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1.
为建立特异性和敏感性高的检验犬细粒棘球绦虫感染的方法。用细粒棘球绦虫(简称,Eg)成虫抗原分别免疫兔和绵羊,收集高免血清,纯化的高免抗体。依据抗体夹心ELISA工作原理,以兔抗体包被,检测感染Eg、不同犬带科绦虫的实验犬和空白犬粪样,绵羊抗体扑捉抗原,HRP标记兔抗绵羊IgG(1∶8 000)催化显色,用酶标仪测定OD 405nm吸光度,用以确定其特异性和敏感性。试验结果表明,敏感性为82.69%(43/52),特异性为85.88%(140/163);粪抗原在感染细粒棘球绦虫16d后可检出,最低抗原浓度为9.7ng/mL即犬感染5条成虫时可检测出阳性。该检测方法具有较好的特异性和灵敏性,为进一步研制检测细粒棘球绦虫虫体抗原ELISA检测试剂盒奠定了基础。 相似文献
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《畜牧与兽医》2015,(5):101-104
对细粒棘球绦虫感染家/牧犬常用的检测方法开展比对试验,并予以评估。对人工感染细粒棘球绦虫试验犬含卵粪样在不同时段用饱和蔗糖液(1.28 g/m L)漂浮虫卵,镜检;经化学药物驱虫,收集人工感染试验犬驱虫前、后粪样,流行病学调查中收集的家/牧犬粪样,用粪抗原抗体夹心ELISA检测试剂盒检测,同时,对检出的家/牧犬阳性粪样,再用虫卵漂浮法复检;通过氢溴酸槟榔碱下泻法检查家/牧犬感染细粒棘球绦虫虫体,同时,对下泻犬粪样用粪抗原检测和虫卵漂浮法进行复检。饱和蔗糖液漂浮虫卵最佳时段为2 h,可检出虫卵量与其他时段差异显著(P0.05);人工感染犬驱虫前、后粪样经粪抗原检测,OD值差异极显著(P0.01);对12 288份家/牧犬粪样进行粪抗原检测,阳性样品991份,感染率为8.1%(991/12 288),对991份阳性粪样进行虫卵漂浮法复检,检查出54份粪样中含虫卵。经下泻法检查312只家牧犬,其中,262只犬下泻,检查出27只犬感染细粒棘球绦虫成虫;对262份下泻犬粪样进行粪抗原检测,阳性29份;对262份下泻犬粪样用虫卵漂浮法检查,仅14份粪样检出虫卵。犬粪抗原抗体夹心ELISA检测犬感染细粒棘球绦虫可及时区分驱虫前、后感染状况,其更为安全、快捷、准确。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(1):65-70
为检测弓形虫循环抗原,以实现弓形虫急性感染的早期诊断,本研究建立了基于ABC(avidin biotin-peroxidase complex)放大系统的双抗体夹心ELISA方法。通过制备弓形虫排泄分泌抗原(ESA)并免疫动物,经3种抗原的筛选以获得抗循环抗原(CAg)的单抗,以方阵滴定法确定最佳多抗包被浓度和单抗工作浓度,利用夹心法和ABC放大系统建立检测弓形虫循环抗原的夹心ABC-ELISA方法,用该方法对人工感染犬血清和其他阳性血清样本进行检测以确定该方法的检出时间和准确性,并应用于临床样品的检测。结果:获得了3株针对不同抗原表位的单克隆抗体,并对CAg有较高特异性。双抗体夹心ABC-ELISA反应条件:兔多抗包被浓度为3.7μg/mL,生物素标记3A5、3E5和10F5-3单抗在混合工作液中的浓度分别为0.1、0.13和0.12μg/mL。该ELISA方法对ESA最低检测限为11.9 ng/mL,并与隐孢子虫早期感染牛血清、血吸虫尾蚴早期感染牛血清、艾美耳球虫早期感染鸡血清、犬瘟热急性感染早期血清、犬细小病毒急性感染血清无交叉反应。用该ELISA方法检测人工感染的犬,于感染后2 d血清即显示阳性,该方法能明显区分标准阳性血清和阴性血清。用该方法检测68份猪临床血样(其中包括2份标准阳性血清),检测结果与Nest-PCR结果一致。表明该双抗体夹心ABC-ELISA方法特异性强、敏感性高,可用于弓形虫急性感染的早期或活动期的诊断。 相似文献
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李志宁 《青海畜牧兽医杂志》2010,40(4):14-15
