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1.
牛体外受精胚胎一步脱防冻剂冷冻方法的研究 总被引：8，自引：1，他引：7
为了研究适合于牛体外受精胚胎的一步除防冻剂的冷冻方法，特进行两个试验。试验１分别用１．５Ｍ甘油＋０．２５Ｍ蔗糖、１．５Ｍ乙二醇和１．５Ｍ丙二醇作防冻剂冷冻体外受精后第７天，已发育至囊胚阶段的牛胚胎。使胚胎降温至－７℃后，植冰，然后以０．３℃／分的速率降温至－３０℃，立即将胚胎投入液氮中冷冻保存。在３７℃水中解冻胚胎后，使其直接在含１５％胎犊血清（ＦＣＳ）的磷酸缓冲液（ＰＢＳ）中脱去防冻剂。经体外培养７２ｈ后，３组胚胎的孵化率分别为７７．２７％（１０２／１３２）、７３．２４％（１０４／１４２）、４７．９０％（５７／１１９），第１、２组的孵化率极显著高于第３组（Ｐ＜０．０１），说明用１．５Ｍ丙二醇溶液冷冻的胚胎，在解冻后不宜直接在ＰＢＳ中脱防冻剂。试验２比较用不同浓度（１．０Ｍ０１．５Ｍ，２．０Ｍ）的乙二醇和不同投液氮温度（－２５℃，－３０℃，－３５℃）冷冻胚胎的效果。结果表明乙二醇浓度和投液氮温度对胚胎孵化率均无显著影响（Ｐ＞０．０５），各组胚胎的孵化率变动于７４．４４％－８５．４８％之间。 相似文献
2.
体外受精后不同时间收集的牛胚胎的冷冻效果 总被引：2，自引：0，他引：2
比较了体外受精后不同时间收集的牛囊胚期胚胎冷冻后的存活率。试验一收集受精后第６，７，８和９天出现的胚胎，分３步加入０．７５ｍｏｌ／Ｌ甘油和０．５ｍｏｌ／Ｌ丙二醇，将胚胎装入０．２５ｍＬ细管后，放入已降温至５℃的冷冻机内，立即以２℃／ｍｉｎ的速率降温至－７℃，停留５ｍｉｎ后植冰。植冰后５ｍｉｎ，以０．３℃／ｍｉｎ的速率降温至－２５℃，取出胚胎，并立即投入液氮中保存。解冻时，先让细管在空气中暴露１０ｓ 相似文献
3.
两种蔗糖浓度对切割取样鼠胚冷冻解冻效果的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
小鼠晚期桑椹胚、早期囊胚和扩大囊胚，经切割取样分别采用０．３６５Ｍ和０．２５Ｍ蔗糖浓度进一步细管和分步脱除甘油解冻后体外培养发育率分别为６５．５％、４６．４％和７５．４％，两种浓度间差异显著（Ｐ＜０．０５）；分步脱除甘油解冻瑟前者差异不显著（Ｐ＞０．０５），与后者差异极显著（Ｐ＜０．０１）。 相似文献
4.
牛卵泡卵母细胞冷冻保存后发育潜力的研究 总被引：7，自引：0，他引：7
对用３种不同方法（Ａ法：１．０ｍｏｌ／Ｌ甘油平衡，从２０℃开始以１℃／ｍｉｎ的速度降至－℃，植冰，１０ｍｉｎ后以０．３℃／ｍｉｎ降至－３０℃，再以０．１℃／ｍｉｎ降至－３３℃，投入液氮；Ｂ法：１．６ｍｏｌ／Ｌ丙二醇＋０．ｌｍｏ１／Ｌ蔗糖平衡，５℃冰箱中保存１５ｍｉｎ，从Ｏ℃开始按Ａ法中的程序降温；Ｃ法：即玻璃化法）冷冻保存的牛ＧＶ期卵母细胞的发育潜力进行了研究。解冻后，Ｃ组卵母细胞形态正常率显著高于Ａ、Ｂ两组。３种方法冷冻的卵母细胞成熟培养后，平均卵丘扩展率为６０％，其中Ｃ组最高（６９．９％）。卵丘扩展的卵母细胞中，７９．３％发生ＧＶＢＤ，但大多数没有达到ＭＩ期。３组冷冻卵母细胞的体外成熟率、体外受精率分别为１４．２％、８．３％、２０．０％和１０．０％、７．１％、１２．１％，其中Ａ组中有１枚卵裂。 相似文献
5.
