应用多重PCR检测人工感染鸡呼吸道疾病的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

庞耀珊  谢芝勋  谢志勤  刘加波  邓显文  廖敏  M.I.Khan 《中国预防兽医学报》2001,23(6):415-418

本文报道了IBV，NDV，ILTV，MG人工感染4周龄SPF鸡和非免疫鸡后，用多重PCR检测试验鸡的咽喉棉拭子和器官组织样品，并与传统的病原分离鉴定，血清学方法进行比较，多重PCR无论是对单一感染病原，还是对两种以上混合感染病原，其敏感性和检测速度都优于传统的鉴别诊断方法，具有较高的实用价值，可以直接应用于临床检测，服务于生产。  相似文献   

应用三重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡３种病毒性呼吸道传染病的研究   总被引：18，自引：1，他引：17  

谢芝勋  谢志勤等 《中国兽医科技》2001,31(1):11-14

根据鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）和鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）的基因文库，设计了３对分别与ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＩＬＴＶ某段基因序列互补的引物。用这３对引物对同一样品中的ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ核酸模板进行三重ＰＣＲ扩增，结果均同时得到了３条与设计相符的３１０bp（ＮＤＶ）、１７２０bp(ＩＢＶ）和６４７bp(ＩＬＴＶ）三重ＰＣＲ扩增带，而对其他６种禽病病原的ＰＣＲ扩增结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该三重ＰＣＲ技术能检出１０pg的ＩＢＶ、１pg的ＮＤＶ ＲＮＡ模板和１０pg的ＩＬＴＶ ＤＮＡ模板。  相似文献   

一步法RT-PCR检测禽呼肠孤病毒方法的建立与应用(摘要)     

廖敏  谢芝勋  谢志勤  刘加波  庞耀珊  邓显文  唐小飞  何竞铭 《广西畜牧兽医》2003,19(2)

禽呼肠孤病毒(ARV)是呼肠孤病毒属的成员,在临床上主要引起鸡病毒性关节炎/腱鞘炎、吸收障碍综合症等多种疾病.禽呼肠孤病毒感染导致鸡群的饲料报酬降低、生产能力下降、屠宰废弃率高和引起免疫抑制而造成其它疾病的并发或继发感染,使鸡群死亡率升高,其危害相当严重.  相似文献   

应用RAPD技术分析禽多杀性巴氏杆菌广西分离株的DNA多态性     

刘加波谢芝勋  唐小飞邓显文庞耀珊  谢志勤 《中国兽医科技》2004,34(8):32-35

应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，以随机引物单条或成对组合的方式对9株禽巴氏杆菌(PM)广西分离株和3个参考株的DNA进行了多态性分析。结果显示，在选用的20个引物中，有4对引物(4条引物成对组合)扩增的条带为1～16条，其长度在90～2600bp。相似指数分析显示，PM广西分离株GX2与GX4的相似指数最高，为0．97；GX7与B26T1200的相似指数最低，为0．21，C48—1标准强毒株与PM广西分离株间的相似指数为0．33～0．64。表明广西当地的流行株呈现多样性，与PM标准强毒株存在差异。  相似文献   

禽呼肠病毒感染鸡胚成纤维细胞后Toll样受体mRNA转录水平的动态变化     

蓝元喜  谢芝勋  黄莉  谢丽基  邓显文  范晴  罗思思  谢志勤  黄娇玲  张艳芳  王盛  曾婷婷 《动物医学进展》2016,(9)

为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-S1133感染CEF 10h后,ARVσC蛋白的mRNA相对表达量开始迅速上升,在48h达到峰值;同时,感染CEF中的ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21mRNA表达量发生显著变化,在感染72h内各个受体的mRNA表达量呈波浪式变化。5个不同滴度的ARV感染CEF 24 h后,ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21mRNA转录水平与病毒滴度均呈正线性相关。上述结果表明,ARV感染后可诱导CEF ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21的mRNA转录水平发生变化,可能与禽呼肠病毒的复制和致病机制相关。  相似文献   

广西鸡毒支原体血清学调查   总被引：20，自引：1，他引：19  

邓显文  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  谢志勤  韦启高  邓小明  廖欣雪 《广西畜牧兽医》1999,15(1):22-24

鸡毒支原体（ＭＧ）是引起鸡慢性呼吸道病（ＣＲＤ）的重要病原。其特征是病鸡表现气管罗音、咳嗽、流鼻涕,母鸡产蛋下降,生产性能降低。是危害养鸡业发展的重要传染病之一。为了搞清广西鸡群中鸡毒支原体的感染情况,我们采用了鸡毒支原体血清快速平板凝集方法,检查了...  相似文献   

