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构建PrxⅡ基因敲降L02细胞系并确定PrxⅡ基因对L02细胞增殖的影响。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术、流式细胞术、荧光显微照相、蛋白质免疫印迹、MTT asssay等方法建立并检验PrxⅡ敲降L02细胞系及其对L02细胞的增殖影响。结果显示:选用5’-CCGCTTGTCTGAGGATACGTT-3’片段作为干扰PrxⅡ基因片段,利用慢病毒敲降L02细胞。同时处理嘌呤霉素筛选得到shPrxⅡ组细胞和Scramble组细胞,使用流式细胞术、荧光显微照相技术对shPrxⅡ组细胞和Scramble组细胞进行检测,结果均显示出GFP蛋白表达;此后利用蛋白质免疫印迹法检测出shPrxⅡ组细胞中PrxⅡ蛋白表达水平较Blank、Scram-ble组显著降低(P0.05),Blank组与Scramble组细胞中PrxⅡ蛋白表达水平无明显差异。在MTT结果中显示shPrxⅡ组细胞增殖速率明显高于Scramble组,且具有统计学意义。成功构建PrxⅡ敲降的L02细胞系,发现PrxⅡ敲降后显著提高L02细胞的增殖速率。 相似文献
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过氧化物酶V(Peroxiredoxin V,Prx V)是过氧化物酶家族(Peroxiredoxins)中的一员,具有清除细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)从而抑制由于氧化应激导致的细胞凋亡的作用。该研究通过慢病毒载体构建Prx V基因沉默的HepG2肝癌稳定细胞系。采用荧光照相及蛋白免疫印迹法对其结果进行鉴定,为研究Prx V的功能提供良好的基础。结果表明:成功构建Prx V基因沉默的HepG2肝癌细胞系。 相似文献
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探究过氧化物还原酶Ⅱ(PeroxiredoxinⅡ,PrxⅡ)在热损伤诱导皮肤角质细胞HaCaT细胞凋亡中的调控作用。利用慢病毒转染技术构建Prx Ⅱ基因敲降细胞系,采用MTT法检测细胞存活率,荧光显微镜照相技术检测细胞凋亡情况及活性氧水平,蛋白质免疫印迹法检测蛋白质表达水平,并对比分析基因敲降细胞和正常细胞的各项指标差异。结果显示,热损伤处理的PrxⅡ基因敲降细胞的凋亡率及活性氧水平均明显高于热损伤处理的正常细胞,凋亡相关蛋白质表达水平均有显著性差异。证明PrxⅡ可利用清除活性氧的功能来调节Bcl-2的表达、caspase-3的活化从而有效缓解热损伤HaCaT细胞的凋亡。 相似文献
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阐明大黄素(Emodin)诱导AGS人胃癌细胞凋亡过程中过氧化物还原酶5(Peroxiredoxin V;Prx V)的作用及其机制。为了检测大黄素对AGS人胃癌细胞的毒性作用,利用MTT法检测大黄素对AGS细胞存活率的影响。利用大黄素在不同浓度段(0,1,5,10,20,30μmol·L-1)和不同时间段(0,3,6,12,24 h)处理AGS细胞,用Annexin V-FITC和PE进行标记,利用流式细胞仪检测其凋亡情况,同时大黄素在不用时间段(0,3,6,12,24 h)处理AGS细胞,利用蛋白质免疫印迹法检测Prx V蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平。结果显示,大黄素能够显著抑制AGS人胃癌细胞存活率,并呈时间和浓度依赖性地诱导细胞凋亡,同时伴随着活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的升高,加入ROS清除剂NAC后,AGS细胞凋亡比率明显下降。大黄素通过显著抑制Prx V、Bcl-2和pro-caspase3蛋白质水平,上调Bad的表达诱导AGS细胞凋亡。研究表明,大黄素通过抑制Prx V蛋白水平,导致细胞内ROS水平升高,激活经典细胞凋亡途径导致AGS人胃癌细胞凋亡。 相似文献
