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1.
将脱囊、纯化后的堆型艾美耳球虫早熟减毒株子孢子,以Hanks液稀释成40万个/ml。取已贴壁的鸡胚小肠上皮细胞培养瓶50瓶(每瓶细胞量为400万个)分成5组,每组10瓶。每一细胞瓶接种1×10~4个子孢子,而后放入40℃培养箱内,每天换维持液1次。第Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ组分别在接种后第72、96、120、144、168小时收获,收获后卵囊 相似文献
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《西南农业学报》2017,(5)
【目的】为调查兔大型艾美尔球虫四川株的致病性和免疫原性。【方法】本研究利用实验室分离到的大型艾美尔球虫四川株进行了动物感染试验。【结果】5×10~3和5×10~4个卵囊组的SPF兔在接种后第4~9天,出现轻微的食欲减少症状;5×10~5组在接种后第6~8天持续中度腹泻,第8天体重与对照组有明显差异(P≤0.05),但均无死亡现象。感染剂量为5×10~3时卵囊产量最多,为2.31×10~8;免疫原性实验中,7×10~5个卵囊攻毒后,5×10~3卵囊免疫组卵囊排出最少,为6.28×10~4,各组体重与对照组相比无明显差异。【结论】大型艾美尔球虫四川株致病性较弱,但免疫原性良好,可作为兔球虫疫苗的备选组分。 相似文献
3.
采用单卵囊分离技术,用30只7～10日龄无球虫美国七彩山鸡分离纯化环颈雉艾美尔球虫卵囊.75只3周龄无球虫山鸡随机分为四组,第1,2,3组每只山鸡分别经口接种9070,5.0×10~4,9.98×10~4个孢子化环颈雉艾美尔球虫卵囊,第4组为对照组.结果表明,感染组在感染后第4d 出现临床症状,第6d 出现血便,第7d 第2,3组开始出现死亡,死亡率分别为19%和40%.大体剖检病变以盲肠病变最为显著,表现为盲肠粘膜中前期出血,中后期盲肠短缩,粘膜部分脱落,肠壁变薄或增厚,肠内形成干酪样肠核,肠壁上 相似文献
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鸡巨型艾美耳球虫早熟株选育及其生物学特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为选育鸡巨型艾美耳球虫(E.maxima)早熟株,并对其生物学特性进行研究,采用早熟选育法对E.maxima亲本株进行连续鸡体传代以获得早熟株,再分别将鸡E.maxima亲本株和早熟株孢子化卵囊以不同剂量口服接种14日龄无特定病原(SPF)雏鸡,测定E.maxima亲本株和早熟株的潜隐期、卵囊形态大小,并分析比较其致病性强弱和繁殖力高低。结果表明,成功选育出潜隐期为113 h的鸡E.maxima早熟株,其卵囊长和宽均显著小于亲本株卵囊。在整个试验过程中,各组鸡接种E.maxima亲本株和早熟株孢子化卵囊后均无死亡现象;当鸡E.maxima亲本株和早熟株孢子化卵囊接种剂量为0.5×10~4～20.0×10~4个/羽时,等剂量下E.maxima早熟株组鸡的相对体质量增加率显著大于亲本株组;接种量在10.0×10~4～20.0×10~4个/羽时,等剂量下E.maxima早熟株组鸡的肠道病变记分显著低于亲本株组;随接种剂量的增加,E.maxima亲本株和早熟株组鸡的相对体质量增加率逐渐降低,临床症状逐渐加重。此外,相同接种剂量下,E.maxima早熟株组卵囊产量均显著低于亲本株组,前者卵囊产量是后者的60%～75%;但随接种剂量的增加,E.maxima亲本株和早熟株组单卵囊繁殖力均呈下降趋势。综上,选育的鸡E.maxima早熟株与亲本株相比,致病力减弱、繁殖能力降低,能够为球虫多价活疫苗提供E.maxima虫种,以进一步加强鸡球虫病的防治。 相似文献
