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1.
用PCR技术从同一兔出血症病料扩增和检出2种病毒核酸 总被引：1，自引：0，他引：1
应用 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 技术，对兔出血症病毒核酸作了鉴定。分别设计合成 ２ 对 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增特异性引物，即按兔出血症病毒中国分离的 Ｎ Ｊ株核酸序列合成 １ 对引物（ Ｎ Ｊ引物），按德国分离的 Ｆ Ｒ Ｇ 株核酸序列合成另 １ 对引物（ Ｆ Ｒ Ｇ 引物），进行 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ。从纯化的病毒核酸样品和感染 Ｄ Ｊ Ｒ Ｋ 细胞的病毒核酸样品中，均扩增出 ２ 对引物范围内的特异性核酸片段， Ｎ Ｊ引物扩增产物为 ３６４ ｂｐ， Ｆ Ｒ Ｇ 引物扩增产物为 ５１３ｂｐ。模板用 Ｒ Ｎａｓｅ 消化后，仍出现 ３６４ ｂｐ 带，用 Ｄ Ｎａｓｅ Ｓ１ 消化，则此带消失；反之，用 Ｄ Ｎａｓｅ Ｓ１ 消化，出现５１３ ｂｐ 带，用 Ｒ Ｎａｓｅ 消化，则此带消失，证实前者模板为 Ｄ Ｎ Ａ，后者为 Ｒ Ｎ Ａ。 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交试验证实， Ｐ Ｃ Ｒ扩增出的核酸片段与各自的地高辛标记特异性探针发生强阳性杂交反应。由此认为，在兔出血症病毒感染中，同时存在着 ２ 种不同核酸型的病毒。 相似文献
2.
鸡传染性法氏囊病病毒野毒株VP2基因高可变区酶切位点分析 总被引：5，自引：1，他引：4
参照澳大利亚鸡传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）００２７３ 毒株基因组序列设计的 １ 对引物,位于 Ｖ Ｐ２ 高可变区两端,通过 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ,扩增了 ５ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 山东分离株 Ｖ Ｐ２ 基因的 ６０７～１ ０８０ 位核苷酸片段（ａａ２０３～３０６）。 Ｐ Ｃ Ｒ 产物经纯化后,分别用 Ｄｒａ Ⅰ、 Ｓａｃ Ⅰ、 Ｓｓｐ Ⅰ、 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｓａｕ３ Ａ Ｉ共 ５ 种限制性内切酶（ Ｒ Ｅ）进行消化处理,结果 ５ 个分离株均为 Ｄｒａ Ⅰ（－ ）、 Ｓａｃ Ⅰ（－ ）和 Ｓａｕ ３ Ａ Ｉ（＋ ）, Ｌ Ｃ２ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（＋ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｊ Ｎ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（－ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｌ Ｃ２ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（＋ ）, Ｊ Ｎ、 Ｌ Ｌ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（－ ）;５ 个分离株的酶切图谱与美国变异株迥异,而 Ｔ Ａ 株与日本超强毒株 ９０１１ 相类似。５ 个分离株与现用疫苗株对比,至少在 Ｖ Ｐ２ 可变区内存在着一定的差异,这可能是 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 接种免疫鸡群仍然暴发 Ｉ Ｂ Ｄ 的原因之一。 相似文献
3.
鸡贫血病毒山东分离株全基因克隆 总被引：1，自引：1，他引：0
设计了 Ｃ Ａ５、 Ｃ Ａ６ 和 Ｃ Ａ７、 Ｃ Ａ８ 两对引物,分别扩增鸡贫血病毒（ Ｃ Ａ Ｖ）山东分离株 Ｓ Ｊ１ 的 １５ Ｋｂ 和 ０８ Ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ 片段。并将这两个片段分别克隆至 ｐ Ｕ Ｃ１１９ 和ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ Ｓ Ｋ＋ ）载体质粒,最后一起克隆到 ｐ Ｑ Ｅ３２ 载体质粒上,使两个片段前后连接成一个全长的病毒 Ｄ Ｎ Ａ。用该质粒转染 Ｍ Ｄ Ｃ Ｃ Ｍ Ｓ Ｂ１ 细胞,经免疫荧光抗体法和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测到 Ｃ Ａ Ｖ 病毒,结果证明我们得到了一个 Ｃ Ａ Ｖ 感染性全基因克隆。 相似文献
4.
