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1.
牛产肠毒素大肠杆菌毒力因子多重PCR检测方法的建立 总被引：6，自引：1，他引：6
通过多重PCR扩增产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigentic E.coli，ETEC）的毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa肠毒素的编码基因来检测和鉴定ETEC。试验中对影响PCR扩增的dNTP、Mg^2＋、引物浓度以及退火温度等因素进行优化，在优化条件的基础上，确定多重PCR的特异性和灵敏性，以此建立同时检测ETEC多个毒力因子的多重PCR方法。用该方法对分离于犊牛腹泻和犊牛肠毒血症的7株大肠杆菌进行检测，结果2株为F41、K99和STa阳性，4株为F41、STa阳性，1株为K99STa阳性。这与玻片凝集试验检测菌毛的结果一致。试验表明，该方法特异性强、敏感性高、简便、快速，适用于临床鉴定和检测牛ETEC菌株。 相似文献
2.
[目的]为了分析河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌携带毒力基因和耐药性情况,[方法]2020—2021年在河西走廊地区采集患腹泻病犊牛的粪便、肛拭子及肝脏等病料组织279份,采用人工感染试验动物、PCR方法和K-B药敏纸片法分别检测犊牛腹泻性大肠杆菌致病性、毒力因子和耐药性。[结果]结果表明,分离得到了126株大肠杆菌,其中79株犊牛腹泻性大肠杆菌能引起小鼠死亡;分离的79株致病性大肠杆菌的毒力基因crl、irp2、fimH、papC、K88、K99、stx1、stx2检测率在40.5%～100%之间,其他毒力基因检测率在15.2%～34.2%之间;分离的79株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等8种药物的耐药率在49.4%～96.2%之间,对其他药物的耐药率在5.1%～32.9%之间。[结论]从河西走廊地区患腹泻病犊牛病料组织中分离得到79株致病性大肠杆菌,这些菌株携带多种毒力基因,对临床中常用的抗菌药物产生了耐药性。 相似文献
3.
2017年1月,新疆博乐某牛场犊牛群出现腹泻疫情,本试验旨在调查病因并制定相应的防控措施。采集6头腹泻犊牛的肛拭子和新鲜粪便样本,先用Speed V-Diar4~(TM)试纸进行轮状病毒、冠状病毒、隐孢子虫和大肠杆菌F5(K99)的检测,再对样本进行病原菌的分离鉴定和分子分群,最后对分离菌进行致病力及耐药性的检测。结果显示,所有粪便样本的试纸检测结果均为阴性,从6份样品中共得到6株大肠杆菌和1株爱德华氏菌,分子分群PCR检测结果显示6株大肠杆菌中A群占83.3%(5/6),F群占16.7%(1/6)。半数致死量结果显示,只有1株大肠杆菌(菌株XJ-B1)具有致病性,可致小白鼠腹泻和死亡。药敏试验结果显示,7株分离菌对这18种抗生素产生不同程度的耐药性,其中致病性大肠杆菌XJ-B1耐药程度最严重,对β-内酰胺类、磺胺类和多肽类抗生素耐药,为多重耐药菌。由此可见,这株致病性大肠杆菌可能是引起本次犊牛腹泻的病因之一,也是本试验首次分离到牛源的F群大肠杆菌,该菌的多重耐药性增加了临床治疗的难度,而本试验结果为该牛场治疗此次犊牛腹泻提供了依据。 相似文献
4.
2017年1月,新疆博乐某牛场犊牛群出现腹泻疫情,本试验旨在调查病因并制定相应的防控措施。采集6头腹泻犊牛的肛拭子和新鲜粪便样本,先用Speed V-Diar4TM试纸进行轮状病毒、冠状病毒、隐孢子虫和大肠杆菌F5(K99)的检测,再对样本进行病原菌的分离鉴定和分子分群,最后对分离菌进行致病力及耐药性的检测。结果显示,所有粪便样本的试纸检测结果均为阴性,从6份样品中共得到6株大肠杆菌和1株爱德华氏菌,分子分群PCR检测结果显示6株大肠杆菌中A群占83.3%(5/6),F群占16.7%(1/6)。半数致死量结果显示,只有1株大肠杆菌(菌株XJ-B1)具有致病性,可致小白鼠腹泻和死亡。药敏试验结果显示,7株分离菌对这18种抗生素产生不同程度的耐药性,其中致病性大肠杆菌XJ-B1耐药程度最严重,对β-内酰胺类、磺胺类和多肽类抗生素耐药,为多重耐药菌。由此可见,这株致病性大肠杆菌可能是引起本次犊牛腹泻的病因之一,也是本试验首次分离到牛源的F群大肠杆菌,该菌的多重耐药性增加了临床治疗的难度,而本试验结果为该牛场治疗此次犊牛腹泻提供了依据。 相似文献
5.
