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番茄红素环化酶基因片段克隆及反义表达载体构建 总被引：1，自引：1，他引：0
根据已知的番茄红素环化酶基因,即13环化酶基因和s环化酶基因的保守序列设计特异性引物。提取番茄叶片的RNA,经RT—PCR反应,扩增出723bp和569bp的目的片段,将它们分别连接到pEASY—T1 Cloning Vector上,测序鉴定其正确性。克隆到载体上的13环化酶基因用BamHI和SmaI双酶切,将基因反向插入PROK2表达载体上,构建PROK2-LYCb反义表达载体。同样连接到克隆载体上的s环化酶基因用BamHI和XbaI双酶切,将基因反向插入PROK2表达载体上,构建PROK2-LYCe反义表达载体。 相似文献
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应用PCR技术克隆了玉米淀粉分支酶sbe2a基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体,对重组子进行PER检测和限制性内切酶分析,并进行序列比对.结果表明:克隆片段长度为562 bp.将该基因反向插入到pWGLL载体Aetin-pro启动子下游,构建高效反义表达载体,通过花粉管通道法将其导入玉米自交系"铁7922",经PCR检测初步证明外源基因已整合到玉米基因组中. 相似文献
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根据已知的番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)CCD7和CCD8基因的序列设计特异性引物,采用RT-PCR克隆CCD7和CCD8基因片段,通过特定酶切将2个基因进行拼接,再将串联基因以反向重复的方式连入p UCCRNAi载体,并定向插入到p35植物表达载体上。结果表明,克隆获得了大小约为400 bp的CCD7和CCD8基因片段,基因片段拼接后获得800 bp左右的串联片段CCD7-8;将该基因片段插入p UCCRNAi载体后得到1 700 bp大小的含Intron的反向重复序列In-7-8,并成功插入到植物表达载体p35中,通过酶切分析,RNAi载体构建正确。最终成功构建了番茄CCD7和CCD8 2个串联基因的RNA沉默表达载体p35-In-7-8。 相似文献
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为了改善甜瓜果实的品质及研究甜瓜蔗糖磷酸合成酶(SPS)基因的生物学功能,本试验分别构建了甜瓜果实SPS基因的正义及反义表达载体。用PCR方法将克隆到pMD18-T载体上的甜瓜SPS基因用带有KpnⅠ和XbaⅠ酶切位点的引物扩增,然后将该扩增片段克隆到pMD19-T Simple载体上,再用KpnⅠ和XbaⅠ双酶切,得到该基因编码区3.37 kb的cDNA片段,将其定向插入到植物表达载体pROK2的KpnⅠ/XbaⅠ克隆位点,构建了甜瓜果实SPS基因的正义表达载体。将已克隆到pMD18-T载体上的甜瓜SPS基因用KpnⅠ和HincⅡ双酶切,得到该基因编码区830 bp的cDNA片段,将其定向插入到植物表达载体pROK2的KpnⅠ/SmaⅠ克隆位点,构建了甜瓜果实SPS基因的反义表达载体。 相似文献
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参照拟南芥WRKY33转录因子基因序列设计引物,利用RT—PCR技术从大白菜中克隆了WRKY33基因编码区460bp的序列,利用双链RNA介导的基因沉默技术,构建WRKY33基因沉默植物表达载体,为进一步研究该基因在植物与软腐病菌互作中的功能及其作用机制奠定基础。首先将WRKY基因片段连接至pUCm—T载体上,用PstI／BamHI和风fI／Xho1分别对pUCm—WRAT载体进行酶切,得到2个WRKY基因片段;先后将其连接到pBSSK—in载体上,构建成pBSSK．WRKY-in—WRKY载体,该载体中的2个WRKY片段大小一致,反向重复;并用SacⅠ／KpnⅠ酶切pBSSK—WRKY-in—WRKY载体得到WRKY-intron—WRKY片段,连入表达载体pCAMBIA1301中,构建成该基因的沉默植物表达载体。 相似文献
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【目的】构建具有大豆蛋白酶抑制剂BBi基因反向重复结构的ihpRNA种子特异性表达载体,并将其转入根癌农杆菌中,为大豆品质改良奠定基础。【方法】采用PCR技术克隆大豆蛋白酶抑制剂BBi基因的正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和作为内含子的GFP基因片段,分别连入克隆载体pMD18-T Vector中。然后根据植物中ihpRNA原理,以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,将组成RNAi载体的4个目的片段分别连入其中,然后利用冻融法转化根癌农杆菌,并进行PCR鉴定。【结果】PCR扩增得到组成RNAi载体的4个目的片段,分别构建成重组克隆载体和ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS,并转化得到含有p7αP-GFP-BBiS的农杆菌EHA101和EHA105。【结论】成功构建了具有BBi基因反向重复结构的ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS,BBi基因的ihpRNA表达框架成功转入到农杆菌中。 相似文献
