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1.
利用化学恒温培养箱对小鼠实施42℃1 h/d的热应激处理,建立持续的全身热应激动物模型。在热应激持续到8、13、21和35 d时,颈椎脱臼处死小鼠,应用免疫荧光组织化学和蛋白质印迹分析的方法检测睾丸组织Hsp70的表达。结果显示,对照组的小鼠睾丸组织Hsp70呈极强表达;热应激组小鼠睾丸组织Hsp70表达减弱,但随着热应激持续时间的延长,Hsp70表达逐渐恢复。热应激处理8 d后的小鼠睾丸组织Hsp70呈弱表达、13和21 d后呈极弱表达、35 d后呈弱表达。结果表明,Hsp70在小鼠睾丸正常的精子发生过程中发挥重要的作用;持续性的热应激可以使机体建立热适应,Hsp70可作为睾丸组织对热应激产生热适应的生物学标志之一。 相似文献
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[目的]证实小鼠胎儿成纤维细胞中钙调蛋白 (calmodulin,CaM) 基因参与热应激诱导型热休克蛋白70(Hsp70)的基因表达并明确其作用条件.[方法]取12.5 d孕鼠胚胎制备成纤维细胞(MEF),上述细胞随机分为对照组和热应激组:对照组在37℃条件下培养,热应激组包括I组(39℃、0.5 h),Ⅱ组(39℃,1 h),Ⅲ组(39℃,1.5 h),Ⅳ组(41℃、0.5 h),V组(41℃、1 h),Ⅵ组(41℃、1.5 h);每组3个重复.将选择的热应激组和对照组细胞分别加入不同浓度(25、50及100 mm=ol·L<'-1>)钙调蛋白拮抗剂W7,运用RT-PCR检测Hsp70、CaM mRNA表达量.[结果] 39℃和41℃热应激组Hsp70 mRNA表达量显著高于常温对照组(P<0.05):39℃应激1h的Hsp70 mRNA表达量极显著高于其它各组(P<0.01);39"C应激0.5 h和1 h CaM mRNA表达量极显著高于其它各组(P<0.01);41℃热应激组的CaM mRNA表达量与常温对照组比较差异不显著(P>0.05).在培养液中加100 mmol·L<'-1> W7、分别于37℃和39℃处理1 h后,其成纤维细胞的Hsp70 mRNA表达量极显著低于相应对照组 (P<0.01).[结论]中度热应激条件下,Hsp70和CaM基因表达量呈正相关,且39℃应激1 h可以显著诱导Hsp70和CaM基因表达;CaM通过某种途径参与了Hsp70基因表达. 相似文献
3.
本试验建立了不同温度、不同时间热应激实验小鼠动物模型,采用Real-time PCR和Western-blot方法检测了小鼠睾丸组织热应激蛋白70(HSP70)在mRNA和蛋白质水平的表达规律。结果表明:25℃时,HSP70在mR-NA和蛋白质表达水平没有变化;在31℃、34℃和37℃时,随应激时间的延长,HSP70mRNA和蛋白质的表达均呈现先升高后下降的趋势;40℃时,HSP70mRNA和蛋白质始终持续高表达。结论:小鼠受热应激后,睾丸组织HSP70mRNA和蛋白质均随着温度和时间的增加呈规律性变化,本研究为探索HSP70对精液品质的影响奠定了基础。 相似文献
4.
为研究急性热应激后小鼠抗氧化酶活性的变化及其肝脏热休克蛋白70基因(Hsp70)的表达规律,选取5～6周龄健康昆明雄性小鼠56只,平均分成7组(1个对照组和6个急性高温处理组).6个急性高温处理组小鼠分别为41℃、急性高温处理2h后再置于25℃环境中0、2、6、12、24、48 h的小鼠.分别测定各处理小鼠的脏器指数、... 相似文献
5.
