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不同凝胶电泳对玉米自交系DNA多态检测的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
利用10个SSR(简单序列重复)引物对,对10个玉米自交系进行同源位点扩增,用琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶两种电泳方法分离,检测其DNA多态性。结果表明,其间的多态性检测结果差异较大。聚丙烯酰胺凝胶电泳较琼脂糖凝胶电泳能检出更多的等位基因位点,多态信息含量值亦较高,自交系间遗传相似系数的变幅小于琼脂糖凝胶检测中的相应值。聚丙烯酰胺凝胶电泳的分辨率高于琼脂糖凝胶电泳,对自交系的系统聚类更为准确、可靠,更能真实地反映自交系间的系谱关系。 相似文献
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两种检测扁桃基因组RAPD扩增产物方法的比较分析 总被引：1，自引：1，他引：0
通过2;(w/v)的琼脂糖凝胶和8;(w/v)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对扁桃品种基因组DNA的RAPD检测.结果表明:8;(w/v)聚丙烯酰胺凝胶优于2;(w/v)琼脂糖凝胶,主要表现在,8;聚丙烯酰胺凝胶对长度相差100 bp以下的DNA分子的分离较2;的琼脂糖凝胶电泳效果好;且8;聚丙烯酰胺凝胶的分辨范围广,在线性DNA分子(0.1～2.0 kb)范围内也能得到很好的分离效果;用8;的聚丙烯酰胺凝胶分离扁桃品种基因组DNA的RAPD扩增结果,表现出在扁桃品种间DNA水平上差异大,运用此方法提高了扁桃品种的鉴别能力. 相似文献
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聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法改良 总被引：2，自引：1，他引：1
[目的]改进聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法。[方法]以2009年在宁夏固原地区采集的马铃薯晚疫病样为试验材料,提取其DNA,PCR扩增,并将其产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]采用12%聚丙烯凝胶电泳检测引物D13、G11,8%聚丙烯凝胶电泳检测引物PI4B、PI63、SSR4,最后采用0.1%硝酸银染色,取得了比较理想的电泳及染色效果。[结论]该研究建立的适用于致病疫霉菌SSR标记的电泳和染色技术方法具有检测灵敏度高、操作简单、获得的条带清晰等特点,是一种行之有效、简便快捷的检测方法。 相似文献
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利用电解质梯度变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统对稻纵卷叶螟取食的水稻叶片进行cDNA-AFLP分析,结果表明产生的cDNA条带比普通变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统大约增加30%,解决了传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳在同一块胶板中大片段DNA条带堆积而小片段DNA条带间距过大,且读带数量有限的问题.. 相似文献
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黄瓜SSR-PCR反应体系的优化 总被引：12，自引：1，他引：11
采用L9(34)正交试验设计,研究了黄瓜SSR-PCR反应体系的主要成分对扩增结果的影响,并比较了变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明,最适反应体系为:在20μL体系中包括dNTP 200μmol.L-1、Primer 0.4μmol.L-1、Mg2+2.5μmol.L-1、Taq酶0.5μmol和模板DNA60 ng。用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SSR扩增产物结果更准确。 相似文献
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猪微卫星多态性两种检测方法的比较研究 总被引：5，自引：1，他引：5
为了确定一种安全、有效的检测猪微卫星多态性的实验方法,采用两种电泳和两种染色方法对大白猪基因组DNA进行了6个微卫星座位的PCR扩增,并将扩增产物在2.5%的琼脂糖凝胶上电泳,EB染色,然后又在8%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳,AgNO3染色。结果表明两种方法检测出的等位基因数目和基因多态性水平存在差异,8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳在区分微小差异片段能力上明显优于2.5%的琼脂糖凝胶电泳。 相似文献
