猎豹与虎猫杯状病毒的分离及其超变区基因比较研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

高玉伟  夏咸柱  扈荣良  黄耕  徐春忠  王铁东 《中国预防兽医学报》2003,25(3):179-182

用F81细胞从上海某动物园患口腔溃疡的猎豹和虎的唾液病料中分离获得两株杯状病毒，经形态学、理化学、生物学鉴定和病毒核酸超变区基因RT-PCR扩增与序列测定证明两株病毒均为猫杯状病毒(FCV)，分别命名为FCV/cheetah/Shanghai/02/2002与FCV／tiger/Shanghai／03/2002。人工感染猫可引起体温升高，口腔溃疡，食欲下降等症状。两株病毒的超变区序列520bp长片段问的同源性为99.2％，与国内桂林虎分离株(TFCV9710)的同源性为74．0％，与国外分离株的总体同源性为58．1％，说明不同宿主或同种不同个体间杯状病毒分离株超变区核酸差异十分显著，符合猫杯状病毒的分子生物学特征。  相似文献   

犬腺病毒SY-45株不同大小蚀斑特性研究     

范泉水  夏咸柱  邱薇  黄耕  何洪彬  余春  乔军  武银莲  殷震 《动物医学进展》2001,22(4):86-87,99

应用蚀斑方法将SY－45毒株经过3次蚀斑纯化直到蚀斑大小相对稳定。从不同大小的蚀斑中挑选出三种蚀斑，大斑直径约3mm(简称LP）、中斑约2mm(简称MP）、小斑约1mm(简称SP）。分别在MDCK细胞上增殖并进行了三种不同大小斑毒对犬的毒力、免疫原性和在MDCK细胞上产毒量比较，以筛选最佳的疫苗株，试验结果表明用不同大小蚀斑病毒大剂量人工感染易感犬后，所有的试验犬临床症状和病理解剖学和病理组织学表现均正常；对挑选的4窝CAV HI抗体效价小于等于1：2的健康幼犬进行免疫试验，测定血清的中和抗体效价和血凝抑制抗体效价，结果表明：大斑毒的免疫原性要稍高于中斑毒，而明显高于小斑毒；不同大小蚀斑毒在MDKC细胞上产毒量差异很大，大斑毒可达10^7TCID50／mL、小斑毒达10^6TCID50／ml、小斑毒达10^4.5TCID^50/mL。综合所有试验结果表明：大斑毒株具有产毒量高、安全性好、免疫原性强的优点，是较为理想的疫苗株。  相似文献   

犬瘟热病毒的静水压灭活   总被引：4，自引：1，他引：3  

池元斌  夏咸柱  王雪梅  余春  王琰第  何洪彬  范泉水  黄耕  王允海  刘海涛  张春红 《中国兽医学报》2001,21(1):35-37

以250MPa的静水压力对犬瘟热病毒（CDV）处理30min之后，CDV被灭活，由其制成的灭活疫苗诱导犬产生中和抗体的能力明显优于传统的福尔马林灭活疫苗，免疫保护率达90％。电镜观察显示，经不同程度静水压力处理后的CDV粒子均发生变形，表面呈现凸起，但CDV H基因部分片段的RT－PCR扩增结果揭示，高达510MPa的静水压力作用30min也未能使其基因片段受到破坏。  相似文献   

犬用细小病毒自然弱毒株的分离、鉴定和免疫研究     

夏咸柱  叶俊华  范泉水  武银莲  殷震  刘士英  郭志宏 《中国预防兽医学报》1989,(6)