【目的】应用RNA干扰技术沉默小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblast,MEF）中诱导型热休克蛋白70（Hsp72）基因的表达,从而筛选出对Hsp72基因具有确实干扰作用的siRNA。【方法】设计并合成4对特异性针对Hsp72基因的siRNA,借助LipofectamineTM 2000瞬时转染MEF,41℃热应激处理后,采用RT-PCR和Western blot检测Hsp70 mRNA和Hsp70蛋白表达量。【结果】在热应激组中,siRNA1、siRNA2两组及阳性、阴性和空白3个对照组的Hsp70 mRNA和Hsp70蛋白表达量均极显著高于常温对照组（P＜0.01）,siRNA3和siRNA4两组的Hsp70 mRNA的表达量极显著低于常温对照组（P＜0.01）;siRNA3组Hsp70蛋白表达量极显著低于常温对照组（P＜0.01）,而siRNA 4组与常温对照组差异不显著（P＞0.05）。与空白对照相比,4对siRNA中siRNA3和siRNA4对MEF中Hsp72 mRNA有极显著（P＜0.01）的抑制作用,其对Hsp72 mRNA的抑制率分别为86.2%和75.4%（P＜0.01）,对Hsp72蛋白表达的抑制率分别为77.3%和57.0%（P＜0.01）。【结论】体外合成的四对特异性针对Hsp72基因的siRNA中,靶位点在Hsp72 mRNA二级结构表面位置的siRNA3和siRNA4对Hsp72基因具有显著的抑制作用,靶位点在Hsp72 mRNA二级结构复杂处的siRNA1和siRNA2对Hsp72基因的抑制作用不明显。 相似文献
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[目的]本试验旨在探讨维甲酸对热应激小鼠睾丸损伤的保护作用。[方法]试验选用40只7周龄雄性ICR小鼠,随机分为4组：对照组(CON)、热应激组(HTRA0)、5 mg·kg-1·d-1维甲酸处理组(HTRA5)和10 mg·kg-1·d-1维甲酸处理组(HTRA10)。小鼠灌胃相应剂量维甲酸或玉米油后,42℃全身热应激2 h,处理7 d,试验结束后屠宰采样。[结果]与CON组相比,HTRA0组小鼠睾丸重、最小直径以及生精小管的横截面积、直径和上皮厚度显著降低(P<0.05),附睾精子活力显著下降(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著降低(P<0.05),抗氧化相关基因(nrf2、ho-1、nqo1、sod1、gpx1)表达量显著增加(P<0.05),bax基因表达量显著升高(P<0.05),血睾屏障相关基因(oc... 相似文献
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热应激对SH-SY5Y细胞中PrP及HSP90 mRNA转录水平的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
人神经细胞SH-SY 5Y常规法培养至长满细胞瓶(120 cm2)后均分为A~I 9个小细胞瓶(30 cm2),37℃培养15 h后,B~D组在42℃条件下分别进行0.5、1和2 h的持续热应激处理,而E~I组于42℃热应激处理0.5 h后,37℃分别恢复1、3、8、12、24 h。持续热应激阶段,朊蛋白(P rP)和热休克蛋白(HSP)90 mRNA水平显著提高(P<0.01),应激2 h时,P rP和HSP 90 mRNA水平分别约为对照组(A组)的2.5和5倍;在应激后恢复初期(1~3 h),P rP和HSP 90mRNA水平也显著升高(P<0.01),其中恢复到3 h时,P rP和HSP 90 mRNA水平分别为对照组的9和7倍;当恢复到12~24 h时,HSP 90和P rP mRNA的转录水平与对照组差异不显著。结果表明热应激可以提高HSP 90和P rP mRNA的转录水平。应激时P rP mRNA转录水平的提高暗示着P rP在细胞应激中起着一定的生物作用。 相似文献
8.