以１８Ｍ乙二醇或１６Ｍ丙二醇作抗冻剂冷冻牛胚胎,解冻后在Ｍ－ＰＢＳ中一步脱除抗冻剂体外培养或不脱除抗冻剂直接移植给受体母牛。结果表明用１８Ｍ乙二醇直接移植法的体外培养存活率和移植妊娠率均显著高于１６Ｍ丙二醇组,分别为８４８％比６５５％和４８５％比４００％（Ｐ＜００５）,但与对照组（１４Ｍ甘油常规法）之间无显著差异,分别为８４８％比８６７％和４８５％比５００％（Ｐ＞００５）。 相似文献
6.
脱防冻剂方法对牛体外受精胚胎冷冻后成活率的影响 总被引：10，自引：0，他引：10
为了观察脱防冻剂方法对牛体外受精冷冻胚胎在体内、外发育率的影响,应用常规冷冻法在０．７５ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．５ｍｏｌ／Ｌ丙二醇溶液中冷冻受精后７、８ｄ的囊胚,解冻后在０．２５、０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步或在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂的胚胎孵化率（分别为６８．６％、６２．２％、６８．７％）与用ＰＢＳ／ＦＣＳ六步脱防冻剂的差异不显著（７０．４％,Ｐ＞０．０５）,但在０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂后,孵化率显著降低（４７．６％,Ｐ＜０．０１）。用０．２５ｍｏｌ／Ｌ或０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或海藻糖预先使胚胎脱水后冷冻,解冻后可使胚胎直接在ＰＢＳ中一步脱掉防冻剂,胚胎孵化率（４５．０％～４９．５％）与在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂的相似（５１．５％,Ｐ＞０．０５）。移植试验表明,在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂获得的妊娠率与六步脱防冻剂相似,与在ＰＢＳ中一步脱防冻剂的亦无明显差异,但妊娠率均偏低（２１．４％～３７．５％）。 相似文献
7.
牛体外受精胚冷冻保存的研究 总被引：9，自引：0，他引：9
对牛卵泡卵母细胞体外受精（ＩＶＦ）１６８ｈ的致密桑椹胚、囊胚用常规快速冷冻法、预冷和不预冷的超快速冷冻法进行了冷冻保存试验。结果表明：ＩＶＦ囊胚采用含１０％甘油的常规快速冷冻法、含２．１ｍｏｌ／Ｌ甘油和０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖预冷５ｍｉｎ的一步冷冻法及含２５％甘油和２５％乙二醇预冷５ｍｉｎ的玻璃化冷冻法等３种方法进行冷冻保存，解冻后的继续发育率（６８．０％，５９．０％，６５．７％）均无显著差异（Ｐ＞０．０５），可用快速、简便、预冷的一步冷冻法或玻璃化冷冻法替代常规快速冷冻法；ＩＶＦ致密桑椹胚可用一步冷冻法（２．１ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖）和玻璃化冷冻法（２５％甘油＋２５％乙二醇或２５％甘油＋２５％１，２－丙二醇）进行预冷的超快速冷冻保存；冻前预冷（５ｍｉｎ）能显著提高ＩＶＦ囊胚的冻后形态正常率和继续发育率（Ｐ＜０．０５）；ＩＶＦ囊胚冷冻—解冻后的继续发育率高于ＩＶＦ致密桑椹胚。 相似文献
8.
精液冷冻保存是将精液进行特殊处理，保存在超低温条件下以达到长期保存的目的。通常采用液氮（－１９６℃）和干冰（－７９℃）保存。其最大优点是可长期保存，使用不受时间、地域以及提高种用公牛的利用率。１稀释液配方１２％的蔗糖液７５mL、甘油５mL、卵黄液２０mL。２稀释方法将经过检查合格的精液（活力０．６以上、精子密度中等）按１∶２～５倍稀释液进行稀释，稀释后应保证每个颗粒精液中所含精子数不少于３０００～４０００万个，解冻后呈直线前进的精子数３冷冻在装有液氮的容器上置一铜纱网，距液氮面２cm左右，温度维持在－… 相似文献
9.
本试验研究了①Ａ、Ｂ、Ｃ三个质量等级胚胎的分割效果；②五种不同冷冻方法冷冻裸露半胚的存活情况；③冻前培养３．０、１．５～２．０、１．０小时的裸露半胚存活率。结果①Ａ、Ｂ、Ｃ级胚胎的分割成功率分别为９５．８％（９２／９６）、７且．４％（７０／９８）、３０％（６／２０），三者间差异极显著（Ｐ＜０．０１）；②半胚冷冻前以２０％ＦＣＳ－ＰＢＳ液培养３．０小时后，以五种不同冷冻方法冷冻，均未获得存活半胚；③半胚冷冻前培养３．０、１．５～２．０、１．０小时后，以添加１０％而聚糖的１０％甘油＋０．１Ｍ蔗糖／ＰＢＳ液冷冻，分别获得了０％（０／４５）、６８．８％（１１／１６）、７５．０％（９／１２）的存活率。结果表明，胚胎质量是影响胚胎分割成功率的关键因素，半胚冷冻前的培养时间是影响裸露半胚存活的重要因素。 相似文献
10.
