共查询到20条相似文献，搜索用时 31 毫秒
1.
RT-PCR检测禽传染性支气管炎病毒 总被引：2，自引：0，他引：2
用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ,分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０、２２８、６０２ｂｐ的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、Ｃｏｎｎ、Ｇｒａｙ、Ｔ、Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒、上毒、云毒、ＨＫ、１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ,结果除Ｈｏｌｔｅ株和２个分离株（宜毒、云毒）外,其余均成功地扩增出６００ｂｐ的片段。用１．７、０．２、０．６ｋｂ３对引物对６个ＩＢＶ毒株和６个分离株的含毒尿囊液在相同和不同条件下进行ＲＴ－ＰＣＲ,结果３对引物分别扩增出３、５、９株ＩＢＶ,同时可将不同血清型的１２个ＩＢＶ株分成６种基因型。将ＩＢＶ分离株ＨＫ与标准株Ｍ４１经ＰＣＲ扩增、ＨａｅⅢ和Ｈｉｎｄ酶切、ＲＦＬＰ分析,表明属同一马萨诸塞血清型。３株ＩＢＶ（Ｈ１２０,ＨＫ,Ｍ４１）在鸡胚中繁殖,ＰＣＲ最早检出的时间为２０～２４ｈ。ＲＴ－ＰＣＲ提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测病毒的新方法。 相似文献
2.
3.
巢式PCR快速鉴定鸡传染性支气管炎病毒的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）经鸡胚增殖后,直接用尿囊液提取ＲＮＡ后反转录成ｃＤＮＡ,用ＩＢＶ基因３’端的ＵＴＲ１－／ＵＴＲ２＋和ＵＴＲ３－／ＵＴＲ４＋两对引物进行巢式ＰＣＲ,所检测的４个ＩＢＶ标准参考株和１６个ＩＢＶ野毒株均得到了预期的１７４ｂｐ大小的片段,而鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）,鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）及正常鸡胚尿囊液经同样处理没有可见片段出现。本试验不需纯化册毒只需０５ｍｌ病毒尿囊液即可在２４小时内得到准确的试验结果。这表明与其它ＩＢＶ鉴定方法相比,该法具有快速、灵敏、特异的优点。 相似文献
4.
5.
6.
The feasibility of using liver impressions on Flinders Technology Associates (FTA filter paper for the collection, inactivation, and molecular analysis of fowl adenovirus (FAV) was evaluated. FAV I European Union (EU) serotype 1 spotted on FTA was shown to be inactivated using specific-pathogen-free (SPF) primary chicken embryo liver cell culture as indicated by absence of cytopathic effect. Sensitivity of the polymerase chain reaction (PCR) test using tenfold dilutions of allantoic fluid from 100 to 10-4 for the detection of adenovirus serotype 1 on FTA cards was determined to be 0.0005 mean tissue culture infectious dose per FTA spot. The stability of the DNA from liver impressions on the FTA was found to be 198 days when stored at -20 degrees C. In a trial, inclusion body hepatitis (IBH) was experimentally reproduced in SPF chickens inoculated with FAV I EU serogroup 1, 4, 8, or 11, which presented weakness, pallor, depression, dehydration, and mortality within 6 days after inoculation. PCR performed on FTA liver impressions from the inoculated birds was able to detect all four viruses, and the nucleotide sequence analysis of the amplified PCR products (1219 bp of the hexone gene) revealed the expected serotypes. In addition to the trial, 55 clinical samples were analyzed from liver impressions on FTA cards, and FAV was detected in 11 of 55 (20%). Sequencing analysis showed that the viruses were EU serotypes 4, 5, 9, and 10. The results demonstrate that FTA filter paper inactivates the FAV I and maintains the DNA template for molecular analysis. 相似文献
7.
8.
