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为探究Prdx2(Peroxiredoxin 2)基因缺失对小鼠原代骨髓间充质干细胞增殖的影响,利用流式细胞术检测129/SvJ野生型与Prdx2基因敲除型小鼠骨髓间充质干细胞中活性氧水平,细胞周期;结晶紫染色法检测细胞增殖情况;结果显示Prdx2基因敲除小鼠骨髓间充质干细胞具有更高水平的活性氧,并且细胞增殖速度明显快于野生型小鼠骨髓间充质干细胞。研究结果可为小鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养和大量扩增提供基础理论依据。 相似文献
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旨在探究低温等离子体（NTAPP）处理的PAM对DMSCs活性的影响,阐明PAM促进DMSCs发生细胞凋亡的机制,在体外提取小鼠原代真皮间充质干细胞（DMSCs）,并采用流式细胞术检测其表面Marker,油红O和茜素红检测其成脂成骨能力、流式细胞术测定凋亡情况以及活性氧（ROS）水平、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白以及抗氧化蛋白表达水平。结果表明,成功提取DMSCs,并具有成脂成骨分化能力;与未处理组相比,低温等离子体活化介质（PAM）处理后可引起细胞内的ROS水平升高导致细胞凋亡,同时造成凋亡相关蛋白Bax表达水平上升、Bcl2表达水平下降,以及细胞内抗氧化蛋白Prx I、Prx V、GPX表达水平升高。研究表明,一定剂量的PAM能上调细胞内ROS水平,导致DMSCs细胞凋亡水平上升,研究结果可为今后筛选PAM诱导DMSCs增殖的最佳条件提供前期结果,也为丰富低温等离子体在干细胞领域的研究提供理论依据。 相似文献
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NAMPT是NAD+补救合成途径的限速酶,具有抗衰老作用.外泌体是一种包含蛋白质、miRNA、mRNA、lncRNA等内容物的天然内源性载体.利用慢病毒方法构建NAMPT过表达的人脐带间充质干细胞系,获得过表达NAMPT脐带间充质干细胞外泌体,随后通过与人皮肤成纤维细胞共培养和饲喂秀丽隐杆线虫,研究过表达NAMPT脐带间充质干细胞外泌体对其抗衰老的影响.结果表明:基因修饰后脐带间充质干细胞及其外泌体内NAMPT蛋白含量显著升高,并能促进人皮肤成纤维细胞增殖和延缓人皮肤成纤维细胞衰老;同时能延长秀丽隐杆线虫寿命和增加秀丽隐杆线虫抗氧化能力.这一研究提示过表达NAMPT基因的间充质干细胞外泌体具有一定的抗衰老作用. 相似文献
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《黑龙江八一农垦大学学报》2017,(6)
利用高脂饲料诱导小鼠肥胖模型和苏木精—伊红染色法(HE染色)检测PeroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)基因敲除对小鼠体重、内脏脂肪、肝脏和皮下脂肪的影响。结果表明,高脂饲料饲养9周后,高脂饲料饲养组PrxⅡ基因敲除对小鼠(HFD-PrxⅡ-/-)体重、腹膜后脂肪重量、肾脏周围脂肪重量和附睾脂肪垫重量与高脂饲料饲养组野生型小鼠(HFD-PrxⅡ~(+/+))相比均无统计学意义,HFD-PrxⅡ-/-小鼠的肝脏重量与HFD-PrxⅡ~(+/+)小鼠相比显著增加(P0.01),HE染色观察发现,HFD-PrxⅡ-/-小鼠肝脏脂肪空泡明显多于HFD-PrxⅡ~(+/+)小鼠。高脂饲料饲养9周后,HE染色观察小鼠皮下脂肪厚度,HFD-PrxⅡ-/-小鼠皮下脂肪厚度与HFD-PrxⅡ~(+/+)小鼠相比显著增厚(P0.001)。研究证明,PrxⅡ基因敲除小鼠经高脂饲料喂养后能显著增加脂肪在肝脏和皮下的蓄积,为进一步探究PrxⅡ抑制脂肪形成和异常蓄积提供了基础研究数据。 相似文献
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为探究2-异丁胺基-5,8-二甲氧基-1,4-萘醌(MPAD)与老化动物皮肤损伤愈合之间的关系,阐明MPAD对真皮成纤维细胞衰老的影响.试验采用129/SvJ小鼠制作皮肤创伤模型,通过病理组织切片、H&E染色分析伤口愈合情况,通过SA-β-Gal染色、流式细胞术分别检测小鼠原代真皮成纤维细胞衰老情况及细胞内活性氧(RO... 相似文献
6.