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《云南农业大学学报(自然科学版)》2016,(6)
采用浸渍法在室内生物测定了金龟子绿僵菌KMa0107菌株对马铃薯块茎蛾2~4龄幼虫的毒力,并运用"时间—剂量—死亡率"模型分析了其致死剂量和致死时间等致病效应。结果表明:绿僵菌KMa0107菌株对马铃薯块茎蛾幼虫具有良好的侵染致病作用,接种处理后各龄幼虫的感病死亡率随接种密度的升高而增加,当用1.15×10~8m L~(-1)密度接种后第7天时,马铃薯块茎蛾2、3和4龄幼虫的累计死亡率分别为96.67%、90.00%和83.33%,感病顺序表现为2龄3龄4龄。用金龟子绿僵菌KMa0107菌株接种马铃薯块茎蛾2、3、4龄幼虫后第3~7天时,LC_(50)估计值分别为1.85×10~6~1.10×10~5、6.59×10~7~2.41×10~5和3.69×10~7~5.85×10~5m L~(-1),LC_(90)估计值分别为2.43×10~8~1.44×10~7、7.97×10~8~2.93×10~7和4.34×10~9~6.89×10~7m L~(-1)。用1.15×10~5~1.15×10~8m L~(-1)孢子悬浮液接种马铃薯块茎蛾2、3、4龄幼虫后,LT_(50)值分别为5.91~1.33、4.18~1.67和5.14~2.42 d。该研究表明:金龟子绿僵菌KMa0107菌株对马铃薯块茎蛾具有良好的侵染致病效应,在马铃薯块茎蛾生防制剂开发中具有良好潜力。 相似文献
6.
【目的】建立一套稳定可靠且更符合自然条件下发病的香蕉枯萎病苗期抗性鉴定方法,为香蕉枯萎病抗性种质的筛选评价提供参考。【方法】以尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种(Fusarium oxysporum f. sp. cubense 4,Foc4)为供试病原菌,分别采用伤根淋菌接种法、浸根接种法及菌土接种法接种感病香蕉品种巴西蕉,比较分析不同处理种植基质中病原菌孢子浓度的动态变化及植株发病情况,优选最佳的接种方法。采用Foc4不同孢子浓度菌土接种抗、感种质材料,统计发病情况,比较抗性评价效果;应用菌土接种法对31份香蕉种质进行枯萎病苗期抗性鉴定,考察其评价效果。【结果】采用不同接种方法,巴西蕉杯苗种植基质中Foc4孢子浓度变化、发病率和病情指数存在较大差异,其中,采用菌土接种法,种植基质中Foc4孢子浓度稳定保持在原始接种浓度1.0×106～1.1×106个/g土;采用浸根接种法,种植基质中Foc4孢子浓度呈先升后降的变化趋势,并于21 d达最大值(1.0×106个/g土),28 d降至0.5×106个/... 相似文献
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8.
