似文献
12.
抗Zhangfei蛋白单克隆抗体的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】制备抗Zhangfei蛋白的单克隆抗体,并鉴定其特性。【方法】用Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0融合,筛选出阳性克隆,应用有限稀释法筛选抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤株;采用腹水诱生法制备单抗腹水,用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体;采用间接ELISA、单克隆抗体亚型检测试剂盒、免疫印记技术、曲线拟合方案等分别鉴定单抗效价、亚型、特异性和亲和力等特性。【结果】免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5 000以上,细胞融合克隆率为98.96%,阳性克隆率为30.18%,筛选出2株抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤细胞,其培养上清效价均达到1∶800,腹水单抗效价分别为1∶105和1∶2×105,亲和常数分别为2.5×106和2.3×106。制备的抗Zhangfei蛋白单克隆抗体的亚型均为IgG1类型。【结论】制备的抗Zhangfei蛋白单克隆抗体具有较高的效价和较强的亲和力,可用于进一步研究Zhangfei蛋白在机体中的生理作用。 相似文献
13.
为了检测水质、土壤、食品中的重金属钼离子的残留,故制备用于钼离子检测用的单克隆抗体。采用已合成的钼离子人工抗原Mo6+-ITCBE-BSA免疫Balb/C小鼠,用间接ELISA和间接竞争ELISA法筛选出备用小鼠,用细胞融合技术筛选制作单克隆抗体。结果表明:筛选出4株特异性强、敏感度高的杂交瘤细胞,其中4B3杂交瘤细胞株间接ELISA检测培养上清抗体效价为1∶(3.6×102);体内诱生法制备腹水效价为1∶(5.12×105);杂交瘤核型鉴定结果显示4B3杂交瘤细胞株染色体数目平均为99.4。4B3杂交瘤细胞株用间接竞争ELISA结果显示,IC50值为23.4μg/L,与Cr3+-EDTA的交叉反应率为81.8%,与其他金属螯合物无交叉反应。说明Mo6+-EDTA-mAb可用于Mo6+污染检测的免疫学试验。 相似文献
14.
采用纯化的鸡IgG免疫环磷酰胺预处理BALB/c小鼠后，再用亲和层析纯化的鸡IgM进行免疫，运用淋巴细胞杂交瘤技术，以间接ELISA法筛选，获得了5株能稳定地分泌抗鸡IgMμ链特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经ELISA交叉反应性试验和羊抗鸡IgMμ链抗血清阻断试验，证明这5株单克隆抗体均是抗鸡IgMμ链特异性的。采用环磷酰胺免疫抑制法制备单克隆抗体，其杂交瘤细胞阳性率为8.696%,而用常规免疫法为4.032%,前者比后者杂交瘤细胞阳性率提高1倍以上。经两次有限稀释法克隆和比较后，免疫抑制法获得5株单克隆抗体，而常规免疫法只获得2株单克隆抗体，前者有3株单克隆抗体腹水ELISA效价达到10#+（-12）、10#+（-14）、10#+（-15）；后者单克隆抗体腹水ELISA效价为10#+（-5）和10#+（-6）。因此，与常规免疫法相比，环磷酰胺免疫抑制法制备单克隆抗体具有杂交瘤细胞阳性率高，分泌的单克隆抗体特异性强、滴度高等优点，值得推广。 相似文献
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犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
用纯化的犬瘟热病毒免疫Balb/C小鼠,采用问接ELJSA方法筛选分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,挑选阳性孔进行亚克隆,用Vero细胞交叉反应试验及间接免疫荧光试验检测单抗的特异性.结果获得6株能稳定分泌抗犬瘟热病毒的单克隆抗体细胞株,分别命名为AD7、AE2、CE3、EH5、GG6和GF1.交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,6株单抗的特异性良好;经过体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳定分泌特异性单抗.培养上清液及小鼠腹水ELISA效价分别为26～211和104～107.相加试验表明:单抗AE2、CE3、GG6和GF1具有共同的表位,而单抗AD7和EH5识别的位点与其他4株不同. 相似文献
17.
《北京农学院学报》2020,(3)
【目的】制备植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体。【方法】合成植物乳杆菌素BM-1蛋白并制备偶联抗原,免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并筛选阳性杂交瘤细胞。筛选得到阳性杂交瘤细胞后,进行小鼠腹水制备,并纯化植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体。【结果】植物乳杆菌素BM-1人工抗原免疫小鼠后,通过细胞融合筛选得到2株能稳定分泌植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名E5、E9,免疫球蛋白亚型均为IgM类。杂交瘤细胞E5诱发小鼠腹水后,经酶联免疫吸附试验检测腹水滴度为1∶212 600。纯化植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体为13.2 mg/mL,抗体纯度达到92%。经蛋白电泳检测纯化植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体完整性好。【结论】制备得到高活性、高纯度的植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体。 相似文献
18.
[目的]比较以原核表达蛋白与纯化病毒制备单克隆抗体的特性。[方法]RT-PCR扩增IBDVVP2基因,通过原核表达系统表达目的蛋白,并亲和纯化重组蛋白。尿囊液扩增IBDV,并通过超速离心纯化病毒。分别用纯化的重组VP2蛋白和IBDV免疫Balb/c小鼠,ELISA筛选杂交瘤细胞株。[结果]获得了2株分泌VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水ELISA效价均为1∶2×104;4株分泌IBDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水ELISA效价分别为1∶2×106,1∶6×104,1∶1×105,1∶4×103。所有单克隆抗体均与其制备用免疫原反应,不与空载体或其他病毒抗原反应。经10～20次传代,仍保持稳定的效价。[结论]纯化的原核表达VP2蛋白和IBDV均能诱导小鼠产生免疫应答;用原核表达的VP2蛋白作为免疫原,可以获得特异的VP2抗体。 相似文献
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用纯化的重组PRV VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,通过间接ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗PRV VP6的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名C5D10。经鉴定C5D10为IgG1亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数为93,细胞培养液上清及腹水效价分别为18∶00和11∶×106,且C5D10单克隆抗体不与猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒发生交叉反应,显示良好的特异性。 相似文献
20.
[目的]获得研究鸡CD8分子的单克隆抗体。[方法]用自行设计的引物PCR扩增鸡CD8分子α链部分基因片段,构建2个原核重组质粒,该片段经原核表达和纯化后免疫BALb/c小鼠,最后将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,细胞上清液用ELISA检测。[结果]PCR扩增获得大小约为510 bp的基因片段。构建的pET-32a-CD8α导入大肠杆菌,诱导表达获得了大小为39 kD的融合蛋白H is-CD8α。融合细胞经亚克隆,其上清液用ELISA检测和筛选,获得1株稳定传代和分泌抗CD8α的抗体的杂交瘤细胞株。该株细胞被命名为C11。上清液的ELISA抗体效价达1：600。[结论]该研究以原核表达的CD8α为抗原制备了1株单克隆抗体。 相似文献