《山地农业生物学报》2015,(6)
为了探讨Ephrin-B3在H22肝癌中的作用及其机制,在野生和Ephrin-B3敲除基因的ICR小鼠上建立H22肝癌模型,研究Ephrin-B3在肿瘤生长中的作用。通过称重和HE染色考察其对肿瘤的影响,通过电镜观察肿瘤组织细胞结构的改变,通过Western blot方法考察其对肿瘤蛋白表达的影响。结果显示:与野生小鼠相比Ephrin-B3敲除基因小鼠瘤重有非常明显的降低,瘤重分别为(2.45±1.24)g、(1.09±0.56)g,抑制率为55.45%。在形态学观察中,敲除基因小鼠肿瘤组织与野生小鼠相比坏死更严重。在电镜下观察,敲除基因小鼠的肿瘤细胞核中的染色质边缘化较野生小鼠更严重。在蛋白水平上,敲除基因小鼠的Bax/Bcl-2表达含量明显提高,提示敲除基因后小鼠的肿瘤凋亡增加,从而抑制肿瘤的生长。因此,Ephrin-B3有促进H22肿瘤生长的作用。 相似文献
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【目的】与野生型小鼠相比较,采用CRISPR/Cas9技术制备的ETV5基因纯合敲除小鼠在表现出内源性精原干细胞消融的同时伴随着体型和体质的明显弱势,本研究的目的是探究ETV5基因敲除对小鼠肌肉表达谱的影响。【方法】采集6周龄的3只野生型公鼠和3只ETV5纯合敲除公鼠的肌肉组织并抽提RNA,进行转录组测序,并对测序结果进行生物信息学分析,对2组小鼠肌肉样品的差异表达基因进行聚类分析、GO和KEGG富集分析。【结果】2组小鼠的肌肉组织共筛选出了574个差异表达基因,其中,上调基因292个,下调基因282个。发现了多个基因影响ETV5敲除小鼠的生长发育,其中,包括影响小鼠肌肉发育的基因Amd1和影响脂肪累积的基因Chrna2。GO和KEGG分析富集到的通路大多与脂肪代谢和生长发育相关。【结论】本研究结果为ETV5敲除小鼠生长发育缓慢和延迟的分子机制提供了解释,为研究ETV5在生理和病理上的相关功能提供了参考。 相似文献
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为研究皮肤衰老机制和抗皮肤衰老药物的筛选奠定基础。采用腹腔注射盐酸苯胺160 mg·kg-1,每3天一次,注射5次的方法建立皮肤衰老小鼠模型。结果显示:注射盐酸苯胺后,Prdx2基因敲除小鼠与野生型小鼠外周血含海因茨小体红细胞数量均上升(P0.001);小鼠血液活性氧水平升高(P0.01);皮肤组织中Cyclin D1,Cyclin E,p21,p16的表达量和p38,ERK的磷酸化程度均升高(P0.01);小鼠真皮层厚度减少。表明酸苯胺可诱导小鼠皮肤提前衰老,且Prdx2可延缓这一作用。 相似文献
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[目的]探讨PTP1B基因敲除小鼠的繁殖和鉴定方法,为进一步研究蛋白酪氨酸磷酸酶的功能奠定基础。[方法]将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型。提取子鼠鼠尾基因组DNA,利用PCR方法扩增野生型和敲除基因片段,并根据基因片段长度来判断小鼠的基因型。[结果]PTP1B基因杂合子小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,PTP1B基因缺失纯合子小鼠无繁殖能力。[结论]利用PCR方法能够准确鉴定PTP1B基因突变小鼠基因型。 相似文献
