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禽流感高免球蛋白的制备及应用研究 总被引：3，自引：1，他引：2
应用H9N2亚型禽流感病毒(AIV)油乳剂灭活苗6个不同剂量免疫30周龄SPF蛋鸡,通过血凝抑制(HI)和琼脂免疫扩散(AGP)试验监测血清及卵黄抗体消长规律,确定2.0 mL为最适免疫剂量。首免后第18天血清与卵黄中抗体同时升至第一高峰,此时加强免疫。二免后1周,效价达到第二高峰,用常规抽提法从高抗体滴度卵黄中提取高免球蛋白(IgY)。中和试验(NT)表明:IgY具有中和病毒感染的作用,且中和抗体滴度随HI滴度的降低而降低;给鸡肌肉注射后6 h能检测出血清的HI抗体,24 h达到峰值,维持7 d,第13天血清中HI抗体消失。104个EID50的AIV(H9N2)攻毒,同时用HI价为214的IgY的10倍系列稀释物分5组进行保护试验,确定HI价为214的IgY保护范围在100倍稀释与10倍稀释之间。IgY系列保护试验表明HI价28为完全保护的最低滴度;在攻毒的前1天及至攻毒后第5天接种IgY均能100%保护。攻毒保存期试验证明,所制得的高免球蛋白4 ℃可以保存6个月,-20 ℃可保存1年。 相似文献
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鸡新城疫卵黄抗体IgY的分离提纯研究 总被引：7，自引：0，他引：7
本文对母鸡经鸡新城疫疫苗免疫接种后产生并富集在卵黄中的抗体IgY的提取纯化工艺条件进行了研究与优化，确定了去脂、提取抗体最佳工艺为：卵黄液用0．05mol／L,pH5.0的乙酸一乙酸钠缓冲液1：9倍稀释，搅拌15min，4℃静置10小时，抗体回收率为90％，去脂率为99％；该提取液用40％饱和度的硫酸铵盐析，得到的盐析液抗体回收率为82％，纯度达到69％。盐析液经截留分子量为100KD的有机陶瓷膜超滤后，截留液抗体回收率达到92％。纯度为85％。 相似文献
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本实验以E．coliO157免疫产蛋鸡，经四次免疫获得高免特异性卵黄抗体IgY，并以10^8～10^9 CFU／ml灭活E．coliO157为包被抗原，建立了抗E．coliO157卵黄抗体的间接ELLSA检测方法。酶标兔抗鸡最佳工作浓度为1：320。并研究了卵黄抗体不同处理方法、包被温度和时间对ELLSA检测的影响。该方法简便可靠，适于对大肠杆菌特异性抗体IgY的动态检测和大批检测。 相似文献
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抗ETEC F18+菌毛特异性IgY的稳定性研究 总被引：1，自引：1，他引：1
用间接ELESA方法测定了抗F18^＋ETEC IgY对温度、酸碱度、反复冻融、渗透压、胃蛋白酶、胰蛋白酶的稳定性，并考察非还原性糖（乳糖、蔗糖）对IgY活性的影响。结果表明：60℃水浴30min效价无变化；pH4．0～11．0环境中，IgY活性改变不显著；经7次反复冻融和50％蔗糖渗透压处理，抗原结合活性也几乎未受损失；pH2．5时，该IgY对胃蛋白酶非常敏感，经胃蛋白酶37℃处理4h，效价从1：7200下降到1：450；37℃时分别经胃蛋白酶（pH4）和胰蛋白酶（pH7，5）各处理4h，效价均无变化；在胃蛋白酶的处理中，蔗糖和乳糖对该IgY具有一定的保护作用。 相似文献
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AIV H5N1亚型高免卵黄抗体的制备及理化特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY).在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY.同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验.结果表明,纯化的IgY在pH 2.0和胃蛋白酶终浓度为1.5 mg/mL的环境下,以及在pH 8.0和胰蛋白酶终浓度为2.5 mg/mL的环境下,37℃作用1 h后其ELISA抗体效价均无明显下降;同时,热稳定性试验表明,IgY在60℃以下作用30 min,其ELISA抗体效价也无明显下降;中和试验测得IgY的中和效价为1:640,具有较好的中和H5N1亚型AIV的能力.以上结果表明,本试验所制备的抗禽流感H5N1亚型高免IgY具有较高的抗体效价和中和效价,同时还具有一定的耐蛋白酶消化的作用,可用于H5N1亚型禽流感的预防和治疗. 相似文献
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从甲醇添加量、诱导温度、生长时间等方面对重组酵母摇瓶发酵条件进行研究,并以此为基础探讨其在30 L发酵罐上产植酸酶的条件,从而为大规模的生产提供理论依据.对发酵过程中的诱导时间,诱导期间的甲醇与甘油的流加速度和比例以及诱导pH值进行了分析.得到最佳产酶条件为生长时间20 h、甲醇流加速度5 ml/(L·h)、诱导期甘油流速速度1 ml/(L·h)、诱导pH值为4、诱导时间84 h、诱导温度26℃,酶活力可达到454 U/ml,比未优化前提高接近3倍.发酵液经过超滤浓缩添加复合稳定剂制成饲料后投入到小规模草鱼养殖应用中,结果表明,在植酸酶添加量为0.08%可以替代磷酸二氢钙,证明该菌株具有大规模工业化生产的前景. 相似文献
