共查询到17条相似文献，搜索用时 546 毫秒
1.
生防芽孢杆菌T2胞外蛋白酶的纯化及其抗真菌作用 总被引：5，自引：0，他引：5
从小麦根际土壤中分离到一株高产蛋白酶并对棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f sp.vasinfectum)具有拮抗作用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T2。采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow、SP Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析,从T2发酵液中分离纯化出一种分子量约为29.0kD的蛋白酶。该酶作用的最适温度为65℃,最适pH为8.0,在低于50℃、pH5.0-7.5范围内较稳定。Na+、K+Pb2+、EDTA对酶有激活作用,Ca2+、Ba2+、Al3+、Zn2+、Mn2+、Hg2+、SDS对酶有部分抑制作用,而PMSF可完全抑制酶活,推测该酶是一种丝氨酸蛋白酶。抗菌活性显示,该酶对棉花枯萎病菌的孢子萌发、菌丝生长有明显抑制作用。 相似文献
2.
3.
水稻纹枯病菌PG的分离纯化及其理化性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
水稻纹枯病菌产生的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PG)是其重要的致病因子之一。用丙酮法提取PG粗蛋白,分别经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱、Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow疏水柱、Sephadex G-75凝胶柱和DE52离子交换柱层析纯化得到一种具有较高活性的PG纯蛋白。该蛋白分子量为39.81 kD;等电点为4.58;含有糖基,含糖量为1.48%;含有α氨基酸,但不含芳香族氨基酸;不含脂基。这种蛋白在pH4~12范围内均具有活性,pH5时活性最大;对热不稳定,100℃下水浴20 min,活性完全丧失;对胰蛋白酶和蛋白酶K敏感,酶处理后其活性只有对照的35.0%和35.2%;对紫外线和氯仿亦敏感,处理后活性仅为对照的40.0%和51.7%。 相似文献
4.
植物病原菌产生蛋白水解酶被认为是病原菌侵染寄主的一个重要策略。作者对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani Kühn)产生的胞外蛋白酶的特性进行了研究。结果表明,水稻纹枯病菌产生一个分子量约为49.5ku的胞外蛋白酶。该酶对胰蛋白酶专一性底物Benz-Phe-Val-Arg-NA有较高的活性,并能从羧基端降解Arg和Lys。胰蛋白酶抑制剂对该酶活性有较强的抑制作用,表明该蛋白酶是一种类胰蛋白酶。在离体试验下,该蛋白酶可以降解水稻细胞壁蛋白并释放羟脯氨酸。SDS-PAGE电泳分析显示,至少有4个多肽被降解,分子量范围分别在14.4～20.1、20.1～31ku和31～43ku范围内。说明该胞外蛋白酶具有降解水稻细胞壁的能力,因此,该蛋白酶可能在水稻纹枯病菌的致病过程中起重要作用。 相似文献
5.
中华根瘤菌L03几丁质酶纯化及其酶学性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
中华根瘤菌Sinorhizobium sp.菌株L03是1株能产生几丁质酶的生防细菌.采用90%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析、Phenyl-Sepharose疏水层析等方法获得了菌株L03的几丁质酶.SDS-PAGE检测发现该酶已被纯化,其分子量约为41.3kD.该酶反应的最适温度为45℃;最适反应的溶液pH值为6;酶液在pH5～8条件下和40℃下分别保存1h,酶活力基本保持稳定;Mg2+和Ba2+能显著促进几丁质酶活性上升,而Zn2+、Cu2+和Fe3+等对酶活力有明显的抑制作用.功能分析结果显示,该几丁质酶对供试的几种病原真菌细胞壁都有明显的降解作用. 相似文献
6.