不同传染性法氏囊病病毒分离株VP2基因部分核酸序列及其编码蛋白的比较 总被引：3，自引：1，他引：2
根据已报告的传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列,在病毒 Ｖ Ｐ２ 区域,设计 １ 对引物,并在 ２ 引物上分别加 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ酶切位点。对 ２ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 分离株 Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４,用异硫氰酸胍酚氯仿抽提一步法提取病毒 Ｒ Ｎ Ａ,然后进行逆转录和 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增,将扩增片段经酶切纯化后克隆于 ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中,以双脱氧链末端终止法测定 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列。将测定的分离株与标准对照株（ Ｓ１） Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ｖ Ｐ２ 基因片段的核苷酸序列进行计算机分析比较, Ｊ Ｓ３ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ３ 与 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９９％ 。推导编码蛋白氨基酸序列, Ｊ Ｓ３ 和 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９６％ , Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９８％ 。这表明在我国流行的 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 毒株与标准毒株相比不仅在免疫学反应上有差异,而且在病毒核酸序列上有变异,这种变异是造成疫苗免疫失败或免疫逃避的分子基础。 相似文献
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兔出血症病毒在细胞培养和组织中的形态发生 总被引：4，自引：2，他引：2
在电镜下系统地观察了感染后的细胞培养和组织中兔出血症病毒（ Ｒ Ｈ Ｄ Ｖ）的形态发生。感染早期，在细胞核内可见电子致密颗粒（１５ ｎｍ ）和未成熟的病毒颗粒 （２５ ｎｍ ）。中期，在细胞核和胞浆内出现大量成熟的病毒颗粒（３４ ｎｍ ），并发现部分核内病毒通过扩大的核膜孔、核膜溶解扩大的核孔和乳头状突起的核膜向胞浆释放。感染末期，核染色质消失，核内大量感染病毒清淅可见。最终细胞溶解，病毒颗粒释放至细胞间隙。提示 Ｒ Ｈ Ｄ Ｖ 是在核内复制和装配的，应归属于细小病毒科。本试验结果不排除同时存在另一种小 Ｒ Ｎ Ａ 病毒。 相似文献
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兔出血症病料中病毒核酸成分的分别鉴别 总被引：2，自引：2，他引：0
将兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）感染死亡兔肝反复冻融，分别经氯仿抽提，聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀浓缩，蔗糖垫底超速离心，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析及蔗糖密度梯度离心，得到纯化的ＲＨＤＶ。电镜观察，ＲＨＤＶ粒子无囊膜，大小为３２～３４ｎｍ，核要酸展层法显示，病毒基因组核酸长度约为７．０ｋｂ。用苯酚抽提法从上述病毒悬液中提取的核酸，在琼脂糖凝胶电泳呈现２条主带，当以λＤＮＡ－ＨｉｎｄⅢ消化物为分子量标准时，它 相似文献
7.
应用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ技术,对兔出血症病毒核酸作了鉴定,分别设计合成２对ＰＣＲ扩增特异性引物,即按兔出血症病毒中国分离的ＮＪ核酸酸序列合成１对引物（ＮＪ引物）,按国分离的ＦＲＧ株核酸序列民另１对引物（ＦＲＧ引物）,进行ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ。 相似文献
8.
用ＥＤＳ７６病毒标准ＡＶ１２７株和分离株（Ｂ９６株）感染鸭胚，提取病毒核酸，分别经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切，获得图形和大小相似的酶切片段。分别进行ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ单酶切，也得到相似结果。病毒ＤＮＡ经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切后，与ＰＵＣ１９质粒载体重组，并转化到ＥｃｏｌｉＪＭ１０１中，筛选出一个插入片段（Ｇ片段）约为２７ｋｂ的重组质粒。用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｍｉｎ标记ＥＤＳ７６ＤＮＡＧ片段（ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切片段）及含该片段的重组质粒分别制备探针，对ＥＤＳ７６病毒ＤＮＡ进行斑点杂交，两种探针均为阳性，而对照组ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＤＶ正常鸭胚尿囊液的核酸为阴性。且后一种探针的敏感性高于前者，它的ＤＮＡ检出限量为４ｐｇ水平。结果表明，两种探针具有高度的特异性、敏感性。 相似文献
9.
猪细小病毒生物学特性研究 总被引：2，自引：0，他引：2
应用ＰＫ－１５传代细胞复制猪细小病毒（ＰＰＶ）参考株ＮＡＤＬ－２和云南分离株ＫＭ，研究得出细胞培养物半数细胞感染量分别为１０＾－７．９／ｍｌ和１０＾－６．８／ｍｌ经ＣｓＣｌ密度梯度离心，两种病毒颗粒其浮力密度值分别为１．３３ｇ／ｃｍ＾３和１．３９／ｃｍ，电镜观察病毒粒子呈圆形，直径约２０ｎｍ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，表明纯化的ＰＰＶ细胞培养毒，主要含两种蛋白成分，分子量 相似文献
10.
