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将兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）感染死亡兔肝反复冻融，分别经氯仿抽提，聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀浓缩，蔗糖垫底超速离心，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析及蔗糖密度梯度离心，得到纯化的ＲＨＤＶ。电镜观察，ＲＨＤＶ粒子无囊膜，大小为３２～３４ｎｍ。核酸展层法显示，病毒基因组核酸长度约为７．０ｋｂ。用苯酚抽提法从上述病毒悬液中提取的核酸，在琼脂糖凝胶电泳呈现２条主带；当以λＤＮＡ－ＨｉｎｄⅢ消化物为分子量标准时，它们分别位于相当于２０ｋｂ（Ａ带）和２．０ｋｂ（Ｂ带）的位置。用ＤＮＡｓｅ、ＲＮＡｓｅ及Ｓ１核酸酶消化试验分析表明，Ａ带是一种双股ＤＮＡ，而日带为单股ＲＮＡ。在Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ中只有Ｂ带可以与德国提供的ＲＨＤＶ－ｃＤＮＡ克隆探针发生杂交反应，而Ａ带不与该探针显示任何反应。此外，用相同方法也可从临床健康兔肝得到在电泳中的表现与Ａ带一致的核酸提取物。本研究表明，在我国流行的ＲＨＤ病料中，出现的约７．０ｋｂ的单股ＲＮＡ是ＲＨＤＶ病原特异的。 相似文献
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饲喂核酸类物质对蛋鸡产蛋量的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
饲喂核酸类物质对蛋鸡产蛋量的影响许福康，杨雪南，王应铨张哲民，伍孝恭，史筱英苏州职业大学农业分校苏州市养鸡场国外以核酸类物质作为微生物肥料、饲料添加剂应用于农业、园艺、畜牧等生产领域进行了广泛的研究。在国内，外源性核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）以往仅有作为改... 相似文献
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第四讲核酸的分子杂交技术及其应用１概述核酸的分子杂交（ｍｏｌｅｃｕｌａｒｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一,是定性或定量检测特异ＲＮＡ或ＤＮＡ序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱基互补原则而发展起... 相似文献
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本研究对甘肃天祝高山草地野外样方中不同肥,水的４种植物进行了核酸分析。总核酸光吸收测定数据表明草地植物种群生态适应对策发生于ＤＮＡ,分化于ＲＮＡ到蛋白质的翻译过程中,这一结果初步说明了高山草地植物种群生态适应对策形成是：１）发生在ＤＮＡ控制转录ＲＮＡ的过程中;２）环境因子不同量的干扰是形成不同生态适应对策的外动力。 相似文献
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用ＩＢＤＶ特异引物对ＩＢＤＶＲＮＡ进行逆转录和ＰＣＲ扩增。以低触点琼脂糖凝胶电泳法回收ＰＣＲ扩增带，经酚－氯仿纯化后，用ＤＩＧ际记制备ＩＢＤＶＣＤＮＡ核酸探针．斑点杂交试验证明，该探针能与ＩＢＤＶ不同毒株（ＳＴＣ、Ｌｕｋｅｒｔ、Ｂ＿２和ＬＱ）发生阳性杂交反应，敏感度为１ｐｇ．本实验制备的ＩＢＤＶｃＤＮＡ核酸探针不仅为ＩＢＤＶ的流行病学研究和分子生物学鉴定提供了敏感可靠的手段，而且也是核酸探针制备方法的一次探索。 相似文献
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基因免疫是９０年代初开始发展起来的新方法。１９９０年Ｗｏｌｆｆ等试图用注射方法促使小鼠的肌细胞吸收质粒ＤＮＡ以产生新的蛋白质。设置的对照组在注射ＤＮＡ时未加任何化学佐剂，出人意料的是对照组动物的肌细胞吸收了这种裸露的质粒ＤＮＡ后，能高水平地表达外源蛋白［１］。进一步研究表明，直接给动物接种编码抗原的基因片段可使该动物获得对该抗原的免疫力，即将编码某种蛋白的外源基因直接导入动物细胞可达到免疫接种的目的。所接种的核酸（ＤＮＡ以质粒形式或ＲＮＡ以ｍＲＮＡ形式）既是载体，又是抗原的来源，具有疫苗的功能，… 相似文献
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蜜蜂线粒体DNA碱变性提取法 总被引：2，自引：0，他引：2
一、前言线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）已被广泛应用于动植物群体遗传学和进化生物学的研究中，并为分子系统学提供了有价值的比较生物学的数据，取得了许多非常有意义的结果。有效的ｍｔＤＮＡ提取方法，无疑是开展这方面研究的前提。而ｍｔＤＮＡ提取实验成功的标志是把染色体ＤＮＡ（即核ＤＮＡ）、蛋白质与ＲＮＡ尽量去除干净，从而获得一定得率和纯度的ｍｔＤＮＡ，以满足ｍｔＤＮＡ用于限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析中的酶切及聚合酶链式反应（ＰＣＲ）中酶切、拷贝和连接的需要。本试验用碱变性提取法，ＣｓＣｌ超速离心法和蛋… 相似文献