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[目的]优化山楂PCR-SSCP反应体系与反应条件.[方法]以山楂为研究材料,采用改良的CTAB法分步提取叶绿体DNA和核DNA.从8对候选引物中分别筛选适合对叶绿体DNA和核DNA进行PCR扩增的引物,同时进行PCR-SSCP反应体系和反应条件的优化.琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测变性后的PCR扩增产物.[结果]筛选出ropB、ropL、rpoC1、ITS2和psbA-tmH五对引物适用于山楂的PCR-SSCP分析.电泳时,上样缓冲液(不含甘油)与PCR产物等量混合,98℃碱(1％NaOH)变性15min,采用6％的聚丙烯酰胺凝胶(交联度29∶1),电泳缓冲液0.5×TBE,在4℃恒温和200 V恒压的条件下,电泳3～4 h,可得到较好的山楂PCR-SSCP电泳图谱.[结论]建立了山楂PCR-SSCP最优反应体系与反应条件,为山楂SSCP分析奠定基础. 相似文献
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【目的】针对银染PAGE实验中常出现的背景颜色深、条带弥散、凝胶变形及条带不整齐等问题进行归纳总结并提出优化方法。【方法】以甘蓝型油菜基因组DNA为研究对象,通过PAGE电泳后银染并调整试剂配方、实验条件,筛选出适合实验的技术体系。【结果】甲醇浓度、电压稳定性、电泳温度、气泡等显著影响实验结果。甲醛浓度过高(1.25%)时,虽所需染色时间短,但凝胶背景深;甲醛浓度过低(0.001 25%)时,背景浅但条带淡,需要长时间染色;电压不稳定会造成条带弥散;电泳温度过高,导致凝胶变形,条带弯曲;凝胶中的气泡会扰乱DNA条带的形状;NaOH浓度在0.875%~1.375%,染色结果无明显差异。【结论】甲醛用量4 mL(1%)、保持稳定电压、在冰浴中电泳、制胶时及时赶走所有气泡,可得到凝胶背景浅、条带清晰且正常的结果。 相似文献
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REN Zhu-qing XIONG Yuan-zhu DENG Chang-yan LEI Ming-gang ZUO Bo LI Feng-e ZHENG Rong XU De-quan 《中国农业科学(英文版)》2006,5(2):141-145
mRNA differential display technique was performed to discuss the differential expression of genes in fat tissue between introduced European and Chinese indigenous pigs. Four anchor primers in combination with five arbitrary primers （20 sets in total） were used and nearly 300 bands were observed in polyacrylamide gel, among which 29 differential display bands were obtained. Twelve of 29 cDNA fragments were identified using reverse Northern dot blot, and subsequently cloned and sequenced. Eight of 12 cDNAs had no matches in GenBank and were submitted to GenBank, and the other 4 showed similarity to identified genes from GenBank. Three among 8 novel ESTs were selected to be further identified by semiquantitative RT-PCR. In our experiment, silver staining DDRT-PCR and DIG primer DNA labeling reverse Northern dot blot were used to avoid radioactive pollution. The result showed that the expressions of 5 among 8 novel ESTs were stronger in the backfat of Tongcheng pigs and the others were weaker than that in Duroc pigs. These novel ESTs were prepared for selecting genes related to adipose cells. 相似文献