将狂犬病固定毒ＣＴＮ株（中国济南株）、ＣＶＳ株（国际标准攻击毒株）、ＥＲＡ株（兽用疫苗弱毒株）,分别在小鼠脑组织增殖及ＥＲＡ毒株在ＢＨＫ２１传代细胞增殖,通过超薄切片和负染色制备样品,电镜观察。结果发现,在相同鼠脑组织中,ＣＴＮ株病毒粒子比较难查找,而ＣＶＳ株和ＥＲＡ株较易被发现。另外,在不同毒株的脑组织和细胞培养物另还发现了大量的非典型粒子,诸如削了顶的粒子以及锥形、柱形等形态,同时还发现了胞浆包涵体。通过试验,我们认为：⑴典型病毒数量与免疫原性呈正相关。⑵在观察鼠脑细胞中的病毒时,发现有神经髓鞘部位是难以找到病毒粒子的。⑶狂犬病病毒粒子存在于宿主细胞浆内,核内未发现。 相似文献
11.
选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(缩写为SS株)和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIVA/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)(缩写为F株)为研究对象,对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性比较后发现,F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株,F株可以经气溶胶传播途径传播,SS株不能经气溶胶传播途径传播;利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获取F株和SS株的HA和NA基因的cDNA,序列分析得知,F株和SS株的HA和NA基因的同源性分别是96.6%和98.1%;HA基因的裂解位点氨基酸序列都是PARSSR↓GL,但有5个氨基酸的差异,即166位N(F)→D(SS)、198位A(F)→V(SS)、217位V(F)→I(SS)、335位G(F)→R(SS)、504位L(F)→S(SS);2株病毒的NA基因在63~65位都存在氨基酸缺失,但在NA基因红细胞吸附位点的氨基酸序列不同,分别是IKKDSRSG(F)和IKEDLRSG(SS)。F株和SS株的传播特性差异是否与其表面基因序列有关,有待进一步研究。 相似文献
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本文系统地回顾了近60年以来国内外乡土灌草青贮利用与牛羊健康饲喂的研究现状与进展。通过对已有研究文献的年度分布、研究内容与研究区域进行分析,结合饲草青贮技术领域、草食畜牧业领域以及社会发展的背景,将乡土灌草青贮与牛羊健康饲喂划分为3个阶段,20世纪50年代到80年代末期为萌芽阶段、20世纪80年代末期到21世纪初期为缓慢增长阶段、21世纪初期至今为快速增长阶段。其次,根据研究内容从理论研究、监测评价、技术示范、技术研发4个方面进行归纳总结,分析了各分支领域的主要成果与关键问题,提出下阶段应重点研究的内容,应加强对乡土灌草饲料生产与牛羊健康饲喂的研究,综合提高饲料能量与蛋白质的利用率,尽可能改善牛羊的能氮平衡,促进畜牧业和饲料加工业的发展。 相似文献
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为分析猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因结构并预测其所编码蛋白的结构和功能,本试验根据GenBank已报道的猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因序列分别设计了1对特异性引物,从猪葡萄球菌GDZC株中扩增获得EXHC和SHETA基因片段,大小分别为1007和971 bp。序列分析结果表明,EXHC基因与猪葡萄球菌丹麦分离株(GenBank登录号:AF515455)及猪源松鼠葡萄球菌河北分离株(GenBank登录号:JF755400)的核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为100.0%,而与其他葡萄球菌脱落毒素基因的核苷酸、氨基酸序列同源性分别为3.3%~53.9%和7.9%~44.2%。SHETA基因与日本分离株(GenBank登录号:AB036768)的核苷酸序列同源性为96.2%,氨基酸序列同源性为98.4%,在保守区共有31个碱基发生突变。利用DNAStar软件对EXHC和SHETA蛋白结构进行分析,结果显示EXHC基因编码的蛋白为亲水性蛋白,SHETA基因编码蛋白为疏水性蛋白,抗原性较差。本研究从猪葡萄球菌GDZC株中成功扩增获得EXHC和SHETA基因片段并对其编码的蛋白结构进行了预测,证实了中国分离的猪葡萄球菌同时携带有EXHC和SHETA 2种毒素基因,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及毒素之间的相互作用提供了理论依据。 相似文献
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通过观察狐貂自咬症疾病行为特点,分析发病原因,传播途径,及时诊断治疗,以提高狐,貉养殖的经济效益。 相似文献
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果洛州草地鼠虫害情况及防治措施 总被引：9，自引：0，他引：9
１９９６年的调查，果洛州草地鼠虫害面积约为２４７．６万ｈｍ２，因鼠害每年损失牧草约１５９８．７万ｔ，相当少养１０９５．０１万羊单位。近１０年来使用Ｃ型肉毒梭菌毒素灭治取得很大成绩，累计灭治面积达到１８３．１万ｈｍ２。 相似文献
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