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1.
为完善转il-4基因番茄的筛选及鉴定工作,本实验比较了il-4基因在PPT抗性筛选与非PPT抗性筛选植株中的阳性率,对il-4基因在T6代及杂交F1代番茄中的传递规律和植株表现型进行调查。本文对L402、‘中疏4号’、‘大黄’三个品种的T6代及杂交F1代植株进行PPT抗性筛选及非PPT抗性筛选,特异性的PCR扩增、PCR-Southern杂交。研究结果表明,il-4基因在非PPT抗性筛选植株中的阳性率高于PPT筛选植株,T6代及F1代植株中il-4基因的分离情况不符合孟德尔分离规律,其分离情况远远低于3:1的分离比率。转il-4基因番茄与非转基因植株（对照）相比发现,转基因植株在一至多个性状上发生了不同程度的变异,杂交F1代与亲本T6代植株相比,杂交F1代有少数组合存在杂种优势。 相似文献
2.
花粉管通道法介导il-4基因转化大白菜(Brassica pekinensis Rupr.)的研究初探 总被引：1，自引：0，他引：1
通过花粉管通道法介导il-4基因转化大白菜,利用PPT抗性筛选、PCR扩增和PCR-Southern杂交技术检测转化后代。本文针对品种、人工授粉时间和转化操作时机可能对il-4转化率产生的影响进行了研究。试验结果表明,il-4基因对品种有偏爱,哈白二号的转化率高;不同的人工授粉时期对转化率有影响,开花期授粉效果好;不同的转化时机对转化率也有影响,人工授粉后24h左右进行转化操作效果好。哈白二号在花期授粉后24h左右进行转化操作（AH）,il-4的转化率达1．15％。对il-4基因在大白菜T2代中的传递规律进行观察,发现PPT的抗性分离情况,除哈白二号-2单株的后代外,其余均不符合抗性植株数：非抗性植株数=3：1的孟德尔分离规律;而il-4的分离情况,也不符合阳性植株数：阴性植株数=3：1的孟德尔分离规律。 相似文献
3.
通过对花粉管通道法获得的T7转MvNHX1基因的10个棉花株系和转MvP5CS基因的3个棉花株系与对照非转基因棉花D5在温室内盐和干旱胁迫下的发芽率、生理生化指标以及田间花期干旱胁迫下农艺性状和纤维品质进行分析发现:温室内盐和干旱胁迫后,转基因棉花叶片叶绿素含量、脯氨酸含量均高于对照,而丙二醛含量低于对照;田间花期干旱胁迫下,2种转基因植株果枝数、有效果枝数、铃数、有效铃数、铃重、子棉、皮棉、衣分、子指和衣指均高于对照,说明转MvNHX1基因和转MvP5CS基因植株在干旱逆境下的产量高于非转基因;经花期干旱胁迫后,2种转基因棉花的纤维断裂伸长率、短纤维率、马克隆值和纺纱一致性指数优于非转基因棉花D5。综合分析表明:2种转基因棉花的耐盐抗旱性均有提高,其中转MvNHX1基因棉花的耐盐性优于转MvP5CS基因棉花植株,而转MvP5CS基因棉花植株的抗旱性优于转MvNHX1基因棉花植株。 相似文献
4.
Bar基因的亚麻花粉管通道法转化 总被引：5，自引：4，他引：1
[研究目的]为鉴定T1代转基因亚麻植株中抗除草剂基因(bar)整合是否成功。[方法]通过花粉管通道法将bar基因导入转化植株,以叶片涂抹法对T1代转化植株进行田间草丁膦最低致死浓度筛选;以最低致死浓度草丁膦进行田间喷施后筛选耐受草丁膦药液的抗性植株,并用PCR检测bar基因阳性的抗性植株数目。[结果]草丁膦对T1代转化植株的最低致死浓度为100 mg/L。得到耐受草丁膦药液的抗性植株44株,PCR检测结果表明,8株为PCR阳性植株,平均转化率为18.2%。[结论]花粉管通道法将bar基因成功转入亚麻基因组。 相似文献
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花粉管通道法获得棉花转基因株系主要农艺性状变异分析 总被引：5，自引：1，他引：4
通过对花粉管通道法获得的38个棉花转基因株系稳定后代T5代主要农艺性状的变异进行分析发现,外源基因的导入可引起受体植株后代农艺性状可遗传的非靶标变异,且变异广泛,多个农艺性状出现了显著性变异.叶长和叶宽均有变短的趋势,但裂叶缺刻深浅变异方向不定,说明部分叶片变得更加皱缩.株高变异方向不定.与对照相比,吐絮期提前,单株结铃数增加,使皮棉和子棉产量均增加.纤维品质变异也很大,如比强度增大、麦克隆值变大、纤维长度也显著增加;短纤维指数变异方向不定. 相似文献
6.