应用双抗体夹心ELISA诊断试剂盒,对来自青海省部分牧区的94份犬粪便,进行了棘球绦虫分泌抗原检测。结果检出棘球绦虫分泌抗原阳性粪便26份,阳性率27.66%。 相似文献
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《中国兽医杂志》2018,(10)
本研究旨在制备犬血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体和研制犬VEGF双抗夹心的ELISA检测试剂盒。研究利用原核表达的方法制备出具有良好反应原性的重组融合蛋白犬VEGF-His,并在此基础上进行了犬VEGF单克隆抗体的制备及鉴定,结果表明,所获得的犬VEGF单克隆抗体对犬VEGF蛋白具有良好的反应原性和较高的特异性。利用此单克隆抗体,与VEGF的兔多克隆抗体血清分别作为夹心ELISA检测试剂盒的上下层抗体使用,建立了以犬VEGF为抗原的夹心ELISA试剂盒的检测方法,并对正常健康犬及乳腺肿瘤患犬血清进行了检测,得出了此试剂盒的阳性和阴性临界值。实验结果表明,此试剂盒具有良好的敏感性、特异性和重复性,且利用本试剂盒对临床样本进行验证时,阳性符合率为87. 5%,阴性符合率为97. 56%,具有较高的临床应用价值。 相似文献
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《中国兽医学报》2017,(5):799-803
应用表达纯化的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白制备的多克隆抗体,建立了检测PPRV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染PPRV进行了调查。方阵法确定了抗PPRV兔源IgG作为捕获抗体的包被量为0.2μg,酶标抗体的最佳稀释度为1∶1 000。对大量小反刍兽疫阴性粪便样品进行检测及统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测PPRV的判定标准,即被检粪便样品D490≥0.221,判定为阳性。特异性、敏感性等试验结果表明,建立的检测PPRV抗原方法具有特异、敏感和快速等优点。与RT-PCR方法相比,该方法省时省力、简单快速。应用建立的检测PPRV抗原的双抗体夹心ELISA对吉林省和内蒙古不同地区的羊粪样进行检测,发现羊群均存在程度不同的PPRV隐性感染。本研究在国内首次揭示出临床健康羊群携带PPRV,为今后小反刍兽疫的诊断与防控提供了新的流行病学理论依据。 相似文献
9.
目的:建立检测家犬粪便中细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫DNA的PCR方法,为开展流行病学监测提供检测手段.方法:收集玛曲县牧区家犬111只,收集粪便标本,提取犬粪便DNA,进行PCR技术扩增,扩增产物鉴定.建立犬粪细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫PCR诊断方法,对此诊断方法敏感性和特异性进行鉴定. 相似文献
10.
细粒棘球绦虫成虫表膜抗原特异性基因的筛选及克隆 总被引：1，自引：0，他引：1
为筛选细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)表膜抗原基因或具有诊断性的特异性基因,提取Eg成虫表膜抗原,经ELISA、Western blot对该抗原的免疫学特性进行初步研究.以Eg成虫表膜抗原高免鼠血清为探针,筛选Eg成虫cDNA文库,将阳性噬菌斑的PCR产物和pGEM-T载体连接,转染到DH5α,对得到的重组子进行测序,并进行同源性分析.ELISA检测显示,表膜抗原免疫鼠诱导产生了特异性抗体,Westem blot鉴定该抗体能识别Eg成虫表膜抗原、原头蚴、Eg发育不成熟、Eg发育成熟抗原.筛选出6个阳性克隆,DNA片段大小在1～2kb之间.对阳性克隆进行同源性分析,结果与EgP-29mRNA同源性为99%,与Eg14-3-3蛋白mRNA同源性80%-99%.筛选Eg成虫cDNA文库所获得的基因,证明了Eg虫体表膜抗原的存在,有望成为犬细粒棘球绦虫的诊断抗原以及犬抗细粒棘球绦虫的候选基因. 相似文献
11.