用RT-PCR对新城疫病毒分离株毒力的快速鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
根据新城疫病毒NDV强、弱毒株在F蛋白裂解位点氨基酸组成的序列上的差异,参照有关文献,设计了三对引物A+B,A+C,A+D。引物A+B能从Lasoa,B1,I系和强毒F48E8的含毒尿囊液中扩增出362bp的核酸片段,引物A+C仅能从强毒F48E8的含毒尿囊液中扩增出254bp的片段,引物A+D仅能从Lasota,B1,I系的含毒尿囊液扩增出254bp片段。三对引物均不能从IB,IBD,AI的含毒尿囊液和正常鸡胚尿液中扩增出特异片段。从发病鸡群中分离到3株NDV毒株中均被A+C引物扩出,它们的鸡胚平均死亡时间MDT分别为51.8h、53.2h、52.6h,1日龄雏鸡脑内接种指数ICPI为1.65、1.63、1.60,证明是NDV强毒。利用RT-PCR对NDV人工感染鸡最早可于攻毒后第二天从病鸡气管中检测到NDV,其次为泄殖腔和脾、肾。利用RT-PCR对NDV毒力的鉴定与传统生物学试验对强弱毒的测定结果完全吻合。但前者可在24小时内直接对组织匀浆进行诊断,具有快速简便和敏感的特点。 相似文献
9.
10.
根据GenBank已发表的鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）793／BS1基因序列，设计1对引物，扩增891bp特异性核酸片段，建立了检测IBV793／B的RT—PCR方法。特异性试验结果表明，IBV793／B能扩增出891bp的核酸片段，而IBVM41H120H52毒株以及新城疫病毒（NDV）、禽流感病毒（AIV）、传染性法氏囊病病毒（IBDV）均无特异性条带出现。敏感性试验结果表明，该方法的最低检出量为10pg的模板。上述结果表明，本试验所建立的RT—PCR方法敏感性高、特异性强。利用建立的RT—PCR方法对从山东省分离的8株疑似鸡IBV793／B进行检测，结果7株为阳性。该方法的建立为IBV793／B的诊断及流行病学调查提供了可靠的方法。 相似文献
11.
12.
QU Su-jie SHI Kai-chuang SU Yan-qiong HU Jie MO Sheng-lan ZHANG Bu-xian LI Jun ZOU Lian-bin 《中国畜牧兽医》2015,42(12):3119-3125
To investigate genetic variation of avian infectious bronchitis virus (IBV) in Guangxi province,one strain of IBV was isolated from chicken.Two pairs of primers for amplifying the N and M genes of IBV were designed according to the sequences in GenBank.The N and M genes of the strain were amplified by RT-PCR,and they were proved to be the N and M genes of IBV by cloning,sequencing and compared with reference IBV strains published in GenBank.The results showed that the N gene from the IBV isolate consisted of 1 230 bp,coding 409 amino acids.The M gene from the IBV isolate consisted of 678 bp,coding 225 amino acids.The sequence analysis of N gene showed that it shared 87.2% to 93.3% nucleotide homologies and 90.0% to 94.4% deduced amino acid sequence homologies with IBV strains from GenBank.The M gene sequence analysis showed that it shared 83.6% to 91.0% nucleotide homologies and 82.7% to 92.9% deduced amino acid sequence homologies.The phylogenetic tree analysis showed that it was closely related to BJ and LX4 strains,and were clustered into one group;But with the distant relatives from other strains of IBV.These results suggested that the isolate was a new variant of IBV. 相似文献
13.
为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了1株IBV。参照GenBank中IBV的核苷酸序列设计2对引物,利用RT-PCR技术对分离毒株的N、M基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株进行比对分析。结果显示,N基因序列全长为1 230 bp,编码409个氨基酸,M基因序列全长为678 bp,编码225个氨基酸。与参考毒株相比,分离株的N基因核苷酸序列同源性为87.2%~93.3%,推导的氨基酸序列同源性为90.0%~94.4%;M基因的核苷酸序列同源性为83.6%~91.0%,推导的氨基酸序列同源性为82.7%~92.9%。在遗传进化树中,本试验分离株Guangxi156株与BJ株和LX4株两个参考株位于同一个分支上,亲缘关系较近,而与其他参考株属于不同的分支,亲缘关系较远。结果表明,本试验分离株是一株新的IBV变异株。 相似文献
14.