大丽轮枝菌致病性相关突变体快速筛选体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】建立适合于大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）致病性相关突变体的快速筛选体系,为突变库中与致病性相关突变体的系统筛选和鉴定提供技术支撑。【方法】棉花幼苗接种于5.0×104、5.0×105、5.0×106、5.0×107和5.0×108孢子/mL的孢子悬浮液30 min,通过病情指数调查明确引起棉花黄萎病发生的病原菌浓度范围;对培养于培养瓶的大丽轮枝菌分别加入15、25、35和45 mL的灭菌水,利用血球计数板检测洗脱的孢子浓度,明确不同体积灭菌水对洗脱孢子悬浮液浓度的影响;以保存于96孔板的突变体为单位,在培养皿上进行单孢分离并挑取单个孢子于培养瓶中扩繁培养,培养后于培养瓶中直接加入适宜体积灭菌水洗脱孢子,并将棉花幼苗直接置于含有孢子悬浮液的培养瓶中处理30 min,接种后继续培养14 d并调查结果;致病性相关突变体的可靠性检验采用定量菌液蘸根接种法,每个突变体接种30株棉花幼苗,3个重复,孢子浓度为5.0×106孢子/mL,每株棉花幼苗按接种5 mL菌液计算,处理30 min,分别在第5、8、11和14天调查病情指数。【结果】明确了适合于大丽轮枝菌致病力快速鉴定的接种孢子浓度为＞5.0×105孢子/mL;建立了大丽轮枝菌培养方法,单孢纯化培养5 d,培养瓶中扩大培养9 d,确定了快速定量制备孢子悬浮液的洗脱体积为25 mL,测试的20个突变体的洗脱孢子浓度范围在（2.55±0.58）×106-（1.72±0.25）×107孢子/mL;优化了单孢分离、扩大培养、孢子悬浮液制备、接种、继续培养和结果统计等环节,建立了大丽轮枝菌致病性快速鉴定流程,进一步统筹设计构建了大丽轮枝菌致病性相关突变体快速筛选体系;测试表明该体系1人1个循环共7个流程可完成1 344个突变体筛选,周期54 d,工作量为21人日;采用定量菌液蘸根法重复验证结果,突变体致病力同样显著下降,与快速筛选体系的鉴定结果一致,表明该体系适用于大丽轮枝菌致病性相关突变体的快速筛选。【结论】通过棉花幼苗种植、突变体单孢分离、扩繁培养、孢子悬浮液制备、接种、结果统计等环节的优化和标准化,构建了适合于大丽轮枝菌致病性相关突变体的快速筛选体系,为后续致病相关基因的分离提供了技术支撑。 相似文献
9.
《上海农业学报》2016,(2)
为探讨不同地理来源的球孢白僵菌对甜菜夜蛾种群的控制效果,测试了3个地区4株球孢白僵菌菌株孢子悬浮液对甜菜夜蛾2龄幼虫的致死效应,并对其致死效果进行了时间-剂量-死亡率(TDM)模型拟合。结果表明:在处理后第4—7天球孢白僵菌菌株BD-038(河北保定)、2096N(上海)、菌株A(广东广州)、菌株B(广东广州)对甜菜夜蛾幼虫的致死中浓度(LC_(50))(单位:孢子/mL)分别为5.46×10~5—3.41×10~7、1.32×10~7—2.31×10~8、1.76×10~7—5.47×10~8、2.94×10~8—6.63×10~9,其中菌株BD-038在1×10~6—1×10~8孢子/mL的致死中时间(LT_(50))分别为6.4854—3.6689 d,菌株2096N和菌株A在1×10~8孢子/mL的LT_(50)分别为4.7565 d和5.2085 d。由此表明菌株BD-038对上海地区甜菜夜蛾幼虫具有较高的毒力。 相似文献
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1984～1986年通过田间自然鉴定和接种鉴定的方法,研究了原产我国的葡萄属18个种或变种,88个株系对黑痘病和白腐病的抗性。结果表明,这些种感染黑痘病的严重度为2.33～12.78％,在自然发病条件下不感白腐病,接种后白腐病的发病率为5.00～92.50％。种内不同株系间也存在着抗病和感病的类型。本文还对接种方法进行了探讨。研究表明,田间喷雾接种黑痘病的浓度为1×10~4孢子/ml;白腐病接种,田间以针刺果实2×10~5孢子/ml和室内以针刺果实2×10~6孢子/ml为宜。 相似文献