为探讨抗热应激添加剂对热应激状态下小鼠精液品质的影响,选取年龄和健康状况相近的成年雄性鼠150只,按照常温、热应激、添加剂处理后热应激的方式进行分组试验,对各组精液品质等指标进行统计分析。结果表明,3组热应激添加剂在缓解热应激小鼠的精液品质的影响效果上存在显著差异,其中效果最好的为中药组,其次是电解质组,最后是维生素组。从Hsp70mRNA表达量上来看,抗热应激添加剂组明显高于常温对照组。但与热应激组比较,维生素组与电解质组表达量低,而中药组表达量高。 相似文献
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热应激小鼠胚胎着床模型的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
模拟夏季高温环境对孕鼠的应激作用,建立热应激影响昆明白小鼠胚胎着床的模型。试验设为对照组(23℃±2℃)、40℃和42℃应激组(小鼠妊娠1～4d,分别应激2h),比较观察妊娠5、6、7d小鼠胚胎着床数及子宫状况和产仔数。结果表明,与对照组相比40℃和42℃应激组妊娠5d(11.00±2.65、10.00±2.12vs15.00±1.58,P0.05)、6d(11.40±3.21、10.60±2.30vs 15.00±0.71,P0.05)、7d(11.00±2.55、11.00±1.58vs 15.60±1.67,P0.05)胚胎着床率显著下降,产仔数(8.60±1.14、8.40±1.82vs 11.40±1.82,P0.05)也显著下降;且相比对照组其着床位点均较少且分布失衡。40℃和42℃应激组之间无显著差异,以42℃应激组影响相对较大。可见,胚胎着床前孕鼠连续4d40℃、42℃应激2h,可显著影响小鼠的繁殖能力。42℃可作为影响小鼠胚胎着床的热应激模型。 相似文献
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抗应激中药冲剂对猪肝脏热应激蛋白70表达的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
研究抗应激中药冲剂对高温应激下猪肝脏组织热应激蛋白70(Hsp70)表达的调控效果。选取64头3月龄中国实验用小型猪,随机分为常温对照组、高温应激组、方Ⅰ、Ⅱ组,于高温第1,3,6,10天动态取样后,分别采用免疫组织化学和ELISA法测定肝中Hsp70的蛋白表达定位定量变化。结果表明,高温应激后,猪肝脏组织细胞阳性率显著增加(P<0.05),方Ⅰ、方Ⅱ组肝脏细胞阳性率显著高于常温组(P<0.05)但低于高温组(P<0.05);ELISA方法结果显示高温组、方Ⅰ、方Ⅱ组肝脏组织Hsp70含量显著增加(P<0.05),方Ⅱ组Hsp70含量在第3,6天比高温组显著增加(P<0.05)。因此,中药抗应激冲剂可通过增加肝脏Hsp70蛋白含量水平来提高机体细胞热耐受,达到保护作用,且方Ⅱ组效果优于方Ⅰ组。 相似文献
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叶用莴苣热激蛋白基因LsHsp70-2711的克隆及高温胁迫下的功能分析 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】通过克隆Hsp70相关基因,并利用VIGS分析叶用莴苣热胁迫下Hsp70表达量和形态变化,为解析热激蛋白基因Hsp70在高温胁迫下的响应机制及分子机理奠定基础。【方法】通过同源克隆及RACE技术,获得叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-2711的cDNA全长序列,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析该基因在不同温度和不同高温时间下的叶用莴苣热敏品种‘P-S11’和耐热品种‘G-S59’的表达差异,确定基因和高温的相关性。根据VIGS技术,构建p TRV-LsHsp702711瞬时沉默载体,转化农杆菌GV1301,注射法侵染叶用莴苣叶片,三周后经PCR鉴定得到阳性植株。对照组和阳性组在基因表达和形态上进行对比,对照植株和阳性植株热胁迫和干旱处理后再次分析LsHsp70-2711的表达特性,观测形态变化。【结果】LsHsp70-2711 cDNA全长为2 226 bp,开放阅读框为2 154 bp,编码718个氨基酸,与拟南芥(NP_187864.1)、番茄(NP_001266213.1)、水母雪莲花(AAB99745.1)等物种的Hsp70同源性达到80%以上,证明此基因属于Hsp70家族。根据qRT-PCR结果,高温胁迫下该基因在两个品种中的表达均上调,在耐热品种中总体表达水平均高于热敏品种,耐热品种LsHsp70-2711的表达量最大值出现在42℃、60 min,37℃、60 min时热敏品种基因表达量达最大值,且在42℃高温下热敏品种‘P-S11’中基因表达随着胁迫时间的增加受到抑制,而耐热品种‘G-S59’则能长时间保持较高的表达水平,此结果和田间两品种间耐热差异表现相符合。亚细胞定位显示,LsHsp70-2711主要在细胞质中。将构建好的载体侵入叶用莴苣,鉴定后获得阳性植株。由定量PCR结果可知,未进行胁迫处理的阳性植株与对照株相比,LsHsp70-2711表达量下降,茎长明显增长。热胁迫和干旱处理后的阳性植株LsHsp70-2711表达量显著低于对照植株,高温处理对LsHsp70-2711的影响大于干旱胁迫。【结论】LsHsp70-2711属于Hsp70基因家族,其与叶用莴苣耐热性相关。研究结果为解析叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-2711在叶用莴苣高温抽薹方面的功能提供了理论支持。 相似文献
