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通过采用程序降温法(试验1:分步法10%甘油;试验2:直接法1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖)和玻璃化法(试验3:20%甘油+0.3M蔗糖+0.3M木糖+3%聚乙二醇+20%乙二醇)对牛体外受精胚胎进行冷冻保存及解冻后进行孵化培养试验,用囊胚孵化率对各方法进行了比较。结果表明,10%甘油组、1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖组及玻璃化组胚胎存活率分别为85%、82.5%、90%;囊胚孵化率分别为50%、55%和80%(P<0.05)。体外受精胚用玻璃化法保存显著优于程序降温法,可获得较高的胚胎存活率(90%)和囊胚孵化率(80%)。 相似文献
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转基因兔胚胎玻璃化冷冻保存的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
在２５℃条件下,将兔体外受精精子载体转基因兔桑椹胚置于含有４０％乙二醇、１８％Ｆｉｃｏｌ、０．３ｍｏｌ蔗糖的ｍＰＢＳ溶液（ＥＦＳ４０）中平衡２分钟,然后直接投入液氮,成功地进行了玻璃化冷冻保存。解冻后桑椹胚发育至囊胚和孵化囊胚的比例分别为６５．８１％和３９．２４％,与未经冷冻的鲜胚发育比例（７１．０５％和４３．４２％）相比,没有明显的差异。７８枚经玻璃化冷冻和解冻的桑椹胚移植给５只受体,其中２只妊娠,共产下８只活仔兔。 相似文献
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小鼠2-细胞胚胎细管法和OPS法玻璃化冷冻保存技术的研究 总被引：8，自引：0，他引：8
本试验在室温 (2 0℃和 2 5℃ )条件下 ,利用不同浓度的玻璃化溶液 (EFS和EDFS) ,对小鼠 2 细胞胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻保存。在 2 0℃室温条件下 ,用EFS4 0平衡 1min细管一步法冷冻 ,解冻后囊胚发育率仅为35 .0 % ,和新鲜 2 细胞体外培养的对照组 (6 5 .0 % )的差异极显著 (P <0 .0 1)。当 2 细胞胚胎在 10 %EG +10 %D溶液中预处理 5min ,再移入EDFS中平衡 30s二步法冷冻保存 ,解冻后囊胚发育率达 4 7.8%～ 4 8.8% ;当室温升至2 5℃时 ,二步法冷冻保存后 2 细胞的囊胚发育率达到 5 2 .2 % ,与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。改用OPS二步法EFS30冷冻组保存后的 2 细胞胚胎的囊胚发育率高达 6 2 .2 % ,为试验中的最佳组。用最佳细管法和OPS法冷冻组解冻后培养至囊胚移植给受体母鼠均获得产仔 相似文献
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家兔的超数排卵和胚胎冷冻方法的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
哺乳动物胚胎冷冻是近十年在鲜胚移植基础上发展起来的一项新技术,冷冻保存胚胎首先于1972年在小鼠获得成功(Whittingham leibo and Mazur, 1972)以后,牛(Wilmat and Rowson, 1973),羊(Willadsen, Polge, Rowson and Moor, 1974),兔(Whittingham and Adams, 1974)和大鼠(Whittingham, 1975)的胚胎相继冷冻成功。应用冷冻保存技术不但能根据需要随时进行胚胎移植,而且还可以进行胚胎长途运输和建立基因库——长期保存有价值的遗传材料和珍贵的品种资源,它和精液冷冻一样在家畜的良种繁 相似文献
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《中国兽医学报》2017,(3):554-558
通过研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)对牛胚胎玻璃化冷冻的影响,探讨ε-PL在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用,为优化牛胚胎玻璃化冷冻技术提供依据。单独以ε-PL作为冷冻保护剂,其质量浓度为20、35、50g/L,分别进行胚胎冷冻,结果均不能取得成活胚胎,说明ε-PL不能单独作为冷冻保护剂使用。在传统玻璃化冷冻剂中分别添加质量浓度为10、20、30g/L的ε-PL进行胚胎冷冻,结果发现添加ε-PL之后的冷冻保护液具有更好的保护效果,且ε-PL质量浓度为20g/L时效果最好,囊胚解冻孵化率可达42.37%。进一步探索了用该冷冻保护剂,缓冲时间分别为5、7.5、10min进行胚胎冷冻的效果,结果发现缓冲时间为7.5 min取得最高孵化率,孵化率为46.58%。结果表明,ε-PL对牛胚胎玻璃化冷冻具有一定的保护作用,且适当延长缓冲时间可取得更好的冷冻效果。 相似文献