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球孢白僵菌菌株MZ041016对马铃薯块茎蛾的毒力测定 总被引：2，自引：0，他引：2
为评价球孢白僵菌菌株MZ041016对马铃薯块茎蛾的致病力,以马铃薯块茎蛾3龄幼虫为靶标害虫,采用浸叶法进行了毒力测定.结果表明,马铃薯块茎蛾3龄幼虫的死亡率与MZ041016的分生孢子浓度成正比,在孢子浓度为4.0×10~8个/ml时,最大累计校正死亡率达88.63%,致死中时间LT_(50)为4.58 d;孢子浓度为4.0×10~7个/ml时,累计校正死亡率达76.42%,LT_(50)为5.17 d;4.0×10~6个/ml分生孢子浓度下,LT_(50)是6.31 d,累计校正死亡率为69.81%;4.0×10~5个/ml分生孢子浓度下,LT_(50)是8.95 d,累计校正死亡率为41.74%;4.0×10~4个/ml孢子浓度下,累计校正死亡率为24.69%.5～8 d的致死中浓度依次为4.31×10~8、4.039×10~7、3.232×10~6、4.04×10~5个/ml. 相似文献
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4个抗、感枯萎病西瓜品种浇注接种西瓜枯萎病菌后,随着接种孢子浓度的增大,发病期提早,枯死株增多,病情加重。高感苏蜜1号和中感118在不同接种体浓度下的抗枯萎病性差异随接种后时间延长而缩小,最终显示相同的抗性级别。中抗8620在低接种体浓度(20×10~6孢子/钵)下显示高抗,高抗Sugarlcc在高接种体浓度(20×10~6孢子/钵)下降为中抗,表明接种体浓度对抗病品种抗枯萎病性的影响要大于感病品种。 相似文献
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采用鸭源贝氏隐孢子虫卵囊经口感染2日龄雏鸡,感染剂量分别为8×10~5,16×10~5,32×10~5,64×10~5个/只,设空白对照组.在 PID5,PID10,PID25各取2只鸡进行病理剖检并取其喉头、气管、法氏囊进行扫描电镜观察.在 PID20和 PID25对各试验组动物进行称重,并在 PID25全剖杀实验动物采摘法氏囊并称重;计算各组动物法氏囊与体重元比.结果表明:接种后第4 d 在各组鸡粪便中查到隐孢子虫卵囊.持续排卵囊时间25 d 左右;排卵囊高峰期分别为8×10~5为 PID8～15,16×10~5为 PID12～16,32×10~5为 PID5～16,64× 相似文献
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【目的】探明球孢白僵菌对不同寄主植物来源蚜虫侵染致病力的差异,为烟蚜高毒力杀虫真菌菌株筛选提供依据。【方法】以烟草品种K326和红花大金元为烟蚜来源寄主,采用浸渍法进行生物测定,运用"时间—剂量—死亡率"模型分析侵染致病的时间和剂量效应,利用生殖力表法分析接种处理后烟蚜的生殖力特征。【结果】球孢白僵菌Bb0816菌株对红花大金元和K326烟草品种烟蚜均具有较强的侵染致病力,符合"时间—剂量—死亡率"模型模拟,侵染效应常数分别为0.527和0.532。接种处理后,红花大金元品种烟蚜的死亡率上升最快,在第4～5天达到死亡高峰,而K326烟草品种烟蚜则于第5～6天才达到较高死亡率。从剂量效应来看,该菌株对红花大金元烟草上烟蚜同一时间点的LC_(50)和LC_(90)也小于K326。