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雏鹅冷应激反应中HPT轴HSP70mRNA的动态表达规律 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】研究急性冷应激处理时,HSP70基因mRNA在下丘脑、垂体和甲状腺(HPT轴)中的表达规律。【方法】以7日龄皖西白鹅为研究对象,利用实时荧光定量逆转录PCR技术,分析(12±1)℃室温条件下雏鹅HSP70 mRNA在HPT轴中的动态表达规律。【结果】下丘脑HSP70 mRNA转录量在冷应激1.5、6和9h显著升高,其它时间点均恢复到正常水平;在应激结束后6h内HSP70 mRNA转录水平均显著升高,应激结束后6h转录水平最高,随后又迅速下降到室温下的转录水平。垂体HSP70 mRNA转录量在冷应激0.5、1.5、6和12h时显著降低,其它应激时间均升高到应激前的水平,应激结束后0.5、3和6h转录水平也显著低于应激前的水平,随后逐渐升高到应激前的正常水平。甲状腺HSP70 mRNA转录量在冷应激0.5h时显著升高,随后迅速下降到应激前的水平,应激3、6和12h时显著降低。应激结束后0.5h和3h转录量显著升高,其它时间点逐渐恢复到正常水平。【结论】雏鹅冷应激反应中,HSP70基因在下丘脑、垂体、甲状腺(HPT轴)中的表达规律是不同的,在不同的组织中有不同的调控规律。下丘脑HSP70 mRNA转录水平最高,表达量总体呈现明显上升趋势,是冷应激反应时的正调控基因;而它在垂体和甲状腺中的表达总体是被抑制的,是垂体和甲状腺冷应激反应时的负调控基因。 相似文献
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WANG Ming-zhi TIAN Wen-ru TIAN Zhong-jie QU Ping-ping GAO Shan-song ZHANG Zhi-hong ZHANG Qi-yao HOU Chun-xia LI Hui-hui 《中国农业科学(英文版)》2009,8(2):223-230
The method of RNAi was used to inhibit the expression of induced heat shock protein 70 （Hsp72） in the 4-cell stage mouse embryos and the embryo development competence was analyzed to identify the functions of Hsp72 on embryonic heat resistance. The results indicated that the inhibition rates of siRNA1 for Hsp72 mRNA and Hsp72 protein were 87.1 and 78.5%, respectively. The blastocysts development rates were 41, 86, and 84% for the siRNA1 group, the LipofectamineTM 2 000 exposed group, and the 37℃ group, respectively, and the hatched blastocysts development rates for the above three groups were 35, 72, and 68%, respectively. The data suggest that the siRNAI has a significant inhibiting effect on Hsp72 gene, and Hsp72 gene silence reduces the blastocysts development rate and hatched blastocysts rate after heat shock during the development of mouse preimplantation embryos. 相似文献