为了揭示不同蛋白酶抑制剂对绿僵菌致病力的影响,明确绿僵菌经消化道侵染东亚飞蝗的作用机制,采用分光光度法测定了经绿僵菌IPPM202及不同蛋白酶抑制剂处理后,不同时间东亚飞蝗中肠总蛋白酶、类胰蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶、乙酰胆碱酯酶（AchE）和谷胱甘肽硫转移酶（GSTs）活力的动态变化。结果表明,绿僵菌IPPM202处理后10 d内,东亚飞蝗中肠总蛋白酶活性呈现先上升再下降再上升的趋势,类胰蛋白酶活性呈先上升再下降趋势,类胰凝乳蛋白酶活性逐渐上升;但两种解毒酶的变化均为先上升后下降。加入两种抑制剂后,总体上抑制了东亚飞蝗中肠总蛋白酶和两种解毒酶的活性,降低了菌株IPPM202的侵染力,其中,甲苯磺酰基-L-氨基联苯氯甲基酮（tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone,TPCK）作用较对脒苯基甲磺酰氯（4-amidino phenyl methane sulfonyl fluoride,APMSF）更加显著,使各种酶活力降低至与对照无差异水平。本研究对于揭示绿僵菌在中肠的致病机理及寄主对真菌侵染的免疫机制有一定的指导意义。 相似文献
7.
粘虫颗粒体病毒(Psedualetia unipuncta granulovirus,PuGV-Ps)对苏云金杆菌(Bacillus thuring-iensis,Bt)具有增效作用.为明确其增效机制,采用SDS-PAGE方法研究PuGV-Ps对Bt δ-内毒素的降解活化作用.结果表明,碱性条件下晶体蛋白和PuGV-Ps共同孵育,130kD的δ-内毒素被进一步酶解为分子量为110、87、61、47 kD等多种不同的肽链,其酶解活化程度随缓冲液pH的升高不断加深,在pH值10.7的0.1 mol/L Na2CO3缓冲液中,δ-内毒素完全降解,并产生具有一定抗蛋白酶继续降解的分子量为47、60和61 kD的活性片段.用氨苯磺胺偶氮酪蛋白为底物测定PuGV-Ps中总蛋白酶活性的结果表明,PuGV-Ps在pH值为7.38～10.38时均具有蛋白酶活性,且蛋白酶活性随pH升高而显著提高.4种蛋白酶抑制剂均可抑制PuGV-Ps的蛋白酶活性,且以STI的抑制作用最强.SDS-PAGE试验同样显示了STI可以抑制PuGV-Ps对δ-内毒素的酶解活化. 相似文献
8.
蛋白酶抑制剂是一类能够抑制蛋白水解酶活性的小分子蛋白质,在昆虫肠道内通过抑制蛋白酶的活性,可以干扰昆虫的正常生长和发育。本文利用体外重组表达的蛋白酶抑制剂Xbpi-1,研究了Xbpi-1对豌豆蚜Acyrthosiphon pisum Harris的杀虫活性及其生化机制。结果表明,取食含蛋白酶抑制剂Xbpi-1浓度为50、200、400、800μg·mL^-1人工饲料的豌豆蚜,96h后的校正死亡率分别为2．1％、9-4％、19．7％和50．9％,虫重分别减少12_3％、20．3％、25．7％和33．7％。生化测定结果表明,4种浓度处理的豌豆蚜体内总蛋白酶、氨肽酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的活性均有显著降低,浓度为800μ·mL^-1时,其酶活性分别降低了29．6％、26．1％、23．5％和23．8％。本研究结果说明,蛋白酶抑制剂Xbpi-1对豌豆蚜具有较好的生物活性,为进一步开发应用于豌豆蚜等刺吸式害虫的防治提供了理论依据。 相似文献
9.
为了明确Cry1Ac毒素对小菜蛾Plutella xylostella幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响,利用蛋白酶专性底物测定其中肠各蛋白酶活性在不同缓冲液中的最适pH,并用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后测定该毒素的致死中浓度LC_(50),观察中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的变化,分析Cry1Ac毒素与昆虫中肠酶活性间的关系。结果表明,小菜蛾幼虫中肠总蛋白酶在Tris-HCl、KH_2PO_4/NaOH和Glycine/NaOH三种缓冲液中最适pH均为11.0;强碱性胰蛋白酶的最适pH分别为10.0、10.5和10.5;弱碱性胰蛋白酶的最适pH均为8.5;胰凝乳蛋白酶的最适pH分别为8.5、9.0和9.0。Cry1Ac毒素对小菜蛾的致死中浓度LC_(50)为0.343μg/mL。用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后,其中肠各蛋白酶活性均随时间的变化而变化。弱碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活性明显升高,且随浓度升高呈上升趋势;在取食36~72 h期间低浓度处理组的羧酸酯酶活性与对照组间无显著差异,而高浓度处理组羧酸酯酶活性显著高于对照组。表明Cry1Ac毒素能够显著影响小菜蛾的中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性。 相似文献
10.