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卵黄抗体最佳灭活方法的确立 总被引：4，自引：0，他引：4
自Klemperer于1983年首次报道鸡蛋中存在抗体以来，进一步研究证明鸡蛋内的抗体主要存在于卵黄内，称为卵黄抗体（egg yolk immunoglobulins简称IgY）。卵黄抗体以IgG占优势，而IgA和IgM的含量极低。近20年来国内外学者对卵黄抗体的制备和应用做了大量的研究。由于卵黄IgG的制备成本非常低，卵黄抗体已越来越广泛地用于许多疾病的防治。但是，用于生产卵黄抗体的鸡蛋多来自普通蛋鸡，用其制备的卵黄抗体可能带有某些卵传性病原，如禽脑脊髓炎、禽白血病、网状内皮组织增生症、减蛋综合征、支原体病等。使用这些卵黄抗体，甚至是精制的IgY进行疾病防治的同时，可能造成上述疾病的传播和扩散。本试验用3种低浓度的甲醛对混有禽脑脊髓炎病毒的禽流感-H9高免卵黄抗体在不同温度下，作用不同时间，进行灭活处理，以期建立一种对卵黄抗体的有效灭活方法。 相似文献
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从甲醇添加量、诱导温度、生长时间等方面对重组酵母摇瓶发酵条件进行研究,并以此为基础探讨其在30L发酵罐上产植酸酶的条件,从而为大规模的生产提供理论依据。对发酵过程中的诱导时间,诱导期间的甲醇与甘油的流加速度和比例以及诱导pH值进行了分析。得到最佳产酶条件为生长时间20h、甲醇流加速度5ml/(L·h)、诱导期甘油流速速度1ml/(L·h)、诱导pH值为4、诱导时间84h、诱导温度26℃,酶活力可达到454U/ml,比未优化前提高接近3倍。发酵液经过超滤浓缩添加复合稳定剂制成饲料后投入到小规模草鱼养殖应用中,结果表明,在植酸酶添加量为0.08%可以替代磷酸二氢钙,证明该菌株具有大规模工业化生产的前景。 相似文献
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温度是孵化的重要因素，在实际生产中有恒温和变温两种施温方案。恒温1～19天37．8℃．20～21天36．5～37．2℃；变温孵化则是采用前高后低的用温方式，如1～4天38．2℃，5～7天38．0℃．8～12天37．8℃．13～15天37．6℃，16～19天37．4℃，20～21天36．5．37．2℃。两种方法区别在于降温法必须是整批孵化时间，符合胚蛋对温度前高后低的要求。 相似文献
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患肠炎病草鱼消化酶活性的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
本文分析了健康鱼和患肠炎病草鱼淀粉酶和蛋白酶活性，其淀粉酶最适pH值均为7．2蛋白酶最适pH值分别为7．0和6．0；其淀粉酶最适温度分别为30℃和35℃，蛋白酶最适温度均为40℃，且患肠炎病草鱼蛋白酶和淀粉酶活性较健康鱼低，但pH值在5．7以下时，患病鱼的蛋白酶活性较健康鱼高，温度在28℃以下时，患病鱼的淀粉酶活性比健康鱼高。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验抗原的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
为应用血凝抑制(HI)试验检验鸡传染性支气管炎疫苗免疫效力(血清、卵黄抗体水平),建立了鸡传染性支气管炎病毒HI试验抗原的制备方法。该方法是通过选取抗原谱最广的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,经SPF鸡胚增殖培养36h后无菌收取鸡胚尿囊液,4℃、12 000r/min离心10min,上清用聚乙二醇(PEG)20000浓缩100倍;兔源A型产气荚膜梭菌中国标准株(C57-1株)37℃增殖培养18h,4℃、12 000r/min离心10min取上清,经PEG 20000透析袋浓缩5倍后通过0.20μm滤膜过滤除菌,然后将IBV液和A型产气荚膜梭菌菌液(含α毒素)二者按一定比例混合后经37℃恒温振荡感作2h,4℃经48h后制成。经大量试验表明,制备的IBV HI试验抗原效价高、稳定性好,可替代进口抗原应用于鸡群IBV疫苗免疫后血清抗体及卵黄抗体的HI效价检测。 相似文献
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为研究提高卵黄液除脂率和卵黄抗体的纯度,建立适合大量生产卵黄抗体的工艺,比较了不同除脂条件对卵黄液除脂率及卵黄抗体纯度的影响。最终确定卵黄液与醋酸盐体积比为1：8、pH值调至5．2、2～8℃沉淀15h（过夜）时,除脂的效果最理想,且蛋白的纯度高,适合大量提取卵黄抗体。 相似文献
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鸡新城疫灭活疫苗生产中半成品病毒效价受诸多因素的影响,如非免种蛋的母源抗体,种毒的效价,后孵化温度、湿度,种毒的稀释倍数,鸡胚不同死亡时间段等,本文主要针对鸡胚不同死亡时间段、种毒稀释倍数、后孵化温度进行探讨.结果表明:在相同条件下,鸡胚在96 h收获胚液的病毒含量最高,在96 h后病毒含量并没有明显提高,为了缩短生产时间,节省劳力,可在96h时收获鸡胚；在相同条件下,种毒稀释1万或2万倍时,收获的胚液病毒含量最高；在同等条件下,鸡胚后孵化温度在37℃、37.5℃时胚液病毒含量最高. 相似文献