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减蛋综合征病毒基因文库的构建 总被引：5，自引：0，他引：5
采用差速离心法纯化了鸭胚尿囊液中的减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）ＷＰＤＶ２０５病毒并提取了病毒基因组核酸。选用ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ两种限制性内切酶对病毒基因组ＤＮＡ进行双酶切处理，结果产生７个片段，在这７个片段中，只具有ＢａｍＨⅠ酶切位点的片段有２个，只具有ＥｃｏＲⅠ酶切位点的片段有３个，具有双酶切位点的片段有２个。将其中的５个片段分别插入到ｐＵＣ１８相应多克隆位点中，建立了ｐＥＤＳＶＢＥ１、ｐＥＤＳＶＢＥ２、ｐＥＤＳＶＢ１、ｐＥＤＳＶＢ２、ｐＥＤＳＶＥ５个重组子，并对这５个重组子进行了酶切鉴定 相似文献
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水稻香味基因的染色体定位研究 总被引：5，自引：0，他引：5
以籼型及粳型标记基因系为工具材料，分别与武进香籼、武进香粳杂交，研究香味基因在染色体上的位置，以碱浸法测定双亲和Ｆ＿１，Ｆ＿２及部分Ｆ＿３组合的叶香，结果表明，香味基因与分属水稻１１个染色体的３９个标记基因表现独立遗传，而与位于第８染色体上的标记基因ｖ一８表现连锁，估算２基因之间的重组值约为３８．０３％±３．８４％，推定水稻香味基因位于第８染色体上。 相似文献
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反义ACC氧化酶基因的导入对番茄乙烯生成的抑制作用 总被引：14，自引：0，他引：14
将反向克隆的ＡＣＣ氧化酶基因通过Ｔｉ质粒导入到番茄基因组中，转基因番茄植株叶片和果实中ＡＣＣ氧化酶活性和乙烯产生速率均受到显著抑制，显示出反义基因能抑制靶基因（ＡＣＣ氧化酶）的表达。子代抗性标记基因的分离结果表明呈单基因遗传。 相似文献
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犬瘟热病毒扬州分离株融合蛋白F和附着蛋白H基因的序列分析 总被引：2，自引：2，他引：2
根据Genbank犬瘟热病毒(CDV)毒株序列分别设计融合蛋白F和附着蛋白H全基因的2对引物,以2个CDV扬州分离株(CDV-YZ0101、CDV-YZ0102)为模板RT-PCR扩增出H基因和F基因2个片段,将其克隆进pGEM-Teasy载体,并进行序列分析.结果表明H基因的开放阅读框架(ORF)为1 824 bp,2种分离株间核苷酸和编码氨基酸同源性达98%左右,与中国长春分离株、美国、日本分离株的同源性分别为96%、93%～95%和90%～91%.氨基酸分析显示扬州分离株与其他分离株的H蛋白有8～9个可能的天冬酰胺糖基化位点,而OP-CDV疫苗株只有4个类似位点.扬州分离株与长春分离株同属一个系,与美国、日本分离毒株以及疫苗株相比,均存在着明显的差异.F基因ORF为1 989 bp,不同毒株间的核苷酸及编码氨基酸差异主要表现在信号肽区域,而编码的F0前体蛋白表现出较高同源性(97%～99%),且所有的13个半胱氨酸残基、4个可能的天冬氨酰糖基化位点和2个疏水区域均完全一致.因此CDV F与H蛋白基因相比有很高的同源性,证明中国分离株与国外参考株有差异. 相似文献
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综述了基因工程技术在棉花品种改良中的应用,特别是转Ｂｔ基因抗虫棉的研究和发展概况,并探讨了目前存在的问题及展望。 相似文献
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沙柳等位酶分析 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究运用等位酶标记基因 ,通过 4种酶系统对 92个沙柳无性系进行优良基因型筛选 ,其中过氧化物酶和天冬氨酸转氨酶采用凝胶系统 分离 ,酯酶和己糖激酶采用凝胶系统 分离。研究结果表明 :4种酶系统至少有10个基因位点所控制 ;各位点表现高度杂合性 ;其中至少 3个位点有多态性 ;Pod- 2、Pod- 3的重复位点和 Hex-2位点 ;筛选出 Pod- 2 b基因和 Hex- 2 d基因为沙柳高生长性状的标记基因 ,其树高数量性状为同时含有 Hex- 2 d和 Pod- 2 b >只含有 Hex- 2 d >只含有 Pod- 2 b >不含有 Pod- 2 b和 Hex- 2 d,筛选出 XIV- 0 8等 7个优良无性系。 相似文献
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家蚕近等基因系育成研究 总被引：2，自引：0，他引：2
选用家蚕分子生物学研究常用品种“大造”为轮回亲本,以家蚕实验遗传上各连锁群重要的形态性状标志基因系统为供体,培育家蚕近等基因系。通过1995年春至2000年秋连续6年的培育研究,在我国首次大批育成了包含家蚕全部连锁群各1个标志基因的近等基因系计28个。其中22个与轮回亲本交配次数在10次以上,分别为10－17次不等;余6个（均为隐性基因者）与轮回亲本交配次数达7－9次不等。利用育成的近等基因系进行RAPD分析及克隆鉴定,目前已得到8个近等基因系的目标基因的分子标记。 相似文献
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IBDV南京野毒株VP2结构蛋白基因克隆与表达 总被引：5，自引：0，他引：5
用微机辅助设计合成了一对引物，用于扩增传染性法氏囊病病毒中国地方株ＶＰ２基因片段。ＲＴ－ＰＣＲ增出－１３２１ｂｐ的目的的片段，分子杂交鉴定为ＶＰ２基因。 相似文献