从时间效应来看,在相同接种剂量下,该菌株对红花大金元烟蚜的LT_(50)和LT_(90)均小于K326;从烟蚜生殖力参数来看,在1.35×10~5～1.35×10~8孢子/mL密度下,红花大金元上烟蚜的内禀增长率rm、净生殖率R_0均低于K326烟蚜,也显著低于对照;在1.35×10~3、1.35×10~4和1.35×10~5孢子/mL处理下,红花大金元和K326烟草上烟蚜的世代历期间无显著差异,而在高浓度的1.35×10~7和1.35×10~8孢子/mL处理下红花大金元烟草上烟蚜世代历期显著小于K326烟蚜。【结论】烟蚜寄主烟草品种差异影响球孢白僵菌对烟蚜的毒力,在一定剂量范围内,球孢白僵菌对红花大金元烟蚜的侵染致病作用强于K326烟草烟蚜。 相似文献
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利用绿僵菌菌株SY-2,WC-1,SX-2,HK-5 QH-4,HY-4,YP-6,SS-2对椰心叶甲幼虫和成虫的毒力进行了测定, 采用时间-剂量-死亡率模型分析了绿僵菌对椰心叶甲的毒力。结果表明,其致病力强弱与菌株种类和接种剂量有密切关系,在1.0×106-1.0×108个/mL孢子悬浮液接种处理后第10天,椰心叶甲3龄幼虫累积死亡率均为74%～92%,接种SY-2菌株的孢子浓度在1.0×108个/mL情况时,对3龄幼虫的死亡率为96.70%,LT50为3.8d,与HY-4,YP-6,和SS-2,(死亡率88.36%)相比具有显著差异（P<0.05）;在1.0×106~10×108个/mL孢子悬浮液接种处理后第10天,椰心叶甲成虫累积死亡率53%～76%,接种SY 2菌株的孢子浓度在1.0×108个/mL情况时,对成虫的死亡率为85.03%,LT50为5.4d,与SS-2（死亡率为70%）相比,SY-2,WC-1和SX-2具有显著差异（P<0.05）;另外,观察发现,SY-2菌株具有很强的2次侵染能力。 相似文献
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3组雏鸡分别于 1日龄和 1 0日龄采用滴鼻 滴鼻、滴鼻 肌注和肌注 肌注程序 2次接种烟曲霉菌丝灭活苗或福氏完全佐剂灭活苗。二免后第 1 1天采血检测各组免疫鸡血清抗体水平 ;第 1 2天采用相同剂量 ( 5× 1 0 9孢子 /只 )烟曲霉菌孢子攻毒感染 ,测定各组雏鸡免疫保护率、生长发育及肺脏与大脑烟曲霉菌分离率。结果表明 ,各免疫组雏鸡的血清抗体水平、免疫保护率、生长发育与霉菌分离率差异不明显 ,血清抗体OD值为 0 .53～ 0 .82 ,免疫保护率为 70 %～ 85% ,比对照鸡平均多增重 33.6 4～ 6 2 .92 g( 36日龄 ) ;存活雏鸡肺脏霉菌分离率 4 1 .2 %～ 57.1 % ,含量 2 .4× 1 0 4～ 4 .3× 1 0 5 孢子 /g,大脑霉菌分离率 2 3.5%～ 35.7% ,含量3.3× 1 0 3 ～ 2 .4× 1 0 4孢子 /g。表明滴鼻接种与肌注免疫一样可以引起血清抗体应答 ,最佳免疫程序为 1日龄和 1 0日龄分别滴鼻接种烟曲霉菌丝灭活苗和肌注烟曲霉菌丝福氏完全佐剂灭活苗 相似文献
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将180只ICR小鼠随机分为试验组和对照组,每组90只。在试验组小鼠两腹侧壁对称取2个点皮下注射大熊猫源枝孢样枝孢霉菌悬液(1×10~6 cfu/mL),接种12 h后(第1天),观察小鼠体况、接种部位表现,最后处死小鼠并取其接种部位的皮肤组织进行组织病理学检查和逆培养,用Image–Pro Plus 6.0统计病理切片中单位面积内免疫细胞数、孢子数和菌丝数,之后每隔24 h按上述步骤同样处理和观察。