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稀有鮈鲫是一种新型的模式实验鱼,具有利用转基因技术培育开发成为观赏性鱼类的潜在可能。本实验采用PCR方法,从稀有鮈鲫基因组DNA中分离得到大小为1584bp的β肌动蛋白(β-actin)基因片段。序列分析表明,该片段包括长为1507bp的启动调控区和77bp的部分转录区序列。启动调控区包括一段长为109bpβ-actin基因上游调控序列,不翻译的外显子1和内含子1。上游调控序列中含有TATAbox,CAATbox和CArGbox等与转录活性密切相关的作用元件,并且在稀有鮈鲫β-actin基因第一个内含子中也含有1个CArG调控元件。将该启动子片段克隆到绿色荧光表达载体(pAcGFP1-1)上,显微注射入稀有鮈鲫的受精卵中,通过荧光显微镜能观察到绿色荧光蛋白的表达。本实验成功分离了具有驱动活性的稀有鮈鲫β-actin基因启动子。 相似文献
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《渔业科学进展》2010,(2)
稀有鮈鲫是一种新型的模式实验鱼,具有利用转基因技术培育开发成为观赏性鱼类的潜在可能。本实验采用PCR方法,从稀有鮈鲫基因组DNA中分离得到大小为1584bp的β肌动蛋白(β-actin)基因片段。序列分析表明,该片段包括长为1507bp的启动调控区和77bp的部分转录区序列。启动调控区包括一段长为109bpβ-actin基因上游调控序列,不翻译的外显子1和内含子1。上游调控序列中含有TATAbox,CAATbox和CArGbox等与转录活性密切相关的作用元件,并且在稀有鮈鲫β-actin基因第一个内含子中也含有1个CArG调控元件。将该启动子片段克隆到绿色荧光表达载体(pAcGFP1-1)上,显微注射入稀有鮈鲫的受精卵中,通过荧光显微镜能观察到绿色荧光蛋白的表达。本实验成功分离了具有驱动活性的稀有鮈鲫β-actin基因启动子。 相似文献
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为了探究单性群体选育途径，定向生产具备特定生长和繁殖性状的苗种，满足繁殖育种需要，进行濒危鱼类保护，以稀有鮈鲫（Gobicypris rarus）为试验对象，采用紫外线-热休克雄核发育技术诱导二倍体的方法，人工诱导稀有鮈鲫超雄个体产生。试验设置14组，1号为空白对照组，2~8号紫外线总辐射剂量分别为60、90、120、150、180、210、230 mJ/cm2，9～14号紫外线-热休克组的总辐射剂量分别为60、90、120、150、180、210 mJ/cm2。处理水温均为(38.5±0.5)℃，热休克2 min。结果表明：(1) 在紫外线总辐射剂量60~230 mJ/cm2时，随着照射剂量的不断增加，紫外线辐照组、紫外线-热休克组的受精率﹑孵化率均有下降趋势；(2)紫外线和热休克处理对受精卵造成一定的损伤，成活率大幅度降低的时间点主要集中在囊胚晚期、肌肉效应期以及出膜前期，少数胚胎由于活力差，存在难以正常脱膜孵化现象；(3)经紫外线或紫外线-热休克处理的受精卵，发育速度稍慢于正常受精卵，且均存在畸形发育卵。通过紫外线-热休克雄核发育技术获得的稀有鮈鲫畸形个体较少，可能为超雄正常形态的个体则更少。研究显示，紫外线和热休克相结合处理鱼类染色体的技术，有望成为人工诱导稀有鮈鲫雄核发育的有效方法。 相似文献
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为了比较牛磺酸对急性氨中毒的鲫和草鱼缓释作用的差异,实验分别构建了4个处理组,组1实验鱼通过腹腔注射生理盐水,组2注射醋酸铵(鲫7 mmol/g,草鱼9 mmol/g),组3注射醋酸铵和牛磺酸(100μg/g),组4注射牛磺酸。毒性实验持续96 h。结果显示,组2鲫肝脏中SOD、CuZnSOD和CAT基因mRNA表达量显著低于组1和组3;组2和组3鲫肝脏中GPx基因mRNA表达量显著低于组1;组1鲫大脑中SOD、CuZnSOD、CAT和GPx基因mRNA表达量最高;组2草鱼肝脏中SOD、CuZnSOD、CAT和GPx基因mRNA表达量显著高于其他组;组2和组4草鱼大脑中SOD和CuZnSOD基因mRNA表达量显著低于组1和组3;组3草鱼大脑中CAT和GPx基因mRNA表达量最高;此外,组2鲫和草鱼肝脏及大脑中TNF和IL基因mRNA表达量均显著高于其他组。研究表明,鱼类氨中毒会扰乱机体的抗氧化酶系统和免疫应答,引起氧化损伤和炎症反应;草鱼通过提高抗氧化相关基因表达以应对氨中毒;牛磺酸能够有效缓解氨中毒对鲫和草鱼造成的氧化伤害,但牛磺酸并不能降低氨中毒对鲫和草鱼造成的炎症反应。 相似文献
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运用石蜡切片技术和扫描电镜技术对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)鳃结构进行观察,并采用浓度为2 mg/L的Cd Cl_2水溶液对稀有鮈鲫进行急性毒理实验。结果显示:稀有鮈鲫具4对鳃,由鳃耙、鳃弓、鳃丝及鳃小片组成。鳃的各个部位表面均有上皮细胞覆盖;鳃耙和鳃弓具味蕾,鳃弓上还具不同类型的黏液细胞;相邻鳃小片的上皮细胞间也分布有黏液细胞,在鳃小片基部有氯细胞着生。鳃丝表面有不规则凹陷和微嵴,具沟、坑、孔等结构;鳃小片两面均呈凹凸状。在2 mg/L的Cd Cl_2水溶液暴露下,鳃受到损伤,发生鳃小片充血呈球状,鳃上皮水肿、脱落,黏液细胞增多等现象;并随时间延长受损程度加重。 相似文献