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【目的】环境高温影响猪精子发生和精液品质,但其分子机制尚不清楚。为此探索环境温度升高导致的热应激对猪睾丸细胞凋亡调节蛋白Cyt-C和Caspase-3表达的影响。【方法】性成熟长白公猪9头,对照组3头,饲养在20—27℃的猪舍环境;短期热应激处理组(heat stress 7 d,HS7d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续7 d;一个精子发生周期热应激处理组(heat stress 42 d,HS42d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续42 d;每天于热应激处理后将猪驱赶回20—27℃的猪舍。手术摘取睾丸组织,用QRT-PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测Cyt-C和Caspase-3表达与定位的变化。【结果】QPT-PCR结果显示,与对照组相比,热应激处理7 d组和42 d组,Cyt-C和Caspase-3m RNA的相对表达量均显著升高;热应激处理7 d组Cyt-C和Caspase-3m RNA的相对表达量最高。Western blot结果显示,热应激处理7 d组和42 d组Cyt-C和Caspase-3蛋白水平与对照组相比均显著升高;热应激处理7 d组Cyt-C和Caspase-3的蛋白表达水平最高。免疫组织化学研究发现,Cyt-C在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中,在生精细胞Cyt-C低表达于精原细胞,高表达于减数分裂后精母细胞和精子细胞。热应激处理导致Cyt-C的胞质内定位更加弥散,提示Cyt-C从线粒体到胞质的释放。Caspase-3在间质细胞和精原细胞低表达,大量减数分裂后的生精细胞呈Caspase-3阳性。与对照组相比,热应激处理导致部分支持细胞Caspase-3的表达,大量生精细胞的细胞核呈Caspase-3阳性着色。【结论】高温热应激处理导致猪睾丸Cyt-C和Caspase-3的蛋白和m RNA表达水平升高、细胞定位改变,提示Cyt-C和Caspase-3可能与热应激导致的猪精液品质下降存在关联。 相似文献
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叶用莴苣热激蛋白90（LsHsp90）基因的克隆及其在热激下的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】克隆叶用莴苣热激蛋白Hsp90基因并探讨其响应热胁迫的相关机制,为揭示叶用莴苣抗热分子机制奠定理论基础。【方法】采用同源克隆和RACE 技术相结合,从叶用莴苣叶片总RNA 中克隆LsHsp90 cDNA 序列。通过实时荧光定量 PCR (qRT-PCR) 分析LsHsp90在叶用莴苣耐热品种Z36和热敏品种S106受37℃和42℃热激后叶片的表达差异。【结果】该基因cDNA序列全长2 330 bp,开放阅读框2 097 bp,编码698个氨基酸,推导的蛋白质分子量约79.8 kD。蛋白质结构预测及同源比对分析表明,LsHsp90基因编码蛋白含ATPase位点和Hsp90保守结构域,并与拟南芥（AY081302.1）、紫茎泽兰（EU269070.1）等多种物种的热激蛋白90高度同源;进化树分析表明,LsHsp90与紫茎泽兰Hsp90基因（EU269070.1）聚为一类。qRT-PCR分析表明,37℃热胁迫下,该基因在耐热品种和热敏品种的叶片中均上调表达;42℃高温胁迫下,热敏品种S106 中下调表达,而耐热品种Z36上调表达。【结论】成功从叶用莴苣叶片中分离克隆到LsHsp90,该基因具有已知物种Hsp90基因的特征,该基因在热胁迫下有不同的表达特征,预示该基因其可能在抗高温胁迫中起重要作用。 相似文献
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为探讨热应激对公兔精液品质、睾丸组织形态及抗氧化物活性的影响,分别测定高温（31±2）℃与适温（18＋2）℃条件下公兔采精量及精子活力、密度、畸形率,并取睾丸组织制作石蜡切片进行组织形态观察及制成组织匀浆测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GsH—Px）、总抗氧化能力（T—AOC）。结果表明：热应激致使公兔采精量、精子活力和密度显著下降（P〈0．05）,睾丸组织细胞严重损伤、数量减少,睾丸组织中MDA含量显著增加（P〈0．05）,而SOD、GSH—Px活性和T—AOC显著降低（P〈0．05）。可见,热应激导致公兔精液品质下降,可能与睾丸组织中抗氧化酶活性降低、自由基生成过多、睾丸组织细胞受损有关。 相似文献
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[目的]探讨氯化铝对雄性小鼠生殖细胞的遗传损伤作用。[方法]选用雄性昆明种小鼠为研究对象,研究不同浓度的氯化铝腹腔染毒对小鼠睾丸脏器系数、精子数目、存活率、活动率、畸形率及精母细胞微核率的影响。[结果]小鼠睾丸脏器系数、精子数量明显降低,小鼠精子存活率及活动能力也逐渐降低;精子畸形率和精母细胞的微核发生率也随之升高,各染毒组与对照组均有显著差异(P<0.01)。氯化铝可影响雄性小鼠的生长发育,干扰精子的发生和成熟,损伤小鼠生殖细胞的染色体。[结论]氯化铝对雄性小鼠的生殖细胞具有明显的遗传损伤作用。 相似文献