应用猫肾传代细胞F81系,以同步接毒和带毒传代的方法。先后从50份犬、15份狐、75份貉和8份狮、虎、豹病料中分碍15株犬细小病毒(cpv)、3株貉细小病毒和6株猫泛白细胞减少症病毒,未分到狐细小病毒。通过人工感染试验,从中挑选到1株对犬和本动物无致病性、但具有良好免疫原性的细小病毒——貉细小病毒CR86106株。经核酸型、形态学、理化学、生物学特性试验以及与CPV核酸酶切图比较试验等系统鉴定,CR86106株病毒为1株与CPV特性基本相同,但也存在有一定差别的小DNA病毒。免疫试验和田间试验证明,CR86106株病毒遗传性稳定;对母源抗体干扰具有较强的抵抗力;免疫接种犬虽可随粪便排出少量原接种病毒,但不会使同居犬感染发病;试验犬经两次疫苗接种后攻毒,可获得完全保护,且不会随粪便排出强毒。累计免疫军、警犬3320只,全部安全,保护率达99.28％。  相似文献   

几种犬瘟热弱毒疫苗免疫效果比较研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

叶俊华  夏咸柱  徐玉生  马长书  刘文春  徐黎  朱文静 《江西畜牧兽医杂志》2003,(2):37-38

选用小熊猫(LP)株犬瘟热病毒(CDV)驯化致弱毒株为种毒研制的CD弱毒苗与另外4种CD弱毒疫苗,分别接种于5组易感幼犬,于最后1次接种后第14d和第21d采血,分离血清测定CDVSN抗体效价,并于第21d采血后用CDV强毒攻击,统计保护率。结果5组犬免疫后其中和抗体都有不同程度升高,分别从1∶10以下升高到1∶25～1∶360不等,选用LPV70毒种作为种毒的第1组犬免疫抗体效价最高,平均达到1∶185以上,攻毒试验保护率达到100%,2组抗体效价达到平均数1∶180,保护率达到90%,3组、4组抗体平均水平1∶30和1∶40,攻毒试验保护率分别只有40%和50%,5组平均抗体水平为1∶140,攻毒试验保护率为87.5%。  相似文献   

马立克氏病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定     

房德兴  刘作臣  殷震  夏咸柱  刘 《中国兽医学报》1989,(3)

以马立克氏病毒814株(MDV-814)作为免疫用抗原,建立了2个MDV特异性单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株—4A6、3D7。鉴定结果表明;两株细胞所分泌的McAb均为IgM类免疫球蛋白,具有MDVⅠ型病毒特异性,无中和反应特性和沉淀反应特性。利用两种McAb对国内标准强毒MDV-京1株进行鉴定,肯定其为MDV-Ⅰ型毒株。  相似文献   

通过病毒分离鉴定和基因检测首次发现虎流感   总被引：21，自引：1，他引：20  

夏咸柱  高玉伟  扈荣良  王立刚  刘丹  邹啸环  黄耕  贺文琦  王玮  苏伟林  刘文良 《中国兽医学报》2003,23(2):107-110

应用F81猫肾传代细胞，从高热、拒食和间有神经症状的死亡率病科中分离获得1株病毒，经形态学、理化学、生物学和血清学系统鉴定，证明为流感病毒。采用流感病毒核蛋白基因引物，对分离病毒及该虎病科进行RT－PCR扩增和序列分析，结果从分离病毒和虎病科中均扩增出与理论值大小相符的464bp基因片段；其序列与A、B、C3型流感病毒相比较，同源性分别为84．9％、35．0％、24．8％。由此说明，所分离病毒为A型流感病毒，命名为/蘧／哈尔滨（中国）／01／2002。用此分离病毒静脉接种于3月龄家猫3号，均出现与病虎相似的临床症状，其中1号耐过，2只死亡。死亡猫剖检变化与死虎相似，主要是呈肺炎病变，并可从病科中回收到所接种病毒。从此分离病毒为HA抗原，进行虎与猫血清的HI抗体检测，结果康复虎血清比其病初血清、康复猫血清比其接种前血清HI抗体均增高4倍以上，表明该病毒具有致病性，是引起该虎与试验猫发病甚至死亡的病原。  相似文献   