《青海畜牧兽医杂志》2017,(3)
为了了解青海省西宁地区犬棘球绦虫的感染情况,用ELISA对采自于青海省西宁地区4个县的466份犬粪进行棘球绦虫抗原检测,结果总体阳性率为6%。其中西宁市犬粪样121份,阳性3份,阳性率2.48%;湟源县犬粪样105份,阳性5份,阳性率4.76%;湟中县犬粪样123份,阳性9份,阳性率7.32%;大通县犬粪样117份,阳性11份,阳性率9.4%。结果表明西宁市区犬棘球绦虫的感染率低于郊县,说明西宁市区犬棘球绦虫感染引起注意。 相似文献
12.
目的:分析在犬细粒棘球绦虫感染的检测当中,现场应用粪抗原检测法的具体效果。方法:选择2020年5月90只细粒棘球绦虫感染病犬为研究样本,对所有病犬进行粪抗原检测法诊断,对具体的诊断效果进行分析。结果:在90分病犬犬粪样本中,阴性样本为90例,阳性检出率为0。结论:针对犬细粒棘球绦虫感染的诊断,在现场应用粪抗原检测法进行诊断的效果较好,值得推广。 相似文献
13.
《中国兽医学报》2017,(4):653-657
应用本实验室分离的国内首株羊肠道病毒(CEV)-JL14VP1重组蛋白制备的兔源多克隆抗体和抗CEV-JL14病毒的单克隆抗体,建立了检测CEV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染CEV进行了病原流行病学调查。方阵试验确定了CEV VP1鼠源IgG捕获抗体的最佳包被量为0.2μg/孔,酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶1 000。对大量CEV阴性粪便样品进行检测与统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测CEV的判定标准为样品D490值≥0.216判定为阳性。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,所建立的检测CEV抗原方法具有特异、敏感、快速和重复性好等特点。以建立的双抗体夹心ELISA方法,对吉林省和内蒙古不同地区的羊群粪便样品进行了检测,发现不同地区的羊群都存在着严重的CEV感染,感染率高达12%~100%。本研究为今后CEV感染的诊断、检疫及防制提供了有效的手段和流行病学理论依据。 相似文献
14.
ELISA双抗体夹心法诊断犬冠状病毒肠炎 总被引：1，自引：0，他引：1
从冠状病毒（ＣＣＶ）阳性病犬粪便提取物中提纯抗原，制备豚鼠抗血清，用饱和硫酸铵盐析法粗提，再经ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子柱层析，提取ＩｇＧ，以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，制备酶标抗体，按ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法操作术式，建立检测犬冠状病毒的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法，诊断犬冠状病毒肠炎粪样，并以电镜检查比较，证明该法特异、敏感，可在４小时内报告结果。 相似文献
15.
建立牛结核病的γ-干扰素(BovIFN-γ)免疫学检测方法。本研究利用rBovIFN-γ抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,通过淋巴细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备抗BovIFN-γ的单克隆抗体,在McAb及多克隆抗体的基础上建立双抗体夹心ELISA,并进一步优化ELISA反应条件。结果表明,获得一株能稳定分泌抗BovIFN-γ McAb的杂交瘤细胞株A12E9,分泌单克隆抗体腹水效价为1∶107,属于IgG1亚类,具有良好的特异性;所建立的双抗体夹心ELISA方法,BovIFN-γ最低检测限为40 ng/mL,与其他蛋白不发生交叉反应,表现出良好的特异性。该方法为建立牛结核病的γ-干扰素诊断方法奠定了基础。 相似文献
16.