2018年3月份,黑龙江省齐齐哈尔市某规模化奶牛场发生犊牛腹泻,为了确诊其病因,无菌采取10头腹泻犊牛粪便进行细菌分离鉴定、生化试验、PCR鉴定和药敏试验等。生化结果表明:符合大肠杆菌生化特性;PCR结果表明:引物能有效扩增大肠杆菌OmpA、K99、Sta、irp2、FyuA基因;药敏结果表明:大肠杆菌对恩诺沙星、左氟沙星、头孢曲松高度敏感;10头犊牛均为大肠杆菌感染,本研究为该牛场犊牛腹泻的病因分析和防治提供了指导。 相似文献
6.
《畜牧与兽医》2016,(7):89-92
为确定新疆石河子、沙湾、阿克苏、博乐4个地区6个规模化牛场初生犊牛腹泻死亡与大肠杆菌的相关性,采集6个规模化牛场因腹泻死亡犊牛的肠系膜淋巴结等病料进行细菌分离鉴定。结果:从60份样品中分离并经生化鉴定获得53株呈β溶血的大肠杆菌;49株携带K99、F41菌毛基因及STa肠毒素基因;10株不同地区来源代表株均能迅速致死小鼠;多数分离株对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、头孢拉啶、庆大霉素、环丙沙星等耐药,对阿米卡星、头孢西丁等敏感。研究表明,携带K99、F41菌毛及STa的产毒性大肠杆菌是引起这6个牛场初生犊牛腹泻并造成死亡的主要病原之一。 相似文献
7.
《中国兽医学报》2017,(9):1670-1675
为探究西藏林芝地区仔猪白痢大肠杆菌优势血清型和毒力基因间的相关性,采用玻片凝集试验测定与仔猪白痢有关的血清型,PCR方法调查11种毒力基因。结果显示,在分离的81株藏猪源大肠杆菌里有72株检测到毒力基因,其中黏附素K88和CS31A分别检测到1(1.39%)和34(47.22%)株;肠毒素STa、STb和EAST1分别检测到10(13.89%),16(22.22%)和38(52.78%)株;毒力岛eaeA、irp2和ETT2分别检测到12(16.57%),44(61.11%)和56(77.78%)株。72株中有59株鉴定出9种血清型,其中有15株定型为O8(20.99%),11株定型为O64(16.05%),10株定型为O138(13.58%)。研究表明:O8、O64、O138为优势血清型,且O8与STa+STb相关,O107与肠毒素STa相关,O64与毒力岛eaeA+ETT2有关,毒力基因以EAST1+CS31A+irp2+ETT2组合检出率最高为18(25%)株。 相似文献
8.
［摘 要］为了确定是何种病原菌导致黑龙江省哈尔滨市周边某牛场的犊牛出现腹泻症状,对病死犊牛进行剖检,无菌采集其相关病料。试验对采集的病料进行病原菌的分离培养,并通过革兰氏染色镜检、生化特性的考察、PCR鉴定以及动物致病性试验的方式确定病原菌种类。并对分离出来的病原菌进行药敏试验,为临床用药提供科学依据。结果表明：引起该牛场犊牛腹泻的病原菌为含有毒力基因K99的产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）。该株细菌对氨苄西林、头孢曲松以及头孢噻肟敏感,对环丙沙星、恩诺沙星、左氧氟沙星以及四环素耐药。对庆大霉素和土霉素处于中介状态。说明分离得出的大肠杆菌具有较强的致病性,用氨苄西林、头孢曲松以及头孢噻肟可以对其引起的疾病进行治疗。 相似文献
9.