内生解淀粉芽孢杆菌LP-5抗菌蛋白的分离纯化及特性 总被引：6，自引：1，他引：5
解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens LP-5是一株对梨黑斑病菌Alternaria alternata具有抑制作用的内生细菌,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白.为明确该抗菌蛋白的理化性质,采用盐酸沉淀、DEAE-52层析和Sephadex G-100层析进行纯化,测定了所得抗菌蛋白对热、蛋白酶、紫外辐射及酸、碱的稳定性.结果表明:纯化的抗菌蛋白分子量为20.3 kD,等电点为6.33.该蛋白对高温敏感,100℃处理30 min,抑菌活性仅为对照的18.4%;对蛋白酶K和胰蛋白酶稳定,酶处理后的抑菌活性分别为对照的92.5%和88.9%;对紫外辐射稳定,照射12 h后抑菌活性仍达对照的92.5%;对酸稳定、对碱敏感,pH 13处理后抑菌活性下降为原有活性的74.1%.抑菌活性测定结果显示,该蛋白对梨黑斑病菌的孢子萌发和菌丝生长有明显抑制作用,可造成孢子萌发端泡囊化、菌体破裂、原生质外渗. 相似文献
11.
Florencia Olivieri María Eugenia Zanetti Claudia R. Oliva Alejandra A. Covarrubias Claudia A. Casalongué 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》2002,108(1):63-72
Proteases have been proposed as part of the invasion strategies of some pathogenic fungi. In this work, a serine protease produced by the phytopathogenic fungus Fusarium solani f.sp. eumartii was purified and characterized. Purification of the enzyme was accomplished by gel filtration through a Superose 12 column, followed by hydrophobic interaction chromatography in Phenyl Superose and gel filtration chromatography through Superdex 75. Analysis of the purified enzyme by SDS/PAGE without heat treatment, revealed a single band, which corresponded to the proteolytic activity detected by zymogram. When this protein was subjected to denaturing conditions, two major polypeptides of approximately 30 and 33kDa were revealed. The N-terminal amino acid sequence of one of these polypeptides showed a high similarity with fungal mature serine proteases of the subtilisin family. This protease hydrolysed in vitro, specific polypeptides of potato intercellular washing fluids and cell walls. The protease was also able to degrade pathogenesis-related proteins from the intercellular washing fluids. The role of this serine protease as part of the fungal strategy to colonize potato tuber tissues is discussed. 相似文献
12.
螺旋毛壳ND35 β-1,3-葡聚糖酶的诱导、性质及其抑菌作用 总被引：8，自引：0，他引：8
以病原菌Rhizoctonia solani的细胞壁为诱导物,模拟毛壳菌自然的重寄生过程,研究了内生真菌螺旋毛壳(Chaetomium spirale) ND35 β-1,3-葡聚糖酶的产酶条件、性质,尤其是不同碳源的调控作用。结果表明,不同种类的真菌细胞壁及几丁质和昆布多糖,均可诱导产生β-1,3-葡聚糖酶,而作为分解代谢产物的葡萄糖则抑制产酶。经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析及Phenyl-Sepharose疏水层析,并通过SDS-PAGE鉴定,纯化了一种分子量约为73 kDa的内切β-1,3-葡聚糖酶GLUC73。其最适反应温度为55℃,在40℃以下较稳定;最适pH值为5.5,在pH 5-9范围内均很稳定;酶活性受Hg2+、Fe3+、Zn2+、Mg2+等金属离子不同程度的抑制,Mn2+和Co2+对酶有激活作用;以昆布多糖为底物时,该酶的米氏常数Km为0.412 mg·mL-1,最大反直速度Vmax为3.876 U·mL-1。粗酶液同时具有β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性,离体抑菌试验表明,对苹果炭疽病菌(Glomerella cingulata)、杨树腐烂病菌(Valsa sordida)、苹果树腐烂病菌(Valsa mali)的菌丝生长和孢子萌发有明显的抑制作用。通过对β-1,3-葡聚糖进行免疫细胞化学标记和超微结构观察,间接证明了β-1,3-葡聚糖酶在螺旋毛壳重寄生过程中的作用。 相似文献
13.
纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum是一种寄生在轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides上的活体营养菌寄生真菌。丝氨酸蛋白酶在菌寄生过程可能起到重要作用。根据丝状真菌丝氨酸蛋白酶的同源保守序列设计简并引物,通过RT-PCR及RACE的方法,克隆得到1845bp的全长cDNA片段。其可读框为1554bp（GenBank登录号为EU368754）,编码517个氨基酸的蛋白质。比对分析发现该蛋白是一种分泌型的丝氨酸蛋白酶,属于丝氨酸蛋白酶S8家族的枯草杆菌蛋白酶subtilisin,具有典型的信号肽-前肽-成熟肽的结构。将该基因可读框除去信号肽插入酵母表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母Pichia pastoris GS115,在甲醇诱导下成功分泌出具有生物活性的重组蛋白酶,诱导120h后酶活性可达153U/ml。重组蛋白酶经DEAE-Sepharose层析进行纯化,SDS-PAGE分析其分子量为39kD。其反应的最适温度为60℃,最适pH为8。 相似文献
14.
BACKGROUND: Aphids are insect pests with significant importance worldwide for agricultural and horticultural crops. The chemical pesticides used to control aphids could result in pesticide residues in agricultural and horticultural products as well as in negative effects on the environment. Therefore, alternative control methods are urgently needed. This study identified a new gene from strain BJFS526 of the symbiotic bacterium Xenorhabdus bovienii and expressed the protease inhibitor protein encoded by the gene. The effects of the protein on the pea aphids, Acyrthosiphon pisum, were also investigated. RESULTS: The gene PIN1 encoding the protease inhibitor protein against aphids was successfully cloned from BJFS526. The study demonstrated that the protein had adverse effects on pea aphid survival, and that the activity of aphid aminopeptidase was significantly inhibited by the protein. CONCLUSION: The results from this study suggest that this gene and the protease inhibitor protein encoded may offer an alternative method to control aphids in the future. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry 相似文献
15.
Alternaria alternata菌丝细胞壁凝集素的纯化与特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
Alternaria alternata是接触性活体营养菌寄生真菌纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum的寄主真菌之一,该寄生过程中菌寄生真菌与寄主真菌的识别机制未见报道。本文分离、纯化了A.alternata菌丝细胞壁上的一种参与识别作用的特异性蛋白——凝集素,并对其特性以及在菌寄生过程中的作用做了初步研究,粗提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析和SephacrylS 100分子筛层析等步骤便可获得凝胶电泳均一的凝集素AAL,经凝胶过滤层析法测得分子量为37.2kDa,经糖染色鉴定为一种糖蛋白。孢子凝集试验表明,AAL对O.tenellum的孢子具有极强的凝集力,在含量为3 325μg/mL时,30min内90%的O.tenellum孢子发生凝集作用,对照(不含AAL的缓冲液)凝集力则显著下降。上述结果说明AAL在A.alternata细胞壁蛋白抽提液和O.tenellum的孢子吸附中扮演着重要角色,可能起识别因子的作用。 相似文献
16.
To help in the development of Sunn Pest-resistant transgenic plants employing protease or α-amylase inhibitors, midgut hydrolytic enzymes of Sunn Pest (Eurygaster integriceps, Put.) (Heteroptera: Scutelleridae) were identified and characterized biochemically. We observed levels of very low proteolytic activity of trypsin (3 nmoles/min/mg), elastase (0.66 nmoles/min/mg) and leucine aminopeptidase-like (14.4 nmoles/min/mg) proteases, but no chymotrypsin and papain-like activity. Proteolytic activities were insensitive to inhibition by soybean trypsin inhibitor (SBTI) and aprotinin, but were inhibited to varying degrees (40–100%) by the synthetic protease inhibitors PMSF, TPCK, CdCl2 and CuCl2. Compared to proteolytic activity, significantly higher amylolytic activity (4.45 mmoles/min/mg) was observed. Αlpha-amylase activity was found to be resistant to inhibition by bean and chickpea α-amylase inhibitors, and only slightly inhibited by wheat (36.9 ± 1.8%) and maize (40.2 ± 2.8) α-amylase inhibitors. Here, we report on the biochemical properties of digestive enzymes from Sunn Pest midgut, and their inhibition patterns by several synthetic and natural hydrolytic enzyme inhibitors. 相似文献