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鱼类个性行为反映其生活史策略,研究环境因素对鱼类个性行为的影响,可为更好地理解该行为的适应性意义及优化鱼类养殖环境提供理论依据和数据基础。以稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）为研究对象,使用隔板跨越和遮蔽物出游2 种实验方法,观测了同类鱼群刺激、禁食及不同环境照度下稀有鮈鲫的个性行为。结果显示,隔板跨越测试中,稀有鮈鲫开始运动前的潜伏期在同类鱼群存在与否的情况下没有显著差异（P>0.05）,但在禁食后显著减小（P<0.05）,在不同照度下差异显著（P<0.05）,且随照度的增加而增大;稀有鮈鲫总跨越隔板数在不同的照度条件下差异极显著（P<0.01）,随照度的增加而减小,但在同类鱼群存在与否及禁食组与饱食组之间差异均不显著（P>0.05）。遮蔽物出游测试中,稀有鮈鲫游出遮蔽物的时间在24 h 禁食后变化不显著（P>0.05）,但在同类鱼群出现时差异显著（P<0.05）,不同照度条件下差异极显著（P<0.01）,且随照度的增加先减小再增大。研究表明,禁食导致的饥饿和同类鱼群的出现能够在一定程度上增强稀有鮈鲫的探索性,但环境照度是稀有鮈鲫个性行为最为关键的影响因子。 相似文献
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四种渔药对稀有(鱼句)鲫的急性毒性 总被引：2，自引：1，他引：1
用控温半静态换水式实验方法,测定了伊维菌素(0.4%)、辛硫磷(20%)、氯氰菊酯(4.5%)和精制马拉硫磷(20%)四种常用药物对稀有(鱼句)鲫(Gobiocypris rarus)幼鱼的急性毒性效应。分别在实验24、48、72 h和96 h后记录稀有(鱼句)鲫幼鱼的死亡数,并推算了实验药液的安全质量浓度。结果显示,四种渔药的96 h半致死浓度分别为7.01、24.22、9.37和460μg/L,安全浓度分别为0.70、2.42、0.94和46.00μg/L,这4种药物对稀有(鱼句)鲫的毒性大小依次为:伊维菌素>氯氰菊酯>辛硫磷>精制马拉硫磷。结果表明:稀有(鱼句)鲫可用于渔药对水体环境影响的监测。 相似文献
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研究全氟辛烷磺酸类物质(PFOS)暴露对剑尾鱼肝脏Cu/Zn-SOD及相关应激基因表达的影响,探讨筛选导致体内氧化应激反应的敏感生物标志物,并首次克隆和分析剑尾鱼Cu/Zn-SOD的cDNA全序列。实验将剑尾鱼随机分为5组,包括对照组和3.5、7.0、14.0和28.0mg/L等4个PFOS实验暴露组,同时设置平行组。定量测定了24 h、48 h、96 h和14 d肝脏组织中的Cu/Zn-SOD、HSP70-1、HSP70-2和GST mRNA表达水平的变化,成功克隆包含794 bp核苷酸和编码154个氨基酸的剑尾鱼Cu/Zn-SOD的cDNA全序列。通过与其他相关鱼类Cu/Zn-SOD的核苷酸序列和氨基酸序列相似性比较发现,核苷酸和氨基酸序列相似性分别达到77%~83%和79%~88%。高浓度PFOS暴露后,剑尾鱼肝脏中与应激相关的各种基因发生不同程度的变化。通过RT-PCR技术检测Cu/Zn-SOD mRNA表达在剂量效应上不显著,Cu/Zn-SOD mRNA表达和SOD活性之间并没有相关性,推断是其他类型的SOD基因在PFOS暴露下发挥更为重要的作用。随着暴露时间的持续延长,Cu/Zn-SOD基因的转录水平变化趋势与SOD活性变化及HSP70-1 mRNA表达相一致,表明HSP70通过提高剑尾鱼体内SOD水平以保护机体免受氧化损伤。HSP70-2 mRNA水平比HSP70-1 mRNA表达更加敏感。HSP70-2变化趋势与Cu/Zn-SOD mRNA表达相关性不强,其相关机制有待进一步研究。G ST mRNA表达呈不断上升趋势,这与Nrf2信号传导途径有关,也可能是机体在应对PFOS进入鱼体后的一种防御措施。剑尾鱼在体实验表明,PFOS能够诱导肝脏氧化应激反应,GST mRNA和HSP70-2 mRNA表达可以作为PFOS暴露的敏感生物标志物。 相似文献
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为研究促卵泡激素受体基因(FSHR)在施氏鲟(Acipenser schrenckii)性腺分化过程中的表达、分布及调控作用,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和RACE技术克隆得到施氏鲟促性腺激素(FSHR)基因的全长cDNA序列,并对其编码氨基酸序列的特征、基因表达及调控作用进行了分析。结果显示:施氏鲟FSHR基因的cDNA全长为2696 bp,编码661个氨基酸,属于含有信号肽、跨膜结构且分泌到细胞外的疏水性蛋白。氨基酸同源性及进化分析表明,施氏鲟与小体鲟(A.ruthenus)FSHR序列一致性最高,亲缘关系最近。PCR结果显示,FSHR mRNA的表达具有广泛性,各组织中均有表达,但在性腺、垂体中的表达量较高,显著高于其他组织中的表达量。LHRH-A注射实验显示:不同浓度组中,施氏鲟性腺组织中FSHR mRNA的表达量呈先升高后降低的变化趋势;与对照组相比,1μg/kg组在诱导3 d时性腺组织中FSHR mRNA的表达量达到最高,极显著高于3μg/kg和5μg/kg组。与性腺组织中FSHR mRNA表达模式不同,垂体中FSHR mRNA的表达呈升高后降低趋势,3μg/kg组在注射后第3天达最大值。综上结果表明,LHRH-A可通过调控FSHR的表达参与施氏鲟的早期性腺发育。 相似文献
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Characterization of β‐catenin 1 during the gonad development in the common carp (Cyprinus carpio) 