绵羊冷冻胚胎有枚浆冻前Ａ级胚胎解冻后,胚胎等级有所下降,可用胚率为７７．９％,Ａ、Ｂ级胚移植妊娠率分别为３３．３％（１８／５４）和１６．７％（１／６）,差异不显著（Ｐ〉０．０５）;桑椹胚、早期囊胚、中期囊胚、扩张囊胚移植妊娠率分别为２０．８％（５／２５）、４２．９％（６／１４）、３５．７％（５／１４）５ ３７．５％（３／８）,囊胚期胚胎移植妊娠率较高,但差异不显著（Ｐ〉０．０５） 相似文献
11.
影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素 总被引：4，自引：0，他引：4
试验对影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素进行探讨，以找出理想的玻璃化冷冻方法。在测试的５种玻璃化溶液中，含３５％乙二醇（ＥＧ）和１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的溶液（ＶＳ１）对胚胎的毒性最小。用ＶＳ１冷冻桑椹胚和囊胚的理想程序是：在室温下使胚胎分别在２０％ＥＧ和３５％ＥＧ中平衡２、３分钟后，移入ＶＳ１中，０．５分钟内（囊胚也可在２分钟后）投入液氮中冷冻。桑椹胚的存活率为９１．７％（３３／３６），囊胚的存活率为９７．１％（３３／３４）～９７．３％（３６／３７）。８～１６细胞胚胎的理想冷冻程序为：在室温下使胚胎在２０％ＥＧ、３５％ＥＧ中平衡２、３分钟，移入４℃的３７％ＥＧ＋１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中平衡２分或１０分钟后冷冻，胚胎存活率分别为１００％（３７／３７）、８６．１％（３１／３６）。 相似文献
12.
本文论述了猪胚胎冷冻技术发展过程，并分析了胚胎冷冻的可能性原理、猪胚胎对低温的敏感性与影响胚胎冷冻成功率的因素等，得出如下结论：（１）猪胚胎对低温较其它畜种敏感的原因是其胚胎内脂肪含量高于其它畜种。（２）目前适于冷冻的胚胎仅限于孵化前后胚胎。（３）慢速冷冻已基本成功，选用１．５Ｍ甘油作冷冻保护剂，－６￣－７℃植冰，植冰前降温速度１℃／ｍｉｎ，植冰后０．３℃／ｍｉｎ，投氮温度－３５￣－３８℃。（４） 相似文献
13.
德国牧羊犬精液冷冻保存研究 总被引：6，自引：0，他引：6
用手握法采９条德国纯种牧羊犬（２～８岁）精液,在卵黄Ｔｒｉｓ和卵黄－葡萄糖稀释液中添加保护剂甘油和ＤＭＳＯ,液氮熏蒸制作颗粒冻精。结果表明,卵黄－Ｔｒｉｓ稀释液优于卵黄－葡萄糖稀释液。ＤＭＳＯ单独加和与甘油混合加均不利于解冻后精子活率,最佳甘油浓度为４％～６％,始冻温度－１５０℃热平衡温度－１０５℃,入氮温度－１１８℃,保持了正常的冷冻温度曲线,干解冻法解冻后活率高于湿解法（Ｐ〈０．０５）。在最优 相似文献
14.
选用Ａ￣Ｅ５种混合保护液：Ａ．二甲亚砜（ＤＭＳＯ）＋乙醇（ＥＧ），Ｂ．甘油（ＧＬ）＋丙二醇（ＰＧ），Ｃ．ＧＬ＋ＥＧ，Ｄ．ＧＬ＋ＤＭＳＯ，Ｅ．ＰＧ＋ＥＦ，以２种冻前处理方法，对小鼠桑椹胚和囊胚进行一步冷冻，冷冻混合保护液中各种保护剂浓度均为２５％。法的冻前平衡液为ＶＳ２的对倍稀释液；法的冻前平衡液中，前一种保护剂浓度为１０％，后一种保护剂浓度为２０％。胚胎于室温（２０℃）下在ＶＳ１中平衡５ｍｉｎ或Ｖ 相似文献
15.
１日龄ＡＡ肉用雏鸡以马立克氏病强毒（ｖＭＤＶ）人工感染后,马立克氏病（ＭＤ）发病率３３．７５％,死亡率１１．２５％。同健康雏鸡相比,ＩＬ－２诱生活性和Ｔ淋巴细胞增殖反应降低（Ｐ＞０．０５）和显著降低（Ｐ＜０．０５）。ｖＭＤＶ感染雏鸡注射香菇多糖和黄芪多糖,ＭＤ发病率分别为２０％、１７．５％,死亡率分别为７．５％、５％。同感染组相比,感染／香菇组和感染／黄芪组的ＩＬ－２诱生活性和Ｔ淋巴细胞增殖反应均升高（Ｐ＞０．０５）和显著升高（Ｐ＜０．０５）。 相似文献
16.