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影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素 总被引：4，自引：0，他引：4
试验对影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素进行探讨，以找出理想的玻璃化冷冻方法。在测试的５种玻璃化溶液中，含３５％乙二醇（ＥＧ）和１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的溶液（ＶＳ１）对胚胎的毒性最小。用ＶＳ１冷冻桑椹胚和囊胚的理想程序是：在室温下使胚胎分别在２０％ＥＧ和３５％ＥＧ中平衡２、３分钟后，移入ＶＳ１中，０．５分钟内（囊胚也可在２分钟后）投入液氮中冷冻。桑椹胚的存活率为９１．７％（３３／３６），囊胚的存活率为９７．１％（３３／３４）～９７．３％（３６／３７）。８～１６细胞胚胎的理想冷冻程序为：在室温下使胚胎在２０％ＥＧ、３５％ＥＧ中平衡２、３分钟，移入４℃的３７％ＥＧ＋１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中平衡２分或１０分钟后冷冻，胚胎存活率分别为１００％（３７／３７）、８６．１％（３１／３６）。 相似文献
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探讨了胚胎分割前后冷冻和不同时期的冷冻胚胎对水牛胚胎分割效果的影响。结果:冷冻后分割组的分割成功率与分割后冷冻组差异不显著(71.39%vs 71.43%,P>0.05),但囊胚冷冻后分割组的半胚发育率显著高于分割后冷冻组(58.33%vs 47.14%,P<0.05);扩张囊胚的冷冻存活率显著高于孵化囊胚(94.84%vs 79.01,P<0.05),但囊胚与孵化囊胚差异不显著(92.67%vs 79.01%,P>0.05),囊胚、扩张囊胚和孵化囊胚冷冻胚胎的分割成功率(70.76%,73.22%,70.92%)及半胚发育率差异均不显著(53.07%,51.49%,57.99%)(P>0.05)。上述结果说明,水牛囊胚冷冻后分割比分割后冷冻能获得更高的半胚发育率;水牛未扩张囊胚和扩张囊胚的冷冻存活率比孵化囊胚高,且这3个时期的冷冻胚胎均适合分割。 相似文献
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以广西巴马小型猪为供体,采用超数排卵技术,采集5～6日龄的胚胎(囊胚/桑椹胚),比较2种冷冻方法、胚胎承载工具、透明带处理和冷冻胚胎移植受体对猪胚胎冷冻效果的影响.结果表明,2种冷冻方法的冷冻效果没有显著差异;GMP法能显著提高冷冻胚胎存活率(83.8%vs 77.6%,P＜0.05)和囊胚细胞数(47.5 vs 53.1,P＜0.05);以0.5%链蛋白酶10 s处理透明带,虽然对猪胚胎存活率没有显著影响,但能显著提高囊胚细胞数(60.1vs 46.6,P＜0.01);以地方猪种(枫泾母猪)为冷冻胚胎移植受体能显著提高妊娠率和胚胎效率(P＜0.01). 相似文献
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澳洲波尔山羊胚胎3种冷冻方法对其胚胎移植效果的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
在25℃室温下,采用细管法(一步法、二步法)和OPS法,以不同浓度的EFS、EDFS为玻璃化冷冻液,对澳洲波尔山羊致密桑椹胚和囊胚进行玻璃化冷冻保存。同时利用1.5mol/LEG为抗冻保护剂对胚胎进行常规法冷冻保存。分别将上述3种方法冷冻解冻后的胚胎移植于同期发情后6~7d的云南黑山羊受体。结果表明,细管法胚胎玻璃化冷冻保存效果均以EFS40组为佳,解冻后胚胎移植产羔率分别为40.54%(15/37;一步法)和51.35%(19/37;二步法)。与新鲜胚胎移植产羔率(52.50%,21/40)和常规法冷冻保存的胚胎移植产羔率(45.16%,14/31)相比无显著性差异(P>0.05)。另外,用EDFS30玻璃化溶液,OPS法冷冻解冻后的胚胎移植产羔率高达51.43%(18/35),为整个玻璃化冷冻试验的最佳值。玻璃化冷冻方法简便、迅速,无论是细管法还是OPS法均获得了比较理想的胚胎移植效果。 相似文献