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试验尝试构建成体细胞同小鼠早期胚胎的嵌合共生胚胎.取成年人皮肤组织的成纤维细胞,慢病毒转染皮肤成纤维细胞标记EGFP荧光蛋白,同小鼠早期8-细胞胚胎进行嵌合.结果显示慢病毒高效标记人皮肤成纤维细胞表达EGFP荧光蛋白,通过皮肤成纤维细胞与小鼠胚胎干细胞形成的拟胚体环境作用后,皮肤成纤维细胞成功与小鼠胚胎形成嵌合胚,嵌合囊胚形成率为38.08%,表达EGFP荧光蛋白的皮肤成纤维细胞能够嵌合到小鼠胚胎的不同部位.嵌合胚在胚胎干细胞分离培养环境下进行培养,嵌合到小鼠内细胞团的皮肤成纤维细胞参与小鼠内细胞团的组成,参与小鼠内细胞团组成的胚胎占嵌合胚比率为1.74%.小鼠胚胎干细胞拟胚体环境作用可以成功介导人皮肤成纤维细胞同小鼠早期胚胎形成嵌合共生体系. 相似文献
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为筛选维氏气单胞菌减毒活疫苗,为水产重要细菌性病害的防控提供新策略,本文通过荧光实时定量PCR检测三种敲除型菌株smpB、tmRNA及hfq中毒力相关基因表达;并采取腹腔注射法对尼罗罗非鱼进行野生型及三种敲除型感染,观察染病罗非鱼症状,计算累计死亡率及LD50。结果表明,维氏气单胞菌野生型与三种敲除型菌株相比,细菌毒力相关蛋白表达均呈现显著差异,部分毒力相关基因显著下调;三种敲除型菌株LD50分别增加1.24、5.32和19倍。由此可见,三种敲除型维氏气单胞菌可作为候选减毒疫苗,下调显著的hfq菌株是制备减毒疫苗的首选。 相似文献
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嗜水气单胞菌是水环境常见的病原体,具有较强致病性。在本研究中,首次敲除了嗜水气单胞菌aguA基因,通过转录组分析发现aguA敲除后细菌的粘附、致病、胺代谢等生物过程下降。通过qRT-PCR进一步验证发现10个粘附基因、9个发病基因和8个胺代谢基因的mRNA表达水平明显下降；此外,转录组水平分析结合qRT-PCR验证发现VI型分泌系统基因、II型分泌系统基因、鞭毛合成相关基因、菌毛合成相关基因、溶血基因、I型分泌系统基因、肠毒素基因、RTX基因等毒力基因的RNA表达水平也出现下调。对两株菌进行草金鱼的体内感染实验,与野生菌株相比,aguA敲除株感染草金鱼的致病力降低了7.47倍,且aguA敲除株生物膜形成能力降低了16.6%。以上结果显示aguA基因与嗜水气单胞菌的致病性密切相关。 相似文献
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为阐明cilp基因在斑马鱼椎骨和肌间骨发育中的作用,利用CRISPR/Cas9建立了斑马鱼cilp基因敲除纯合突变系（cilp-/-）,对其进行了骨骼表型的观察,并进一步采用qRT-PCR分析了14个骨骼发育相关基因在突变体胚胎发育阶段和成鱼骨骼中的表达水平变化。结果显示,与野生型斑马鱼相比,90 dph（days post hatched）cilp-/-斑马鱼的肌间骨数量显著减少了10.27%（P<0.05）,而肌间骨的长度无明显变化;同时突变体斑马鱼中椎骨发生异常融合及髓棘缺失。qRT-PCR结果显示,与野生型相比,col1a1a、sp7、smad4a和smad5基因在胚胎发育的整个时期都存在显著的差异（P<0.01）;在突变体成鱼尾部骨骼组织中bmp2a、bmp2b、smad5、sp7、runx2a、runx2b和bglap基因的表达量均显著低于野生型,表明cilp基因敲除导致了BMPs和SMADs家族基因的表达水平下降,并下调了下游的成骨细胞发育相关基因的表达量,推测cilp功能缺失可能通过抑制BMPs信号通路,影响成骨细胞分化和骨形成,从而导致了肌间骨数量的减少和脊椎骨异常融合。 相似文献