【目的】探明京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行情况,筛选敏感药物。【方法】于2020年12月至2021年7月从京津冀地区部分牛场采集146份犊牛腹泻样本,通过细菌分离纯化、革兰氏染色镜检及16S rRNA测序进行大肠杆菌分离鉴定;采用PCR方法对分离菌进行毒力基因（F17、K99、F41、STa、stx1、irp2和fyuA基因）和耐药基因（aac（6'）-Ⅰb、blaCTX-M、blaTEM、OqxB、tetA和sul1基因）检测;采用K-B纸片法进行药物敏感性试验。【结果】分离菌在鉴别培养基上的生长形态及革兰氏染色镜检结果均符合大肠杆菌生理生化特性,分离菌16S rRNA测序结果呈单一峰值,对拼接序列在NCBI中进行BLAST比对后发现,与大肠杆菌相似性均>96%,确定分离菌为大肠杆菌。试验共分离鉴定大肠杆菌142株,其中有88株携带毒力基因,占61.97%（88/142）,毒力基因F17、K99、F41、STa、stx1、irp2、fyuA阳性率分别为24.65%、0.70%、0、2.11%、1.41%、45.07%和21.83%,其中F17、irp2、fyuA为优势毒力因子,同时携带多重毒力因子的大肠杆菌检出率较低。aac（6'）-Ⅰb、blaCTX-M、blaTEM、OqxB、tetA和sul1 6种耐药基因皆被检出,blaTEM基因检出率最高,为45.77%,aac（6'）-Ⅰb和OqxB基因检出率最低,均为9.15%,分离菌株主要携带1~3种耐药基因。药物敏感性试验结果显示,142株分离菌对诺氟沙星敏感率最高,其次为环丙沙星,对青霉素敏感率为0,耐药现象严重,耐2种以上抗菌药物的菌株达86.62%。【结论】京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行广泛,耐药普遍,多重耐药现象严重。本研究可为京津冀地区犊牛腹泻的防治提供理论依据。 相似文献
10.
《现代畜牧兽医》2017,(3)
致病性大肠杆菌(Pathogenic Escherichia coli)是引起犊牛腹泻的主要病原之一,对养牛业危害很大。本试验对采自于肇东地区的牛源大肠杆菌进行了毒力相关基因分析并对试验菌株进行了药敏试验。利用实验室建立的多重PCR检测方法,对21个试验菌株进行了F41菌毛、K99菌毛、STa、Intimin和志贺毒素(stx1和stx2)基因的检测,并用21种抗菌药物对其进行了常规纸片法药敏试验。PCR检测结果显示有两株大肠杆菌含有F41菌毛基因,两株含有Intimin基因,一株同时含有Intimin和stx1基因。供试菌对菌必治和阿米卡星的敏感度为81%,其中能产生高度敏感的药物为菌必治(67%)、庆大霉素(67%)、卡那霉素(71%)、阿米卡星(76%)。 相似文献
11.
《黑龙江畜牧兽医》2016,(1)
大肠杆菌肠聚集性热稳定肠毒素Ⅰ(EAST1)是近年来备受关注的一种肠毒素。为进一步了解EAST1毒力基因在东北地区仔猪腹泻大肠杆菌中的存在情况,以及EAST1毒力基因与其他毒力基因的存在关系进行研究,试验于2010—2013年从东北地区38个规模化猪场共采集断奶仔猪腹泻粪便样品290份,经染色镜检和生化试验鉴定出362株大肠杆菌,应用PCR检测方法对STa、STb、LTa、LTb、paa、AIDA-I、afa E、irp2和EAST1等毒力基因进行检测。结果表明:有286株大肠杆菌携带毒力基因,其中89株(占31.12%)携带EAST1毒力基因,只含有EAST1毒力基因的有49株(占17.13%),同时携带其他毒力基因的有40株(占13.99%)。EAST1毒力基因可以协同F1菌毛、paa基因频繁交叉出现在同一致病菌中,但这些毒力基因编码的毒素之间是否存在协同致病关系尚需进一步研究。 相似文献
12.
牦牛大肠杆菌病是一种严重危害牦牛养殖业发展的重要疾病,大肠埃希氏菌是主要病原。为了查明青海地区牦牛的大肠杆菌菌株中存在的毒力基因类型、血清型及耐药关系,本研究收集了青海高原腹泻牦牛292份肛拭子,采用纸片扩散试验、平板凝集试验、PCR试验评估大肠杆菌分离株的耐药性、毒力基因、血清型和进化分型。结果显示:大肠杆菌分离株中多重耐药率占97%,至少含有一种毒力基因;10种毒力基因(sfa、eae A、cnf1、etr A、pap C、hly A、aer、fae G、rfc和sep A)中优势毒力基因sfa占96.9%;一些抗性表型和毒力基因之间显著正相关(P0.05,OR﹥1);大部分大肠杆菌属于A型(79.5%),其他属于B1(7.5%)、D(4.1%)、B2(5.8%)和F型(0.7%);在所有检测到的大肠杆菌菌株中,血清型O91和O145最为普遍,分别占15.4%和14.4%。结果表明,腹泻牦牛大肠杆菌分离株耐药性较高,携带毒力基因种类多,这给大肠杆菌的防治带来较大挑战。 相似文献
13.