小鼠桑椹胚简易玻璃化冷冻技术再探讨 总被引：12，自引：0，他引：12
本试验继小鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存成功后，在室温（２５℃）下利用不同浓度的ＥＦＳ玻璃化溶液，对小鼠的桑椹胚简易玻璃化冷冻技术进行再探讨。结果是胚胎在１０％ＥＧ溶液中预先处理５分钟，再移入事先配置好含有ＥＦＳ３０的０．２５ｍｌ塑料细管中１分钟平衡后直接投入液氮中冷冻，解冻后获得的发育率最高（９４％）。冻胚移植后妊娠率和产仔率分别为５６％（９／１６）及４２％（４９／１１６）。与对照组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５） 相似文献
17.
安格斯牛冻胚洲际间引种试验成功 总被引：1，自引：0，他引：1
我们从澳大利亚引入安格斯（Ａｎｇｕｓ）牛７日龄冻胚１６枚。这１６枚冷冻胚胎在液氮中保存８９４天后，用３６℃水浴解冻（２５秒钟），全部回收，在室温２７℃条件下，用１０％蔗糖一步脱除抗冻剂（甘油）１０分钟后，移入２００％犊牛血清ＰＢＳ１０分钟，再移入同样浓度的犊牛血清ＰＢＳ中１０分钟。按常规形态鉴定方法，对胚胎评级，１０枚为可用胚胎，解冻后胚胎可用率为６２．５％（１０／１６。将１０枚可用胚胎用非手术法，移入发情周期与胚胎发育期同步的５头受体牛，结果２头妊娠，移位妊娠率为４０％（２／５）。妊娠足月后，２头受体牛各产公犊１头。在我国首次获得成功。 相似文献
18.
波兰环境微生物学院及环保与渔业生产管理中心最近公布了一项他们的研究。该研究检测分析了贮存在三种温度下（－１１℃、５℃和２０℃）的鱼饲料中４类细菌（蛋白分解菌、氨化细菌、嗜冷细菌、适温细菌）及真菌的存活率。经过７２ ｄ贮存期后，检测结果表明真菌存活率最高（５６％～８０％）。在４种生理细菌群中，适温细菌存活率最高（６． ２５％～９． ５８％），嗜冷菌次之（２． ５％～３．２５％），再次之是氨化细菌（０．０７％～０． １１％），蛋白分解菌存活率最低（０％）。鱼饲料中的蛋白分解菌在－１１℃和５℃贮存温度下在… 相似文献
19.
比较了3种不同浓度的甘油（1.4,1.0,0.7mol/L）和投液氮温度（-25℃、-30℃和-35℃）对牛体外受精胚胎冷冻效果的影响。结果发现,最终投液氮温度为-25℃时,胚胎冻后存活率以1.4mol/L甘油组为最高,同1.0mol/L甘油组相比,差异显著（78.5%vs 64.5%,P〈0.05）;与0.7mol/L甘油组相比,差异极显著（78.5%vs53.5%,P〈0.01）。以1.0mol/L的甘油冷冻,-30℃投液氮的效果优于-25℃的,它们之间冻后胚胎的孵化率差异显著（77.1%vs 64.5%,P〈0.05）。用0.7mol/L甘油冷冻,投液氮温度以-30℃的为最好,冻后胚胎的孵化率（73.3%）极显著（P〈0.01）高于-25℃的（53.5%）。用1.4mol/L甘油冷冻,以-25℃投液氮为最好,冻后胚胎的孵化率（78.5%）显著（P〈0.05）高于-35℃的（65.7%）。结果表明,不同的甘油浓度和投液氮温度对牛体外受精胚胎的冷冻效果有显著的影响。 相似文献
20.
本研究利用三台人工气候箱，探讨不同温度（２６．５～２７／２２．５℃、２９．５／２５．５℃、３２／２８℃）对肉用型种母兔（ＺＩＫＡＮｅｗＺｅａｌａｎｄ）的一些繁殖力指标的影响，结果表明：各组母兔的产仔成活率和仔兔的平均初生重分别为：１００％和５０．９ｇ，８４．６％和４１．８ｇ，５２．９％％和２９．３ｇ，且分别达到差异极显著（Ｐ＜０．０１）和差异显著（Ｐ＜０．０５）的水平，均随着温度的升高而下降。 相似文献