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下载免费PDF全文 β‐catenin gene is a pivotal gene for gonad development and maintenance of ovarian function in mammals. However, little is known about its expression and function in gonad development of fish. In this study, a complete cDNA (3342 bp) sequence of β‐catenin 1 was cloned from the common carp, Cyprinus carpio, by RACE PCR, which encodes a 780‐amino‐acid protein. Quantitative real‐time PCR demonstrated that β‐catenin 1 mRNA expressions were high in the testis and ovary tissue and the expression increased as the testes developed and the early stage ovaries developed. Western blot results revealed a single immunoreactive band with an estimated molecular weight of 90 kDa in testes. Immunohistochemistry analysis revealed that the β‐catenin 1 protein was concentrated mainly in the cytoplasm of early development stage of oocyte cells and in the cytomembrane of developing and mature sperm cells. 17β‐Ethinylestradiol injecting intraperitoneally into the fish decreased the relative β‐catenin 1 mRNA expression level except 1 μg/g 72 hr and 5 μg/g 48 hr of treatments in the ovary by real‐time PCR. These results suggest, for the first time, that β‐catenin 1 is an essential protein in gonad development and might be involved in ovarian early development of C. carpio. 相似文献
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Hélène Volkoff 《Fish physiology and biochemistry》2013,39(4):979-991
In this study, the effects of peripheral (intraperitoneal) injections of d-amphetamine on feeding behavior were assessed in goldfish. Compared with the saline-injected group, amphetamine injections decreased food intake at doses ranging from 1 to 75 μg/g, but not 0.5 μg/g, but increased locomotor behavior, as indicated by the increased number of total feeding and non-feeding acts, at doses ranging from 2.5 to 25 μg/g. Amphetamine at high doses inhibited both food intake (at 25, 50 and 75 μg/g) and feeding behavior (at 75 μg/g). In the hypothalamus, the expression of orexin was down-regulated, and both CART 1 and CART 2 expressions were up-regulated in amphetamine-treated fish (50 μg/g) as compared to saline-injected fish, but amphetamine treatment had no effect on either hypothalamic TH or TRH expression. In the telencephalon, amphetamine treatment (50 μg/g) up-regulated CART 1, CART 2 and TH mRNA expressions but had no effect on either orexin or TRH. Our results suggest that, as in mammals, the orexin, CART and TH systems might be involved in amphetamine-induced feeding/locomotor responses in goldfish. 相似文献