转双价抗虫基因BmkIT-Chitinase玉米株系的获得 总被引：2，自引：0，他引：2
通过超声波辅助花粉介导法,将双价抗虫基因BmkIT-Chitinase分别导入以玉米自交系昌7-2及郑58的花粉为受体的不同基因型的自交系中。本研究共处理玉米雌穗1072穗,获得T0代种子1563粒,经卡那霉素初筛,T1代～T4代PCR及SouthernBlot杂交分子跟踪检测共获得20个转化株系,田间抗虫性鉴定表明共有16个转化株系与对照在抗虫性方面有显著差异,且此抗性随着各代稳定遗传。农艺性状调查结果表明,所获得的转基因玉米株系中大部分材料的农艺性状与对照无显著差异,除了N55材料及N20-1材料。N55材料的穗位高度与对照相比略低6±0.5cm,而穗粒数增加75±5粒。而N20-1材料百粒重增加5±0.5g。因此,转入此双价抗虫基因对玉米农艺性状影响不是很大。经过分子检测、田间抗虫性鉴定及农艺性状调查我们最终选育了9个转双价抗虫基因昌7-2自交系优良株系,6个郑58转双价抗虫基因自交系优良株系。 相似文献
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大豆花粉管通道技术转化雪花莲凝集素(GNA)基因 总被引：11，自引：0，他引：11
采用花粉管通道技术,用雪花莲凝集素基因（Galanthus nivalis agglutinin,GNA）转化吉林省主推品种吉林20号、吉林30号、吉林45号品种大豆。通过接蚜鉴定和PCR鉴定,从所获得的种子苗中筛选出转基因植株。对转基因植株的后代进行分子生物学鉴定：（1）PCR分析,转基因植株97TGR1和97TGR2的T2代表现阳性,第5代表现阳性纯合;97TGR1、97TGR2和98FD1～98FD20的T3代Western blotting检测结果证明,GNA基因在蛋白质水平有表达,最高表达量占总可溶性蛋白的0．7％;97TGR1、98TGR2和99JI45 TGR2的Southern blotting检测结果显示,GNA基因已插入大豆基因组;（2）遗传学分析,97TRG1的T2代呈孟德尔3：1分离,97TGR2的T3代出现种皮颜色不规则分离。经过抗蚜性鉴定和连续的筛选,获得抗性纯系;（3）抗蚜性鉴定,转基因株的T1、T2世代转基因植株可抑制蚜虫繁殖量50％～90％;（4）品系鉴定,转基因大豆的抗蚜性达到农学标准抗（R）和高抗（HR）水平;大面积环境释放试验自然感蚜鉴定,转基因系蚜虫发生的高峰比对照延迟,高峰期过后群体蚜量的下降速度也比对照快。本研究认为,大豆花粉管通道技术可以利用于大豆的转基因研究和应用中,GNA基因在改良大豆的抗蚜性上是可取的。 相似文献
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花粉管通道法转化大豆的分子表征 总被引：3，自引：0，他引：3
采用花粉管通道技术将含有gus基因的pBI121质粒DNA导入辽豆14，从处理的100朵花中获得53粒种子。经PCR检测53粒种子的幼苗，共检测出6株阳性植株。采用RT—PCR和GUS组织化学染色法对所获得阳性植株进行检测，其中2株幼苗(T0代17号和33号)均出现阳性结果，进一步对这2株阳性植株进行Southern blot检测，同样获得了阳性结果。上述检测结果表明，gus基因已整合到染色体上并得到了表达。对转基因植株后代进行了PCR跟踪检测，结果从17号株系的28株中检测出19株阳性植株，33号株系的35株幼苗中检测出17株阳性植株，表明gus基因可以在转基因植株后代遗传。本研究结果为大豆花粉管通道转化技术提供了比较充分的分子生物学证据。 相似文献
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高盐是限制作物生长发育和产量最严重的非生物胁迫之一,提高作物的耐盐性已成为一个日益紧迫的研究课题。将含有AtNHX1基因的表达载体pFYC-AtNHX1和含有bar基因的质粒pCAMBIA3300等量混合,采用花粉管通道法共转化番茄。经PPT抗性筛选后,PCR扩增获得12株导入了AtNHX1基因的番茄植株,Southern杂交分析表明该基因已经整合到番茄基因组中,通过RT-PCR检测到了AtNHX1基因的表达。在150 mmol/L NaCl处理下,转基因植株T1代对NaCl耐性显著增强。对转AtNHX1基因番茄T2代进行80 mmol/L碱性盐NaHCO（3pH 8.25）胁迫,以此评价转AtNHX1基因番茄对碳酸盐的耐受性。叶片相对电导率检测结果表明,AtNHX1基因的导入确实提高了番茄对碱性盐NaHCO3的耐受性。培育并栽种转AtNHX1基因的耐盐碱番茄将会降低盐渍化环境对番茄生长发育的影响。 相似文献
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转codA基因提高番茄植株的耐热性 总被引：3，自引：0，他引：3
以野生型番茄(cv. Moneymaker)和转codA番茄为材料,用不同温度(25、30、35、40、45和50℃)分别处理2 h,测定叶片净光合速率(Pn)、PSII最大光化学效率(Fv/Fm)、过氧化氢(H2O2)含量、丙二醛(MDA)含量、相对电导率(REC)和抗氧化酶活性等生理指标;42℃高温处理0、3和6 h后,检测热响应基因的表达量以及D1蛋白的含量,研究高温胁迫对上述参数的影响,探讨转codA基因提高番茄叶片耐热性的机制。。结果表明,高温胁迫下,转codA基因番茄叶片Pn和Fv/Fm的抑制程度明显低于野生型,H2O2、MDA的积累量以及REC均低于野生型,而且明显增强了过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性。此外,转codA基因番茄叶片中抗氧化酶基因和热胁迫基因的表达水平均高于野生型,而D1蛋白的降解水平低于野生型。转codA基因番茄体内合成的甜菜碱提高了转基因番茄的耐热性,这与提高和维持较高的抗氧化酶活性、促进热激响应基因的表达及减缓D1蛋白的降解等有关。 相似文献