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目的:通过检测肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞中Runx3基因启动子区域甲基化状态,探讨肝癌细胞系经药物5-Aza-CdR处理后Runx3基因重新表达的可能性及对细胞生长的影响,寻找抗癌治疗的药物新靶点。方法:采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术分别对5种肝细胞癌细胞系Runx3基因启动子区域甲基化状态进行检测,用药物5-Aza-CdR2μmol/L处理肝癌细胞HepG23d,继续常规培养5d后,RT-PCR检测Runx3 mRNA表达情况,利用集落形成实验观察细胞的生长活性,应用显微镜观察细胞形态及凋亡变化。结果:在5种肝癌细胞系中,有3种细胞Runx3基因启动子区域存在甲基化异常;肝癌细胞HepG2经5-Aza-CdR处理后,HepG2细胞检测出Runx3基因重新表达,细胞克隆形成率显著降低,显微镜观察显示部分细胞体积缩小、形态趋于规则及凋亡细胞明显增多。结论:Runx3基因启动子区域甲基化可能是导致Runx3基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-CdR能有效激活Runx3基因重新表达,抑制肝癌细胞生长,诱导部分肿瘤细胞凋亡。 相似文献
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[目的]研究去甲基川陈皮素(5-demethylnobiletin,5DN)对前列腺癌细胞活性的影响。[方法]通过MTT法检测5DN对PC3和DU145细胞的毒性。运用DAPI细胞核染色、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法、细胞划痕试验探究5DN对前列腺癌细胞凋亡、迁移的影响。[结果]5DN对PC3和DU145细胞增殖有明显的抑制作用,IC_(50)分别为49.33、54.14μmol/L。5DN处理后在2个细胞系中抑制细胞凋亡基因(Bcl-2、AKT1、AKT2)的mRNA的转录水平显著降低,促进凋亡基因(caspase-3、Bax)的转录水平显著升高。DU145中促进凋亡基因PTEN的mRNA的转录水平显著升高,促凋亡蛋白caspase 9的表达量显著升高。同时,5DN能有效抑制PC3细胞的迁移。[结论] 5DN能促进前列腺癌细胞的凋亡并抑制它的增殖和迁移。 相似文献
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目的探讨沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)在5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)耐药胃癌细胞(SGC-7901/5-FU)中的表达情况及其对细胞化疗耐药的影响。方法通过定量RT-PCR和Western blot方法检测SIRT1 mRNA与蛋白在5-FU敏感的SGC-7901亲本细胞、SGC-7901/5-FU细胞及在SIRT1-siRNA转染后的SGC-7901/5-FU细胞中的表达;选择高干扰效率的SIRT1-siRNA转染SGC-7901/5-FU细胞,CCK8法检测5-FU对转染细胞的活性影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,Western blot法检测其对细胞p-Akt、Bax、Bcl-2和P-pg表达的影响。结果 SGC-7901/5-FU细胞中的SIRT1 mRNA与蛋白表达水平均显著高于SGC-7901亲本细胞(P0.001);SIRT1-siRNA转染SGC-7901/5-FU细胞后,SIRT1的mRNA与蛋白表达均显著降低(P0.001);5-FU作用后,SIRT1-siRNA转染组的SGC-7901/5-FU细胞增殖活性明显下降(P0.001),细胞凋亡明显增加(P0.001),且细胞中的p-Akt、Bcl-2和P-pg含量明显下降(P0.001),Bax含量明显上升(P0.001)。结论 SIRT1在5-FU耐药胃癌细胞中高表达,干扰SIRT1表达后可通过抑制细胞增殖与促进细胞凋亡来提高耐药胃癌细胞对5-FU的敏感性,这可能与细胞增殖通路相关蛋白、凋亡以及细胞多药耐药性相关蛋白变化相关。提示抑制SIRT1可作为降低胃癌多药耐药性及提高胃癌对化疗药物敏感性研究的一个新思路。 相似文献
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以L-茶氨酸作对照,评估本实验室合成的新颖的茶氨酸衍生物-茶氨酸溴香酰胺（TBrC）对人肝癌HepG2细胞系体内外生长的抑制作用,并初步探究其作用的分子机制。采用MTT法检测不同浓度的TBrC对HepG2细胞体外生长的影响,应用蛋白质印迹法检测解析HepG2细胞中与癌细胞凋亡和生长密切相关蛋白的表达和药物可能作用的分子靶点。此外,建立动物肿瘤模型,与对照组茶氨酸和临床常用抗癌药物五氟尿嘧啶组相比较,评价TBrC对荷瘤裸鼠人肝癌HepG2肿瘤生长的抑制效果。实验结果显示,TBrC抑制人肝癌细胞体内外生长的活性超过其母体化合物茶氨酸分别为3倍和4倍以上,对小鼠生长无明显毒性。TBrC比茶氨酸更显著地抑制肝癌细胞生长因子受体c-Met和抗凋亡的Bcl-2等蛋白的表达;此外,TBrC大大上调促进凋亡的Bax蛋白的表达。TBrC抑制c-Met信号传导通路,下调Bcl-2/Bax蛋白比率可能是其作用的分子机制之一。这些结果提示,TBrC具有广泛应用于临床治疗和（或）辅助治疗人肝癌和其他癌症的潜力。 相似文献