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本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＤＮＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体－Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐ ｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后，即成ＤＮＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＤＮＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ，而不与ＩＢＤＶ－ｄｓＲＮＡ，ＡＩＢＶ－ｓｓＲＮＡ，ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ０ｄｓＤＮＡ、Ｆ 相似文献
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采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异、灵敏、稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。 相似文献
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光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异，灵敏，稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。 相似文献
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DIG—标记鸡传染性法氏囊病病毒cDNA探针的制备 总被引：7，自引：1，他引：6
用ＩＢＤＶ特异引物对ＩＢＤＶ ＲＮＡ进行逆转录和ＰＣＲ扩增。以低融点琼脂糖凝胶电泳法回收ＰＣＲ扩增带，经酚－氯仿纯化后，用ＤＩＧ标记制备ＩＢＤＶ ｃＤＮＡ核酸探针。斑点杂交试验证明，该探针能与ＩＢＤＶ不同毒株发生阳性杂交反应，敏感度为１ｐｇ。本实验制备的ＩＢＤＶ ｃＤＮＡ核酸探针不仅为ＩＢＤＶ的流行病学研究和分子生物学鉴定提供了敏感可靠的手段，而且也是核酸探针制备方法的一次探索。 相似文献
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鹌鹑卵泡发育过程中颗粒细胞黄体生成素受体mRNA的表达 总被引：4，自引：0，他引：4
用Ｎorthern杂交的方法研究了鹌鹑排卵泡内颗粒细胞黄体生成素受体（ＬＨＲ）mＲＮＡ的表达。在预计排卵前２０h和３h分别取出最大的３个卵泡（Ｆ１、Ｆ３卵泡）以及小黄卵泡（ＳＹＦ）,剥离颗粒层提取出总ＲＮＡ,并经变性凝胶电泳后将ＲＮＡ转移到滤膜上。杂交所用的探针是用特异的引物经反转录一多聚栈链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出编码ＬＨＲcＤＮＡ的细胞外区（ＥＣ）和跨膜区（ＴＭ）cＤＮＡ。结果表明,颗粒细胞ＬＨＲmＲ 相似文献
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将我们分离并适应于猪肾传代细胞株（ＰＫ１５）传代、增殖的猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ），经多次冻融后进行浓缩处理，在抽提病毒核酸前使用核酸酶和蛋白酶Ｋ清除细胞核酸和杂蛋白，抽提后的病毒核酸用ＲＮＡ酶消化；将各个试样以０．８％琼脂糖凝胶进行电泳分析，结果表明，ＰＥＤＶ样品的核酸型为ＲＮＡ． 相似文献
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家蚕微孢子虫孢子DNA的提取、克隆及部分DNA序列分析 总被引：3，自引：3，他引：0
报道家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ简称Ｎ．ｂ）孢子ＤＮＡ的提取、克隆及部分ＤＮＡ序列测定的结果。采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ将孢子破碎，用苯酚一氯仿法提取孢子的ＤＮＡ。将Ｎ．ｂ孢子ＤＮＡ与ｐＴＺ１８Ｒ质粒重组，转化于大肠杆菌ＤＨ５，获得４个阳性克隆株：ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ１，插入片段为１ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ２，为１．２ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ３为１．８ｋｂ及ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ４为１．９ｋｂ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实插入的ＤＮＡ片段为家蚕Ｎ．ｂ孢子所特有。与ＭＧ１（Ｎｏｓｅｍａｓｐ．），蓖麻蚕微孢子虫、蓝萤叶甲微孢子虫及蚕卵的ＤＮＡ均无同源性。用双脱氧链终止法测定４个克隆株插入片段的部分ＤＮＡ的序列，经检索尚未发现同源性的基因序列。讨论了ＰＣＲ技术诊断家蚕微孢子虫孢子与近缘种的问题。 相似文献