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旨在探究PrxⅡ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默PrxⅡ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡情况、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞系构建成功;MTT检测发现在1mmol·L-15-FU处理下,shPrxⅡ组细胞存活率明显低于Scramble组;荧光显微照相结果表明shPrxⅡ组细胞凋亡率明显高Scramble组;蛋白质免疫印迹结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞中凋亡标志物PARP、促凋亡蛋白Bad的表达水平明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平明显下降。研究表明,沉默PrxⅡ基因能提高HepG2对5-FU促凋亡作用的敏感性,导致HepG2细胞凋亡水平上升,研究结果可为提高肝癌细胞对于5-FU的敏感性提供新的潜在靶目标。 相似文献
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《南京农业大学学报》2017,(1)
[目的]双半胱氨酸型硫氧还蛋白过氧化物酶Brc2-Cys Prx是过氧化还原蛋白Peroxiredoxins(Prxs)的亚家族。Prxs是植物抗氧化酶防御系统的成员,对清除植物体内活性氧具有重要作用。本文旨在克隆和研究Brc2-Cys Prx基因在不结球白菜处于不同胁迫条件下的表达模式。[方法]以不结球白菜霜霉病抗病自交系‘苏州青’和霜霉病感病自交系‘矮脚黄’为试验材料,利用RACE技术克隆得到不结球白菜Brc2-Cys Prx基因。利用生物信息学方法对该基因进行信息学分析。采用qRT-PCR技术对不结球白菜叶片Brc2-Cys Prx基因在霜霉病菌侵染及NaCl、CdCl_2、PEG6000和ABA等非生物胁迫处理条件下的表达模式进行研究。[结果]Brc2-Cys Prx基因的c DNA全长为999 bp,其中开放阅读框长度为810 bp,共编码270个氨基酸。该蛋白不存在信号肽序列,预测相对分子质量为28.15×10~3,理论等电点为5.87。不结球白菜Brc2-Cys Prx蛋白的二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成。该蛋白含有1个PRX_Typ2cys结构域,属于硫氧还蛋白超家族。系统进化分析表明:不结球白菜Brc2-Cys Prx蛋白与同属植物的进化关系相近,其中与大白菜和甘蓝型油菜进化关系最近。霜霉病菌侵染条件下,Brc2-Cys Prx基因表达呈逐渐上调趋势,在‘矮脚黄’中的表达与‘苏州青’相比上调迟钝,且该基因在‘矮脚黄’中的表达量一直低于‘苏州青’。0.2 mol·L~(-1)NaCl和200 g·L~(-1)PEG6000处理抑制Brc2-Cys Prx基因的表达;150μmol·L~(-1)CdCl_2处理促进Brc2-Cys Prx基因的表达,在24 h达到最大值;100μmol·L~(-1)ABA处理后,Brc2-Cys Prx基因表达上调,而12 h后,表达受抑制。[结论]霜霉病菌侵染条件下,Brc2-Cys Prx在抗性系‘苏州青’和感病系‘矮脚黄’中的表达存在差异,并且在抗病系中的表达量较高,推测Brc2-Cys Prx基因的高转录水平是抗病品种较之感病品种对霜霉病菌侵染具有更高抗性的原因之一。在非生物胁迫条件下,Brc2-Cys Prx基因具有不同的应答模式,推测可能是涉及到不同的物质或信号途径的原因。 相似文献
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【目的】运用CRISPR/Cas9基因编辑技术和体细胞核移植技术获得CD163基因全敲除(CD163 gene knockout,CD163-KO)的克隆猪,验证该基因敲除大白猪的抗蓝耳病特性,并研究其与野生型大白猪在生理、生产和繁殖性能等方面的差别,评估CD163-KO大白猪的主要生产性能。【方法】用猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)流行毒株NADC30-like对本研究所获得的11头CD163-KO大白猪和5头年龄、体质量相当的野生型大白猪进行攻毒试验。