《动物医学进展》2015,(7)
为了解宁夏西吉、海原和原州区(简称西海固地区)的棘球绦虫的感染情况,用PCR方法检测犬粪中棘球绦虫DNA,用ELISA法检测B超筛查阴性的青少年儿童血清中抗棘球绦虫特异抗体(反映周围环境棘球绦虫卵的污染)。采用SPSS20.0统计分析资料,2检验比较不同组间阳性率的差异。结果显示,西海固地区,在检查的2 175份犬粪中,细粒棘球绦虫(E.g-DNA)阳性率分别为9.87%、6.10%、7.00%;多房棘球绦虫(E.m-DNA)阳性率分别为6.40%、1.52%、3.37%。在检查的5 706份人血清中,抗E.g抗体阳性率分别为45.46%、36.23%、42.18%,抗E.m抗体阳性率分别为8.38%、7.03%、20.48%。从终末宿主(狗)感染率和人血清抗体阳性率(非生活史中间宿主)可以证明两型棘球绦虫在该地区的传播流行非常活跃。 相似文献
17.
《中国预防兽医学报》2016,(2)
为建立犬免疫球蛋白G(Ig G)的检测方法,本研究以兔抗犬Ig G Fc段多克隆抗体为包被抗体,过氧化酶标记的兔抗犬Ig G(全分子)多克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA定量检测方法,并采用Protein A方法从犬血清中纯化犬Ig G作为ELISA检测标准品。该检测方法与小鼠、兔、马、牛、鸡及羊常见动物血清均无交叉反应,特异性好;最低检测下限可以达到4.8 ng/m L,敏感性较高。以本研究建立的ELISA方法检测犬细小阳性血清和阴性血清,阳性血清Ig G含量明显高于阴性血清;检测转染犬源化抗体序列重组质粒的细胞培养液上清,重组质粒在96 h表达量达到峰值。本研究为进一步建立稳定表达犬源化抗体的细胞系提供了特异性的定量检测方法。 相似文献
18.
19.
《中国兽医学报》2016,(4):567-571
应用大肠杆菌表达纯化的E种肠道病毒HY12 VP1和VP2重组蛋白制备的抗体,建立了检测牛肠道病毒病原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省不同地区的牛群感染BEV进行了病原流行病学调查。结果,应用方阵法确定的抗VP1鼠源Ig G作为捕获抗体的最佳包被量为0.75 g/100 L,酶标抗体的最佳稀释度为1∶3 600。对大量阴性粪便样品进行了检测及其统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测BEV的判定标准,样品D_(490)值≥0.143判定为阳性。特异性、敏感性等试验结果表明,所建立的检测BEV抗原方法具有特异、敏感和快速等特点。与RT-PCR方法相比,该方法操作简单快速,易在基层推广应用。对吉林省不同地区牛群粪便样品进行了检测,发现不同地区牛群的BEV感染率为8.16%~58.7%。本研究首次建立了检测BEV的双抗体夹心ELISA方法,为BEV感染的诊断、流行病学调查及本病防治提供了方法和理论依据。 相似文献
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为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)游离受体定量检测方法,本试验用表达猪唾液酸黏附素(Sn)游离受体的重组腺病毒rAd-Sn4D-Fc感染PK-15细胞,以细胞培养上清纯化的Sn4D-Fc游离受体作为标准抗原,鼠抗猪Sn免疫血清为一抗,生物素标记兔抗猪Sn多克隆抗体为二抗,建立定量检测Sn4D-Fc游离受体的双抗体夹心ELISA方法;用rAd-Sn4D-Fc注射仔猪,定期采集血清进行游离受体检测。结果显示,纯化Sn4D-Fc标准抗原的纯度为94.3%,能被Sn免疫血清识别;一抗的最佳工作浓度为5μg/mL蛋白,二抗的最佳稀释度为1∶4 000,夹心ELISA检测标准抗原的灵敏度为0.4ng/mL,对照抗原无交叉反应;夹心ELISA能从重组腺病毒注射猪血清中检测到Sn4D-Fc游离受体,最高表达量为6.54ng/mL,持续时间为15d。研究结果表明,建立的双抗体夹心ELISA可用于PRRSV游离受体的体内外定量检测。 相似文献