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多聚半乳糖醛酸酶反义基因转化加工番茄 总被引：1，自引：1，他引：0
利用农杆菌EHA105介导转化,将PG基因转入加工番茄B04植株。通过对影响外植体转化的因素（预培养时间、侵染时间、农杆菌浓度、共培养时间）进行了深入探讨,建立了加工番茄品种B04子叶外植体的高频遗传转化体系,并通过农杆菌介导法将PG反义基因导入加工番茄品种B04,获得PG抗性植株。其最佳预培养时间为2天;当农杆菌的菌液浓度为OD600＝0.6、侵染时间为10 min时转化率最高;其最佳的共培养时间为2天。对获得的41株抗卡那霉素转基因植株进行PCR检测,其中9株为阳性植株,其转化率为22%。初步证实了部分加工番茄B04植株中已导入PG反义基因。 相似文献
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SlHB8属于HD-ZipⅢ转录因子家族,通过分析番茄已有的RNA-seq数据,发现SlHB8可能对单性结实的形成具有一定的调控作用。为了研究SlHB8对番茄单性结实形成的生物学功能,本研究利用Gateway克隆技术,通过SlHB8的同义突变SlHB8Ris的miR165/166识别位点来构建该基因的植物超表达载体。通过农杆菌介导法对番茄进行遗传转化,PCR检测鉴定阳性转化植株,对T0代阳性植株进行qRT-PCR表达量分析,结果表明阳性转化植株中SlHB8基因的表达量均有不同程度的提高,从而为阐明SlHB8基因的生物学功能提供了一定的理论参考。 相似文献
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转ER-sHSP基因番茄植株的耐盐性检测 总被引：1，自引：1，他引：0
热激蛋白在植物应对各种环境胁迫的应答中执行重要的功能并存在交叉保护现象。前期结果表明内质网小分子热激蛋白（ER-sHSP）的过量表达能够显著增强转基因番茄的抗冷能力,为继续深入研究ER-sHSP的生理功能,本文对高盐胁迫下转ER-sHSP基因番茄的耐受性进行了检测,结果显示：与对照相比,转基因番茄抗性表型明显,持有较高的植物干鲜重,脯氨酸含量大幅度提高,SOD酶活性增加明显,而MDA含量和电导率则较低。说明ER-sHSP的过量表达提高了转基因番茄的抗盐胁迫能力 相似文献
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Erik Jongedijk Henk Tigelaar Jeroen S. C. van Roekel Sandra A. Bres-Vloemans Ilma Dekker Peter J. M. van den Elzen Ben J. C. Cornelissen Leo S. Melchers 《Euphytica》1955,85(1-3):173-180
Summary Simultaneous expression of a tobacco class I chitinase and a class I -1,3-glucanase gene in tomato resulted in increased fungal resistance, whereas transgenic tomato plants expressing either one of these genes were not protected against fungal infection. After infection with Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici, a 36% to 58% reduction in disease severity was observed in resistant tomato lines. Two transgenic lines largely recovered from the initial infection by the time wild-type tomato plants had died.The overall results are consistent with the observation that class I chitinases and class I -1,3-glucanases synergistically inhibit the growth of fungi in vitro and provide the first experimental support to the hypothesis that such synergy can contribute to enhanced fungal resistance in planta. 相似文献
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Morphological characterisation and agronomic evaluation was conducted on 12 transgenic broccolilines containing a tomato antisense1-aminocyclopropane-1-carboxylic