连续14 d观察猪的临床症状,记录直肠温度变化,检测血清中PRRSV病毒含量和抗体水平。14 d后取肺部组织进行切片,通过PRRSV免疫荧光试验观察肺脏感染情况。采集CD163-KO和野生型大白猪肺泡巨噬细胞进行免疫染色,观察肺泡巨噬细胞表面CD163蛋白的表达情况;采集猪外周血单核细胞进行诱导分化,观察CD163-KO与野生型大白猪诱导分化的巨噬细胞对血红蛋白-结合珠蛋白复合物的摄取情况。最后,统计分析CD163-KO与野生型... 相似文献
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《中国农业科学》2020,(14)
【目的】明确棉花黄萎病菌(大丽轮枝菌Verticillium dahliae)中一个新基因(VdHP1)的功能,为解析棉花黄萎病菌的致病机制以及棉花黄萎病的防治提供依据。【方法】以大丽轮枝菌野生型菌株V592的基因组DNA和cDNA为模板,对VdHP1全长进行克隆并测序;利用逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别对棉花根系诱导不同时间VdHP1的表达量及V592菌株不同组织中VdHP1的表达量进行测定;构建针对VdHP1的敲除载体、互补载体和过表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化筛选VdHP1基因敲除突变体、互补菌株和过表达菌株;以野生型菌株V592为对照,对VdHP1基因敲除突变体及互补菌株的菌落及菌丝形态进行观察,并对微菌核量、产孢量及致病力进行测定;通过RT-qPCR测定其他致病力相关的基因在VdHP1基因敲除突变体及过表达体菌株中的表达情况。【结果】VdHP1全长为862 bp,预测编码蛋白含268个氨基酸,与GenBank中已注释的基因没有任何的序列相似性。野生型菌株V592受棉花根系诱导6—12 h时VdHP1表达水平显著上调,表明VdHP1在大丽轮枝菌侵染早期发挥作用。VdHP1在分生孢子中的表达量显著高于在菌丝和微菌核中的表达量,表明VdHP1在大丽轮枝菌不同组织中的表达具有差异性。与野生型菌株V592相比,VdHP1基因敲除突变体产孢量和产孢梗显著减少,菌丝分支呈螺旋状,对棉花的致病力明显下降。与侵染钉形成相关基因(VdCrz1、VdNoxB、VdPls1)、分泌蛋白释放相关基因(VdSep5)及分生孢子产生相关基因(Vdpf、VdSge1、VGB、VdPLP、VdCYC8、VdNLP1、VdNLP2)在VdHP1基因敲除体中的相对表达量显著下调,在过表达菌株中上调;而与黑色素合成相关基因(VdCmr1、VdSho1、VdLAC、VdPKS1)在VdHP1基因敲除突变体中则显著上调,在过表达菌株中下调。【结论】VdHP1与大丽轮枝菌分生孢子和产孢梗的产生有关,参与大丽轮枝菌致病;VdHP1对与侵染钉形成、分泌蛋白释放及分生孢子产生相关基因的表达具有正调控作用,对黑色素合成相关基因的表达具有负调控作用。 相似文献
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探究过氧化物还原酶Ⅱ(PeroxiredoxinⅡ,PrxⅡ)在热损伤诱导皮肤角质细胞HaCaT细胞凋亡中的调控作用。利用慢病毒转染技术构建Prx Ⅱ基因敲降细胞系,采用MTT法检测细胞存活率,荧光显微镜照相技术检测细胞凋亡情况及活性氧水平,蛋白质免疫印迹法检测蛋白质表达水平,并对比分析基因敲降细胞和正常细胞的各项指标差异。结果显示,热损伤处理的PrxⅡ基因敲降细胞的凋亡率及活性氧水平均明显高于热损伤处理的正常细胞,凋亡相关蛋白质表达水平均有显著性差异。证明PrxⅡ可利用清除活性氧的功能来调节Bcl-2的表达、caspase-3的活化从而有效缓解热损伤HaCaT细胞的凋亡。 相似文献