表达犬瘟热病毒H基因的重组犬2型腺病毒的构建与鉴定   总被引：6，自引：0，他引：6  

闫芳  夏咸柱  扈荣良  谢之景  赵忠鹏  黄耕 《中国兽医学报》2004,24(5):425-428

将犬瘟热病毒 ( canine distemper virus,CDV ) H基因表达盒克隆入转移质粒 p VAXΔE3,构建含 CDV H基因表达盒的转移质粒 p VAXΔ E3L PH,用 Nru 和 Sal 分别酶切转移质粒 p VAXΔ E3L PH和犬 2型腺病毒全基因组质粒p Poly2 - CAV- 2 ,将 CDV H基因表达盒定向克隆入 p Poly2 - CAV- 2质粒中 ,构建 E3区部分缺失的包含 CDV H基因表达盒的犬 2型腺病毒重组质粒 p CAV- 2 / CDVL PH。 Asc 和 Cla 对 p CAV- 2 / CDVL PH进行双酶切 ,释放 CAV- 2 /CDVL PH重组基因组 ,利用脂质体将 CAV- 2 / CDVL PH重组基因组与去除 Sal 和 Nru 片段的 CAV- 2基因组两端片段共转染 DK细胞 ,盲传和重复转染 3次 ,4 d后出现典型 CAV- 2病变 ,获得重组病毒 CAV- 2 / CDVL PH。用 CDV H基因特异性引物经 RT- PCR扩增重组病毒 DK细胞培养物 ,能够扩增出相应的核酸片段 ,表明 CAV- 2 / CDVL PH在DK细胞繁殖的过程中能够转录 CDVL P H的 m RNA,重组病毒免疫犬 ,可以诱导犬产生特异的抗 CAV- 2 HI抗体和抗 CDV中和抗体  相似文献   

大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定   总被引：11，自引：2，他引：11  

胡桂学  高凤山  高玉伟  夏咸柱  柏亚铎  余春 《畜牧兽医学报》2004,35(2):202-207

以犬肾传代细胞(MDCK)从1只病死大熊猫肝脏中分离到1株病毒,命名为DXMV。电镜观察磷钨酸负染的病毒细胞培养物，发现冠状病毒样粒子，超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学鉴定结果表明，DXMV核酸类型为RNA，对氯仿、乙醚敏感，可耐受1％胰蛋白酶的作用，具有一定的耐酸性和耐热性，可在MDCK、FCWF、F81细胞中增殖，无血凝性和血吸附特性。血清中和试验结果表明，DXMV可被犬冠状病毒阳性血清中和。采用犬冠状病毒间接荧光抗体法染色DXMV细胞飞片，可在细胞浆内见到特异性荧光。以冠状病毒通用引物和犬冠状病毒特异性引物，可从大熊猫肝脏和不同代次的病毒细胞培养物中扩增出与预期值251bp和515bp大小相同的核苷酸片段。由此说明，该病毒为犬冠状病毒，大熊猫可被犬冠状病毒感染。  相似文献   

不同宿主来源犬瘟热病毒的分离及致病相关基因序列分析     

李天松  王磊  王胜乐  姜雪  许微微  李元果  高玉伟  王铁成  黄耕  夏咸柱 《中国兽医杂志》2012,48(7):3-7

利用Vero-DST细胞从死亡犬、狐狸肺、脾内分离到4株犬瘟热病毒-CDV-TM-CC、CDV-Dog-SCh、CDV-Fox-SY、CDV-Fox-WF,在Vero-DST细胞上传5代没有细胞病变,5代细胞培养物经电镜、间接免疫荧光及PCR鉴定为阳性。与本实验室保存的CDV-Monkey-BJ进行基因测序,并对与致病相关的F蛋白、V蛋白进行分析,F蛋白分析5株毒具有6个潜在N-末端糖基化位点,与强毒株同源性在92%～99.7%,与疫苗株不高于93.3%,在F1亚基内有7个特有氨基酸位点,这可能与其对灵长类致病有关。V蛋白分析表明,其与强毒株同源性在94%～99.7%之间,而与疫苗株不高于93.3%,CDV-Monkey-BJ C272R突变使其Zn结合能力丧失。试验结果显示,所有分离株均为强毒株,不同宿主毒株序列存在差异,值得进一步研究。  相似文献