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Frederic T. Barrows Charles E. Smith Jurij M. Wacyk Madison S. Powell Ronald W. Hardy Eric A. Shelden 《Journal of the World Aquaculture Society》2013,44(5):655-668
Heat shock proteins (Hsps) can promote integrity of damaged intestinal epithelial tissues. The aim of this study was to determine the effects of a commercially available anti‐phospholipase A2 antibody on growth, feed efficiency, Hsp expression, and intestinal health of rainbow trout fed diets containing high levels of soybean meal (SBM). Six practical‐type diets (45% protein; 15% fat) were formulated to contain 0, 17.5, or 35% SBM with and without antibody. Each diet was fed to three replicate tanks of fish (20 fish/tank; initial weight 21 g) for 9 wk. RNA was isolated from liver and intestinal tissues (n = 3/tank) to detect alterations in Hsp 27, Hsp 70, and Hsp 90 expression. Fish fed a diet containing 35% SBM had decreased growth and intestinal damage. Hsp 27 and Hsp 90 mRNA was elevated in fish fed 35% SBM. Fish fed 35% SBM with antibody had lower Hsp 90 mRNA expression than fish without antibody. These data indicate that feeding rainbow trout high levels of SBM alters the expression of some Hsps and anti‐phospholipase A2 antibody supplementation does not normalize growth or prevent distal enteritis in fish fed 35% SBM. 相似文献
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草鱼SREBP-1基因的克隆及糖对其在肝脏中表达的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是调控糖脂代谢相关基因表达的关键核转录因子。为获知草鱼SREBP-1基因的序列及其在肝脏中的表达规律,本实验采用同源克隆和RACE方法获得了草鱼SREBP-1基因的部分cDNA序列,并通过生物信息学方法对该基因及所编码蛋白的结构特征进行了分析;采用实时荧光定量PCR技术,对SREBP-1基因在8种不同组织的表达规律及低糖(糖含量24%)和高糖(糖含量42%)投喂条件下肝脏中的表达水平进行了研究。结果显示,所克隆到的草鱼SREBP-1基因cDNA长4 760 bp,其中包括开放读码框3 426bp,编码1 141个氨基酸;草鱼SREBP-1具有一个典型的碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链结构(bHLH-zip);氨基酸序列比对结果显示,草鱼SREBP-1与其他鱼类的同源性在76%~88%之间,与斑马鱼的进化关系最近;草鱼SREBP-1基因在脑中的表达量最高,肝脏和肠次之,在肾脏、脾脏、肌肉、脂肪和性腺中均有少量表达;与对照组相比,SREBP-1基因在高糖诱导下表达量显著提高(P0.05),低糖诱导下没有显著性差异。研究表明,在高糖负荷条件下,草鱼肝脏中SREBP-1可能会促进糖的利用和转化,从而参与糖代谢调节过程,为丰富鱼类糖代谢调控机理提供研究资料,并有望为提高鱼类对饲料糖的利用效率提供理论依据。 相似文献
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为了研究急性氨氮胁迫对黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化及炎症相关基因表达的影响,实验通过建立黄颡鱼离体头肾细胞模型,开展为期96 h的急性氨氮胁迫实验。结果显示,0.14和0.28 mg/L总氨氮处理组SOD基因的相对表达量显著低于对照组,但0.28 mg/L总氨氮处理组GPX基因的相对表达量显著高于其他组;0.14和0.28 mg/L总氨氮处理组IL-1和TNF基因的相对表达量显著低于对照组,而0.28 mg/L总氨氮处理组IL-8基因的相对表达量显著低于0.14 mg/L总氨氮处理组和对照组;吖啶橙染色检测发现,0.14 mg/L总氨氮处理组实验鱼头肾巨噬细胞内可见边缘不规则的黄绿色荧光,0.28 mg/L总氨氮处理组实验鱼头肾巨噬细胞内可见致密浓染的黄绿色荧光信号。研究表明,氨氮毒性能够影响黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化相关基因的表达;细胞凋亡可能是造成鱼类氨中毒致死的主要原因之一。 相似文献