《畜牧与兽医》2014,(8):94-97
对上海地区分离的199株猪源大肠杆菌分离株进行血清型鉴定和毒力因子检测,使用大肠杆菌标准抗O因子血清进行玻片凝集试验;采用普通和多重PCR方法,对分离株进行STa、STb、LT、Stx2e等4种肠毒素和K88、K99、987P、F18、F41等5种黏附素检测。结果:199株猪源大肠杆菌分离株有110株鉴定出血清型,占检测菌株的55.28%,覆盖了30种血清型,优势血清型为O8、O45、O64、O78、O138、O157、O163、O7+O8,占定型菌株的60%。共有32株大肠杆菌检测到毒力因子,阳性率为16.08%,检测出9种毒力因子。其中有21株单独检测到肠毒素,占65.63%,STa和STb+LT阳性的菌株分别为14和4;6株单独检测到黏附素,3株菌株K99阳性;5株同时检测到肠毒素和黏附素。在32株毒力基因阳性的大肠杆菌中,有15株血清型定型,覆盖7种血清型,其中O138、O7+O8与肠毒素STa相关,O8、O45与STb+LT相关。研究表明,上海地区猪源大肠杆菌分离株优势血清型至少覆盖了包括O8、O45、O64、O78、O138、O163等在内的8种血清型;大肠杆菌分离株以产肠毒素为主,主要毒力因子包括黏附素K99和肠毒素STa、STb+LT等。 相似文献
14.
[目的]为查明致北疆地区某牧场犊牛腹泻的病原,对脱水濒死10日龄新生犊牛进行剖检,无菌采集充血肠系膜淋巴结2 份。[方法]通过采用培养、染色镜检、生化特性考察、PCR鉴定等方法来分离鉴定致病菌,并对分离致病菌株进行相关毒力基因检测及药物敏感性试验。[结果]经分离鉴定分离出4 株大肠杆菌,毒力基因PCR检测结果K99、Sta、irp2、Eae基因分别在163 bp、314 bp、301 bp、552 bp处有清晰条带,与预期[目的]片段大小相符;药物敏感性试验结果表明,分离株对头孢哌酮、链霉素、庆大霉素敏感,对恩诺沙星、卡那霉素高度敏感。[结论]犊牛腹泻要以预防为主,治疗建议采用对因治疗,并配合提高抵抗力的中兽药进行。 相似文献
15.
黑龙江省某规模化奶牛场部分新生犊牛发生了严重腹泻且犊牛病死率较高。为了确诊,无菌采集病料,通过病毒检测、细菌分离、生化试验、细菌和病毒特异性基因PCR扩增、动物致病性试验及药敏试验等方法进行了病毒抗原和微生物检测。结果显示,病毒检测中牛轮状病毒（BRV）呈阳性,PCR扩增得到400 bp的特异性片段;从病料中分离到1株含K99和F41兼性菌毛抗原的高致病性产肠毒素大肠杆菌（ETEC）,该分离菌株对恩诺沙星、头孢唑啉、氯霉素敏感,对其他抗生素有一定的耐药性。流行情况调查结合病原学检查确诊该牛场新生犊牛严重腹泻是由BRV和大肠杆菌混合感染造成的,根据诊断结果进行了针对性地防制,取得了良好的防控效果。 相似文献
16.
《中国畜牧兽医》2020,(6)
本研究旨在明确犊牛腹泻源性大肠杆菌的耐药情况、强毒力岛(HPI)标志基因及相关基因的携带情况,以及大肠杆菌分离株与HPI携带的关系。采集犊牛病理性腹泻样本158份,采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选,镜检符合大肠杆菌形态的进行VITEK 2 Compact生化鉴定和PCR鉴定,采用K-B纸片法对大肠杆菌分离株进行药敏试验,应用PCR方法进行分离株HPI相关基因携带情况的检测。结果显示,共分离得到75株大肠杆菌,分离株对阿莫西林、哌拉西林、氨苄西林、头孢唑啉、氟苯尼考、恩诺沙星、四环素的耐药率均90%,对头孢氨苄、头孢拉定、头孢曲松、环丙沙星、诺氟沙星和氧氟沙星的耐药率均≥60.00%,对阿米卡星较敏感,耐药率为9.33%;75株大肠杆菌全部耐3种以上药物,多重耐药(≥10)的菌株占85.33%,耐药谱集中在耐14～17种药物,5株对19种药物全部耐药。HPI标志基因irp2的阳性率为100%,其他相关基因fyuA、irp3、irp5、irp8和ytbA的检出率在66.00%以上。综上所述,宁夏地区犊牛腹泻源性大肠杆菌耐药普遍,多重耐药现象严重。 相似文献
17.