3株新城疫病毒广西分离株L基因的克隆与序列分析     

唐小飞  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤 《畜牧与兽医》2006,38(4):18-20

根据GenBank登陆的新城疫病毒L基因序列,设计了3对引物(L1和L2、L3和L4、L5和L6)。用RT-PCR技术对3株新城疫病毒广西分离GX7/02、GX9/03、GX11/03的L基因进行了分段扩增和克隆,并对克隆出来的3个片段进行序列测定,用DNAstar软件比较分析后进行拼接,得到长约为6.8 kb、包含有L基因全长的核苷酸序列。L基因的RNA全长为6 704 bp,拥有一个6 615 bp的开放阅读框,推导其编码的氨基酸数为2 204个。氨基酸同源性分析表明广西分离株之间同源性为98.6%~98.7%;与ZJ1株同源性为98.8%~98.9%;与La-Sota、B1、F48E9、HB92同源性为92.0%~94.2%。  相似文献   

微滴式数字PCR定量检测鸡毒支原体方法的建立     

谢志勤  谢芝勋  张艳芳  范晴  谢丽基  万丽军  罗思思  李孟  张民秀  曾婷婷  黄娇玲  王盛  李丹  韦悠  李小凤  任红玉  阮志华 《中国动物检疫》2022,39(9):121-127

为建立微滴式数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）定量检测鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum,MG）方法,以MG的mgpc基因序列为目的序列,在其保守区域内设计合成了1对特异性引物和1条探针,通过各反应条件优化,建立了检测MG的ddPCR方法,并测定了建立方法的特异性、敏感性以及重复性。结果显示：建立方法的最佳引物浓度为20 μmol/μL,探针浓度为10 μmol/μL,退火温度为55 ℃;该方法只检出MG,没有检出鸡滑液囊支原体、禽衣阿华支原体、禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽脑脊髓炎病毒、禽偏肺炎病毒、禽呼肠孤病毒、鸡沙门氏菌和鸡大肠杆菌,且相互间没有交叉反应;本方法最低检测MG重组质粒标准品的检测限为3.9拷贝/μL。重组质粒标准品浓度在3.9~41 025拷贝/μL范围内,绘制的ddPCR绝对定量曲线与测得值呈良好的线性关系（R2 = 0.999）;3次重复检测试验结果的变异系数均小于5%。对采集的60份病鸡喉拭子、气囊拭子及肺样品进行MG检测,结果ddPCR方法的阳性检出率（15.0%）高于荧光定量PCR方法（13.3%）。结果表明,本研究建立的ddPCR方法定量检测MG特异性强,灵敏度高,重复性好,为绝对定量检测MG提供了技术手段。  相似文献   

对虾WSSV和IHHNV多重PCR检测试剂盒的研究与应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

庞耀珊  谢芝勋  谢志勤  唐小飞  邓显文  刘加波 《水利渔业》2007,27(6):95-97

在对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)二温式PCR检测技术前期研究的基础上,将这2种病原的特异性引物与PCR基础反应液一起组装成快速检测试剂盒。通过对试剂盒敏感性、稳定性和保存期等技术指标的测定以及对临床样品的检测试验,该试剂盒对同一样品中的WSSV和IHHNV DNA模板均能特异性地扩增出2条与实验设计相符的593 bp(WSSV)和356 bp(IHHNV)的DNA片段,而对其它对虾病原的扩增结果均为阴性;该试剂盒最低能检测到102pg的WSSV DNA和10 pg的IHHNV DNA。对WSSV和IHHNV DNA的检出量分别为102~103pg和10~102pg。  相似文献   

多重聚合酶链式反应鉴别新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒和鸡毒支原体研究的概述     

谢芝勋  庞耀珊  谢志勤  刘加波  邓显文  廖敏 《广西畜牧兽医》2002,18(5):3-5

新城疫 (ＮＤ)、传染性支气管炎 (ＩＢ)、传染性喉气管炎 (ＩＬＴ)和鸡毒支原体 (ＭＧ)是四种严重危害养鸡业发展的常见呼吸道传染病 ,在世界许多国家广泛流行。这几种鸡呼吸道传染病的流行病学、临床特征和病理变化十分相似。临床上 ,一个鸡群同时感染二种上述呼吸道传染病病原体的现象也常有发生。常规的病原分离鉴定、血清学方法难以对两种上述病原混合感染的鸡呼吸道传染病作出快速鉴别诊断。聚合酶链式反应 (ＰＣＲ)技术具有快速、简便、特异及敏感等特点 ,近年来在禽病诊断中已得到了广泛应用。但常规ＰＣＲ技术一次扩增只能诊断一种…  相似文献