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建立了一种以一定ＥＤＴＡ深度的ＮａＯＨＯ－ＳＤＳ溶液和ＢａＡＣ２溶液快速分离鉴定质粒ＤＮＡ的方法。该法是将菌落直接挑在ＮａＯＨ－ＳＤＳ溶液中，待细菌细胞壁破裂、质粒ＤＮＡＩ了出来后，按比例加入ＢａＡＣ２溶液、离心取上清液电泳、紫外灯下分析鉴定。与其他快速分离鉴定质粒ＤＮＡ的方法相比较，本法具有简单、可靠、省时、无染色体ＤＮＡ及ＲＮＡ污染、灵敏度高（可检出１ｍｍ左右直径的单个菌落听质粒ＤＮＡ）等优点 相似文献
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[目的]建立重复性好的感受态细胞的快速制备方法和质粒转化方法。[方法]采用改进的氯化钙法制备感受态细胞后,将带有目标片段的质粒转入感受态细胞,使工程菌DH5α转化成具有抗氨苄青霉素的大肠杆菌,接种于添加氨苄青霉素的LB培养基上,并通过蓝白斑筛选和菌落PCR进行检测。[结果]制备的感受态细菌在不加Amp的LB平板上能较好生长,表明感受态细菌具有较强活性。感受态细菌在添加Amp的平板上不能生长,表明感受态细菌未被杂菌污染。转化后获得白色菌落1 410个,转化率为1.41×105cfu/μg。菌落PCR表明获得的白色菌斑为带有目标片段的阳性菌斑。[结论]该方法十分简便,是一种适于实验室操作的高效感受态细胞的制备方法。 相似文献
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《河北北方学院学报(自然科学版)》2017,(12)
目的构建微小脲原体核糖体蛋白L23基因原核表达载体并表达蛋白,为研究微小脲原体的生物学特性提供依据。方法根据NCBI上的微小脲原体核糖体蛋白L23基因序列设计引物,以微小脲原体基因组DNA为模板,通过PCR扩增目的基因后进行纯化,利用限制性内切酶BamH I和Not I对原核表达载体pGEX-6P-2和目的基因进行双酶切,并通过T4连接酶连接,连接产物转化XL1-Blue感受态细菌后接种至含氨苄青霉素的LB固体培养基培养,对形成的菌落进行PCR筛选和质粒测序验证,利用IPTG诱导表达GST融合蛋白,表达产物超声裂解后经GST Sepharose 4B纯化,SDS-PAGE电泳鉴定。结果经PCR成功克隆出目的基因,全长345bp,使用pGEX-6P-2质粒通用引物对转化有连接产物的大肠杆菌菌落进行PCR筛选鉴定,阳性菌落的PCR条带大小为468bp,与预期相符,对筛选出的菌落扩大培养并提取质粒进行基因测序,测序结果与NCBI中的基因序列完全一致,对诱导表达的重组蛋白进行SDS-PAGE鉴定,融合蛋白分子量质约为36.6kD,与预期一致。结论成功构建了微小脲原体核糖体蛋白L23原核表达载体,并在大肠杆菌中实现融合蛋白的表达,为微小脲原体核糖体蛋白L23基因以及解脲脲原体的后续研究奠定了基础。 相似文献
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试验以pHH43质粒为模板,通过PCR扩增含噬菌体Phi X174裂解基因E和CI857-PL-PR温控系统的温敏裂解盒CI857-PL-PR-E,再将该裂解盒插入到pPBA1100穿梭载体中,构建裂解质粒pPBA1100-E。利用细菌接合转化法将其转入牛多杀性巴氏杆菌中,通过溶菌动力学试验检测裂解质粒pPBA1100-E对牛多杀性巴氏杆菌的裂解效果并计算裂解效率。结果表明成功构建了裂解质粒pPBA1100-E,并将其成功地转入到牛多杀性巴氏杆菌中,溶菌动力学试验说明裂解质粒pPBA1100-E在牛多杀性巴氏杆菌中具有很高的溶菌效率,裂解效率为99.997%。因此,试验成功地制备了牛多杀性巴氏杆菌菌影,为进一步成功研制牛多杀性巴氏杆菌菌影疫苗奠定了坚实的基础。 相似文献
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利用MRS选择培养基筛选开菲尔粒中具有抑菌作用的乳酸菌。采用牛津杯琼脂扩散法,结合对理化抗性特征的鉴定、抗菌谱测定、菌落形态与特征和生理生化实验鉴定,结合伯杰氏手册对分离到的菌株进行鉴定。生理生化反应为乳酸菌,菌落形态与特征为球菌,对多数的革兰氏阴性菌有抑制作用,该菌株为乳酸乳球菌二乙酰乳酸亚种。鉴定分离为产球菌样细菌... 相似文献