acid (ACC) oxidase gene. Plants of three cultivars: Shogun (Sh), Green Beauty (Gy) and Dominator (D), were regenerated from
hairy root cultures after co-cultivation with Agrobacterium rhizogenes strain A4T harbouring the binary vector pLN35. The T-DNA of pLN35 contains genes encoding a tomato antisense ACC oxidase
gene (35S-ACC-5′7′) and a neomycin phosphotransferase II gene (NOS-NPTII-NOS) for kanamycin resistance. The transgenic plants
were transferred to a greenhouse and fertile plants obtained. Integration of the foreign DNA into the broccoli genome was
confirmed by the polymerase chain reaction and Southern analyses. Transgenic plants showed evidence of hairy root (HR)-induced
morphological changes to varying degrees. Of the 12 characterised transgenic lines, three lines(Gy/7, D/1 and D/2) performed
within the limits of acceptability for all head quality parameters analysed (size, density, colour, shape and leafiness).
The ethylene production from stalks of four field-grown transgenic lines of Green Beauty broccoli showed significant reductions
in activity relative to the control 98 h after harvest. The Dominator transgenic lines D/1 and D/2 showed significant improvements
in head colour relative to the control from 48 h after harvest. These results are consistent with the ethylene production
patterns determined previously for these lines. The head colour results are consistent with previous results suggesting that
two enzyme systems may be involved in broccoli senescence, giving two bursts of ethylene production, with only the second
burst inhibited by the antisense ACC oxidase gene used.
This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date. 相似文献
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为了进一步阐明miRNA在番茄不同生长发育阶段尤其是在果实成熟阶段的调控途径,利用聚合酶链式反应(PCR)从番茄(Solanum lycopersicum)的cDNA克隆出miR172基因核心片段,将该基因片段,以及pCAMBIA1300-221载体通过特异性的限制性内切酶双酶切,然后将miR172片段正向连接到载体上,转化大肠杆菌Trans5α,鉴定重组质粒正确后,利用冻融法将重组载体转入农杆菌EHA105中。再次回转大肠杆菌验证获得的重组载体,通过PCR以及双酶切鉴定是否符合预期结果,将测序结果与NCBI上的基因序列相比较,同源性高达100%。结果成功构建了适用于番茄农杆菌遗传转化的植物表达载体,接下里进行转基因植株的培育和鉴定。为通过miR172基因进一步研究果实成熟衰老机理奠定了物质基础。 相似文献
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磷对大豆生长发育至关重要,土壤有效磷缺乏严重影响其产量和品质。目前已有学者通过转基因手段将磷高效相关基因转入大豆,并获得转基因新材料,但多数集中于单基因转化,而双基因共转化研究甚少。本研究在前期获得转磷高效相关基因GmPHR1、GmPAP4大豆新材料基础上,利用农杆菌介导与常规杂交技术进行双基因共转化,结果发现,采用这2种方案均可实现双基因共转化,获得了经PCR及DNA测序分析验证正确的转GmPHR1与GmPAP4双基因新材料“JD12-PHR1-PAP4”。 相似文献