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将我们分离并适应于猪肾传代细胞株（ＰＫ１５）传代、增殖的猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）。经多次冻融后进行浓缩处理，在抽提病毒核酸前使用核酸酶和蛋白酶Ｋ清除细胞核酸和杂蛋白，抽提后的病毒核酸用ＲＮＡ酶消化；将各个试样以０．８％琼脂糖凝胶进行电泳分析，结果表明，ＰＥＤＶ样品的核酸型为ＲＮＡ。 相似文献
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常用ＤＮＡ的分离与纯化技术简介关红梅王转子（中国农科院兰州畜牧与兽药研究所兰州７３００５０）１ＤＮＡ的分离纯化１．１植物基因ＤＮＡ的纯化方法植物基因ＤＮＡ的纯化方法目前多采用提取液研磨法提取ＤＮＡ,苯酚－氯仿抽提除去蛋白质,ＲＮＡ酶消化法除去ＲＮＡ,... 相似文献
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家蚕微孢子虫孢子DNA的提取、克隆及部分DNA序列分析 总被引：3，自引：0，他引：3
报道家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ简称Ｎ．ｂ）孢子ＤＮＡ的提取、克隆及部分ＤＮＡ序列测定的结果。采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ将孢子破碎，用苯酚一氯仿法提取孢子的ＤＮＡ。将Ｎ．ｂ孢子ＤＮＡ与ｐＴＺ１８Ｒ质粒重组，转化于大肠杆菌ＤＨ５，获得４个阳性克隆株：ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ１，插入片段为１ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ２，为１．２ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ３为１．８ｋｂ及ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ４为１．９ｋｂ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实插入的ＤＮＡ片段为家蚕Ｎ．ｂ孢子所特有。与ＭＧ１（Ｎｏｓｅｍａｓｐ．），蓖麻蚕微孢子虫、蓝萤叶甲微孢子虫及蚕卵的ＤＮＡ均无同源性。用双脱氧链终止法测定４个克隆株插入片段的部分ＤＮＡ的序列，经检索尚未发现同源性的基因序列。讨论了ＰＣＲ技术诊断家蚕微孢子虫孢子与近缘种的问题。 相似文献
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用琼脂糖凝胶电泳快速检测鸡传染性法氏囊病毒的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
从成都，郫县，龙泉，广汉和峨嵋等地发生疑似鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的６个鸡场中，采集病死鸡的法氏囊，经免疫复合物沉淀法提纯，浓缩病毒后，用蛋白酶Ｋ－酚抽提法提取鸡传染法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）的核酸核酸（ＲＮＡ），经琼脂糖凝电泳分析表明：从６个病例的鸡法氏囊组织所提取的ＲＮＡ，电泳都出现了ＩＢＤＶ特有２条核酸谱带。而且，６份样品核酸带的迁移率与ＩＢＤＶ１型参考毒ＳＣ３株无差异，琼脂糖核酸电泳比琼扩度 相似文献
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用核酸的组织化学方法对梅花鹿巴氏杆菌病脾脏Ｔ．Ｂ淋巴细胞及其ＤＮＡ和ＲＮＡ的分布进行研究。结果表明：Ｔ－淋巴细胞主要分布在中央动脉周围淋巴鞘、脾小结外周、边缘区及椭球内。Ｂ－淋巴细胞主要存在于脾小结生发中心和脾索中。ＤＮＡ和ＲＮＡ的分布未见异常，即ＤＮＡ存在于淋巴细胞核，ＲＮＡ存在于淋巴细胞的胞浆中，脾脏被膜、小梁平滑肌肿胀，排列疏松，脾髓内含有大量血液。红髓发达，脾索中浆细胞增多，窦腔内网状细胞增殖，有大量黄血盐沉着。白髓不发达，被膜下有弥散性淋巴组织，生发中心不明显；中央动脉淋巴鞘发达。边缘区不明显。鞘毛细血管数量不多，体积也比较小。 相似文献
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核酸疫苗的构成及主要特点 总被引：12，自引：0，他引：12
张以芳 《上海畜牧兽医通讯》2000,(2):11-11
核酸疫苗 (ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｖａｃｃｉｎｅｓ)是将编码某种抗原蛋白的外源基因 (ＤＮＡ或ＲＮＡ)直接导入动物体细胞内 ,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白 ,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答 ,以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗又称为基因疫苗或ＤＮＡ疫苗 ,这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、ＤＮＡ介导的免疫以及遗传免疫等。核酸疫苗是由基因治疗而发展起来的。 70年代末 ,Ｍ .Ａ .Ｉｓｒａｌ等〔1,2〕将纯化的多瘤病毒完整的ＤＮＡ直接注射小鼠使其感染 ,首次证明ＤＮＡ可被动物体细胞摄入并到达细胞核得以转录。 1 9… 相似文献