新疆北疆地区致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及部分生物学特性 总被引：2，自引：0，他引：2
为研究确定新疆北疆地区规模化奶牛场犊牛腹泻病原性大肠杆菌的优势血清型、致病性及毒力因子特征。采用细菌学、免疫学及分子生物学的方法对从新疆呼图壁、石河子、奎屯3个主要奶牛生产基地14个规模化奶牛场10日龄内腹泻犊牛直肠棉拭子样品进行了大肠杆菌的分离与鉴定、O血清群、黏附素及肠毒素的测定。结果从302份样品中分离并经生化鉴定获得180株呈β溶血的大肠埃希菌,其中94株对小鼠有致病性;对其中53株代表菌株的O血清型、黏附素及肠毒素测定,结果为8株携带K99菌毛及STa毒素基因,6株携带F41茵毛基因,6株产生LT毒素;28株分离株分布于16个O血清型,其中O101,O6,O114,O78为优势血清型,占被测菌株的50％。结果表明,新疆北疆主要奶牛养殖区致犊牛腹泻大肠杆菌是以携带K99、F41和产ST的溶血性大肠杆菌为主,其研究结果为犊牛大肠杆菌性腹泻的免疫防治提供病原学依据。 相似文献
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新生犊牛产气荚膜梭菌与大肠杆菌混合感染实验室诊断 总被引：1，自引：0，他引：1
对黑龙江某牛场临床表现为腹泻、高热、猝死的新生犊牛进行诊断,通过涂片、革兰氏染色、镜检、细菌分离培养等技术,分离得到1株革兰氏阳性细菌和1株革兰氏阴性细菌,对分离菌进行纯化培养、生化鉴定、PCR毒力因子测定以及动物感染等试验,确定两分离菌株分别为A型产气荚膜梭菌和含有irp2、fyua病因子的大肠杆菌。结果表明,该疫情为牛产气荚膜梭菌与大肠杆菌混合感染。根据药敏试验结果,利用红霉素和壮观霉素进行了针对性地防治,迅速控制了疫情。 相似文献
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肠毒素大肠杆菌((Ent erot oxi geni c E.col i,ETEC)是引起犊牛腹泻的主要病原之一。本试验建立了多重PCR检测ETEC毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa、LT肠毒素相关基因的技术方法。试验对影响PCR扩增的dNTP、引物浓度以及退火温度等因素进行优化,确定了多重PCR的特异性和灵敏性。结果表明:所建立的多重PCR方法快速、特异、灵敏,在2.5h-3h内就可以完成,为致犊牛腹泻肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供另一种选择。 相似文献
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为了确定新疆石河子地区某规模化牛场表现为神经症状的病死犊牛的细菌性病原及其生物学特性,为后期新疆地区犊牛大肠杆菌病的防制及研究提供基础,研究采用常规细菌分离鉴定方法以及16S rRNA基因测序分析从病变组织中分离鉴定细菌,并对分离株进行药物敏感性试验、致病性试验以及特异基因PCR检测,对分离株进行耐药基因和毒力基因的分析。结果显示,从病死犊牛的肺脏和脑组织共分离鉴定出3株致病性较强的大肠杆菌;3株菌对青霉素、阿莫西林、头孢他啶、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、多西环素、麦迪霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、复方新诺明、替考拉宁、克林霉素表现出100%耐药,对多黏菌素B、阿奇霉素表现出高度敏感;从3株分离菌中均检测到blaCTX-M、sul1、sul2、gyrA、aadA1、aacC2、aph(3’)-Ia、tetB等8种耐药基因以及crl、hlyE、iucD、papC、malX、ompA、opmC、ompF、irp2等9种毒力基因。结果表明,新疆石河子地区某规模化牛场表现为神经症状的病死犊牛的细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带丰富的耐药基因以及... 相似文献