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[目的]建立玉米SSR标记技术操作规程,为其在生产中应用提供参考。[方法]以2个玉米杂交种(黔单16号、西山99)和4个玉米自交系(苏37、交51、黄C、4011)为试材,从玉米中提取基因组DNA,分别对不同DNA提取方法、SSR反应体系、PCR扩增程序和银染方法进行比较。[结果]采用SDS法、CTAB法提取DNA的扩增效果较好。玉米的最佳SSR反应体系为:1U Taq酶,1×Bufer,60ng模板DNA,2.0 mmol/LMg2+,0.15 mmol/LdNTPs,0.3μmol/L引物。最佳SSR扩增程序为:93℃,1 min;93℃,1 min;60℃,2 min;72℃,2 min,30个循环;72℃,5 min。用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶或6%变性聚丙烯酰胺凝胶来检测玉米SSR标记较好。[结论]采用优化的SSR标记检测体系,对贵州51份玉米杂交种进行遗传多样性分析,大多数引物扩出清晰条带。 相似文献
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为了探索一种便于操作、低背景的蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳银染色方法,对银染色过程中的主要因素进行了优化,并结合DNA银染方法对蛋白质银染方法加以改进,将凝胶固定在长玻璃板上进行染色,避免凝胶在染色过程中破碎。结果表明,改进后的方法不仅使染色操作容易进行,背景容易控制,而且还使得检测方法的灵敏性、准确性得到提高。 相似文献
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蒙古马与其他品种马的ELA-DRA*exon2多态性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
本实验通过PCR-SSCP技术检测了三大品种6个类型共296匹马ELA-DRA* exon2的多态性。用12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳将已变性的PCR扩增产物分离,并用银染法显色。结果296匹马中共出现6种基因型:三种纯合子分别记为AA、BB和CC型,均为3条带;三种杂合子分别记为AB、BC和AC型,均为4条带;且AA和AB两种基因型是所研究的各类型马的优势基因型。纯血马和三河马的PIC和He值均较高,属于高度多态,4个类型蒙古马均属于中度多态。聚类分析表明三大品种各聚一支,各类型蒙古马中锡尼河马和巴尔虎马关系较近。 相似文献
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北京地区常见鼠尾草属植物AFLP亲缘关系分析 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]采用AFLP分子标记技术对北京地区鼠尾草属（Salviaspp.）植物的7个种23份样本进行亲缘关系分析。[方法]利用21对引物组合中筛选出的稳定性好、多态性较高的6对引物用于扩增北京地区鼠尾草属植物基因组DNA,银染后在灯光下统计扩增条带数,构成二进制矩阵表。用NTSYSpc2.10e软件进行分析,采用UPGMA方法进行聚类分析,通过Treeplot模块生成聚类图。[结果]对23份鼠尾草属植物进行AFLP分析,得到367个扩增位点,其中多态性位点359个,占总扩增位点的97.82%。在遗传距离为0.32的水平下,23份鼠尾草属植物样本归为7个组：一串红（S.splendens）组、蓝花鼠尾草（S.farinacea）组、朱唇（S.coccinea）组、雪见草（S.plebeia）组、丹参（S.miltiorrhiza）组、荫生鼠尾草（S.umbratica）组和罗马尼亚鼠尾草（S.officinalis）组。蓝花鼠尾草、朱唇、雪见草、丹参、荫生鼠尾草、罗马尼亚鼠尾草与一串红的亲缘关系依次增远;一串红种内,自选品种（系）与商品种亲缘关系较远。[结论]该研究结果可为北京地区开展鼠尾草属植物的种间和种内远缘杂交提供理论参考。 相似文献
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目的研究体细胞水平蛋白（转录因子）与DNA（靶基因启动子区）的相互作用.方法用甲醛固定活细胞,在生理状态下,结合的蛋白质-DNA复合物呈交联状态,超声将DNA打断成不同大小的片段,用目的蛋白质特异性抗体免疫沉淀该蛋白质-DNA复合物,复合物65℃解交联,并分离纯化DNA,然后进行PCR扩增.结果PCR扩增出阳性条带.结论ChIP是一项在不同生理条件下探测转录因子与DNA结合的成熟技术. 相似文献
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苏丹草品种间的RAPD分析 总被引：3，自引：1，他引：2
为评价苏丹草品种间的遗传多样性,用RAPD标记对14个苏丹草品种进行了遗传多样性分析.从100条RAPD引物中筛选出20条多态性明显、反应稳定的引物.14个品种共扩增出260条谱带,平均每条引物扩增出11.6条带,多态性比率达88.5％.聚类分析结果表明:苏丹草品种间遗传多样性丰富,材料间遗传相似系数分布在0.586 ～0.831;14个品种分为两大类,来自美国的“伊诺”和“布鲁赛”聚为一类;第Ⅱ类把高大型和低矮型聚为两类.结果显示出:聚类结果与形态特征有一定的对应关系,这为苏丹草种质资源的保存、利用和新品种选育提供了依据. 相似文献