根据GenBank发表的序列,对鸡传染性支气管炎病毒（IBV）H52、H120和M41株全基因组序列进行比较,设计并合成了两对特异性引物,其中一对引物能以M41株为模板,特异性扩增出1791bp的目的片断,从而特异鉴定IBVM41株;另一对引物能以H52株和H120株为模板,特异性扩增1700bp的目的片断,再用限制性内切酶NaeI对PCR产物进行酶切,H120株能够被切成1000bp和700bp两个片段,而H52株的PCR产物不存在该酶切位点,从而能区分H52株和H120株。本研究建立的PCR方法和技术具有快速、简单、特异性强等优点,可用于IBVH52、H120和M41株活疫苗的分子鉴别。 相似文献
15.
16.
17.
应用多重反转录-聚合酶链反应检测鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的研究 总被引：19，自引：1，他引：18
本文建立了一种同时检测NDV和IBV二种病原体的多重PCR技术。根据NDV和IBV的基因文库 ,设计了两对分别与NDV和IBV某段基因序列互补的引物 ,用这两对引物对同一样品中NDV和IBVRNA模板进行多重RT_PCR扩增 ,结果均同时得到了两条特异性的大小与实验设计相符的 31 0bp(NDV)和 1 72 0bp(IBV)多重的RT_PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果表明 ,该多重RT_PCR技术能同时检出 1 0pg的NDV和 1 0 0pg的IBVRNA模板。 相似文献
18.
为建立特异、敏感的猪流感病毒(SIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的双重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank登录的SIV M基因保守序列和PRRSV美洲型毒株的N基因保守序列,设计合成了2对特异引物,通过对扩增条件的优化,建立检测SIV和PRRSV的双重RT-PCR方法.检测结果显示:该方法可同时扩增出SIV(345 bp)和PRRSv(520 bp)的特异性片段;而猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型及阴性鸡胚尿囊液核酸扩增结果均为阴性;对SIV和PRRSV 2种病毒混合液的最小检出量分别为102 EID50/0.1 mL和103TCID50/0.1 mL.应用双重RT-PCR和病毒分离法对12份临床疑似样品进行对比检测,结果表明:除双重RT-PCR检测到双阳性的3份混合感染病料中1份未分离到PRRSV外,其余2份均分离出病毒.证明该方法具有良好的特异性、敏感性,可以用于临床样品的早期快速检测. 相似文献
19.
应用多重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡新需疫病毒,鸡传染性支气管炎病毒,鸡 总被引：12，自引：1，他引：11
本文建立了一种同时检测ＤＮＶ、ＩＢＶ、和ＭＧ４种病原体的多重ＰＣＲ技术。根据ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ和ＭＧ的基因文库,设计了４对分别与ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ和ＭＧ某段基因序列互补的引物,用这４对引物对同一样品中的ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ、ＭＧＲＶＡ和ＤＮＡ模板进行多重ＰＣＲ扩增,结果均同时得到了４条特异性大小与实验设计相符的３１０ｂｐ（ＮＤＶ）、１７２０ｂｐ（ＩＢＶ）、６４７ｂｐ（ＩＬＴＶ）和７３２ｂｐ（ＭＧ）多重ＰＣＲ扩增带,而对其他６种禽病病原的ＰＣＲ扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该多重ＰＣＲ技术难检出１０ｐｇ的ＩＢＶ、１ｂｇ的ＮＤＶ ＲＮＡ模板和ＩＬＴＶ、１ｐｇ的ＭＧ ＤＮＡ模板。 相似文献