结果表明:接种后第1～8天小鼠体表特征变化不明显,小鼠机体免疫细胞由大量聚集到逐步减少,孢子与菌丝数由多到少又逐渐增加,处于萌发生长阶段;接种后第9～10天,接种部位出现小红斑,皮肤出现结节状损伤,各器官之间未粘连,其余症状不明显,免疫细胞持续增多;接种后第11～25天,接种部位红斑面积增大,损伤加大,颜色变深,有增生物,小鼠出现瘙痒症状,饮食明显减少,免疫细胞持续增多后逐步减少,孢子与菌丝数减少后急剧增加,再减少后又急剧增加,在第17、25天出现2次高峰;接种后第26天后小鼠饮食持续减少,接种部位出现局部坏死、黏膜粘连等症状,孢子和菌丝数逐渐减少至无。可见,枝孢样枝孢霉感染小鼠后第1～8天为潜伏期;第9～10天为前驱期,第11～25天为发病期,第26天后为转归期。 相似文献
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《新疆农业大学学报》2017,(2)
为了评价白僵菌NDBJJ-BFG及其与吡虫啉混用对马铃薯甲虫的防治潜力。采用喷雾施药法测定了田间环境下白僵菌及其与吡虫啉混用对马铃薯甲虫的防治效果。结果表明,菌株NDBJJ-BFG对马铃薯甲虫的成虫、幼虫和蛹均有一定的侵染效果,并且对马铃薯甲虫幼虫更为敏感。各处理组的防效随着孢子浓度的增大而升高。施药后第12天,孢子浓度为1×10~9孢子/mL、1×10~7孢子/mL和1×10~5孢子/mL对马铃薯甲虫幼虫最高防效分别为91%、80%和68%;施药后第9天,对成虫的最高防效分别为58%、48%和42%;浓度为1×10~7孢子/mL+吡虫啉15 000倍液和吡虫啉3 000倍液,对马铃薯甲虫幼虫防效为92%和95%,对成虫防效为80%和85%。低浓度的吡虫啉增加了白僵菌NDBJJ-BFG感染能力,显示出白僵菌NDBJJ-BFG与低剂量吡虫啉混用防治马铃薯甲虫的良好应用前景。 相似文献
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鹅球虫Eimeria nocens的生活史及致病性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
16只10日龄小鹅分别接种1.0×105~1.0×106个Eimeria nocens孢子化卵囊，在接种后30~336 h期间内分期剖杀，对E. nocens的生活史和致病性进行了动态性观察。在内生性发育过程中，E. nocens至少有3个世代的裂殖生殖阶段。有两种类型的裂殖体存在，一种在接种后54~78 h发育成熟，为第1代裂殖体，每个含10个左右的裂殖子；另一种在接种后102~240 h发育成熟，为第2代或第3代裂殖体，每个含25个左右的裂殖子。接种后198 h左右虫体开始进入配子生殖阶段。从接种后第10天开始有卵囊排出，显露期为4 d。25℃下卵囊孢子化时间为60~72 h。E. nocens寄生于空肠后部、回肠、盲肠、直肠和泄殖腔的绒毛和肠腺上皮细胞及固有膜中。在裂殖生殖后期、配子生殖和卵囊排出期间组织病变比较明显，主要包括肠粘膜上皮坏死和脱落、肠壁水肿、出血和炎性细胞浸润以及肠绒毛萎缩等，尤以回肠及其邻近部位最为严重。感染鹅腹泻、食欲下降、消瘦乃至死亡。 相似文献
20.
苹果贮藏期间炭疽病菌侵染过程的初步研究 总被引：3，自引：0，他引：3
将苹果炭疽病菌配成不同浓度孢子悬浮液接种至处于贮藏期的苹果上 ,在 2 0℃恒温下暗光培养 ,对病菌侵染过程进行研究。结果表明 :对于针刺接种秦冠苹果 ,病斑接种成功率随接种孢子浓度增大而增大 ,当接种浓度在 1× 10 5个孢子 /ml以上时 ,接种成功率为 10 0 % ;病菌潜伏期和潜育期与接种浓度呈显著负相关 ;潜育期至潜伏期所需的有效积温和产孢时病斑直径在不同浓度接种间差异不显著 ,其值分别为 99.2℃和 19.6mm ;病斑扩展速率在接种浓度 1× 10 4 ～ 1× 10 5个孢子 /ml范围内最大。 相似文献