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目的探讨高良姜二苯基庚烷类、黄酮类、挥发油类及高良姜醇提物（组分Ⅰ-Ⅳ）对人肝癌HepG2细胞过氧化损伤的保护作用。方法采用减压硅胶柱层析（VLC）法对高良姜提取物进行分离;采用薄层色谱法（TLC）结合高效液相-质谱联用（HPLC-MS）法对各组分进行归属与鉴定;建立H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡。结果组分Ⅰ和模型组的细胞存活率分别为71.9%、50.3%,两组的差异具有显著性（P〈0.05）;与模型组比较,组分Ⅰ和Ⅱ均可降低细胞凋亡率（P〈0.05）,其中组分Ⅰ更明显。结论高良姜组分Ⅰ和组分Ⅱ均有一定的抗氧化活性,其中组分Ⅰ更明显。 相似文献
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目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关. 相似文献
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目的 研究Notch1在肝癌组织及细胞中的表达并初步探讨Notch1下调后诱导肝癌细胞调亡的机制。方法 2016年3月至2016年9月于广东医科大学附属医院肝胆外科收集32例肝癌病人样本,利用qRT-PCR方法检测肝癌癌组织及癌旁组织中Notch1基因的表达,免疫组化检测组织中Notch1蛋白表达,siRNA沉默肝癌细胞Notch1表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot方法检测Notch1、Bcl2和Bax蛋白表达,统计分析Notch1表达水平与肝癌病人临床诊断指标甲胎蛋白（AFP）的相关性。结果 肝癌组织标本中Notch1高表达率为71.9%（23/32）,明显高于癌旁组织的28.1%（9/32）,差异具有显著统计学意义（P<0.01）;Pearson相关性分析显示,Notch1与AFP存在正相关性（R2=0.3376,P=0.0036）;免疫组化验证Notch1蛋白分别在肝癌癌组织样本中高表达和癌旁组织中低表达;siRNA干扰Notch1基因表达后,镜下发现肝癌细胞4401增殖抑制,流式检测示转染组明显凋亡,蛋白免疫印迹显示凋亡相关蛋白Bcl2蛋白下调、Bax表达上调。结论 Notch1与肝癌的发生、发展相关,下调Notch1可诱导肝癌细胞凋亡,同时Notch1还可作为临床治疗肝癌的潜在新靶点。 相似文献
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重组新城疫病毒对肝癌肺转移鼠的治疗效果 总被引：1，自引：0，他引：1
文章利用重组新城疫病毒(rNDA)治疗肝癌肺转移鼠,将免疫调节基因白细胞介素2(IL2)插入rNDV基因组,拯救获得rNDV-IL2。MTT法检验rNDV-IL2对肝癌HepG2细胞体外抑制效果。通过小鼠尾静脉注射H22肝癌细胞,构建肝癌细胞肺转移模型,腹腔注射rNDV和rNDV-IL2,治疗肝癌肺转移模型小鼠。结果表明,rNDV-IL2有效感染HepG2细胞,表达外源基因IL2并抑制HepG2细胞增殖。重组新城疫病毒rNDV-IL2治疗试验动物后,体内IL2基因表达量提高,重组新城疫病毒有效控制转移灶形成,且显著促进T细胞增殖,提高试验动物存活率,未治疗组、rDNV载体治疗组和rNDV-IL2治疗组30 d成活率分别为0、50%和77.8%。 相似文献
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旨在探究低温等离子体（NTAPP）处理的PAM对DMSCs活性的影响,阐明PAM促进DMSCs发生细胞凋亡的机制,在体外提取小鼠原代真皮间充质干细胞（DMSCs）,并采用流式细胞术检测其表面Marker,油红O和茜素红检测其成脂成骨能力、流式细胞术测定凋亡情况以及活性氧（ROS）水平、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白以及抗氧化蛋白表达水平。结果表明,成功提取DMSCs,并具有成脂成骨分化能力;与未处理组相比,低温等离子体活化介质（PAM）处理后可引起细胞内的ROS水平升高导致细胞凋亡,同时造成凋亡相关蛋白Bax表达水平上升、Bcl2表达水平下降,以及细胞内抗氧化蛋白Prx I、Prx V、GPX表达水平升高。研究表明,一定剂量的PAM能上调细胞内ROS水平,导致DMSCs细胞凋亡水平上升,研究结果可为今后筛选PAM诱导DMSCs增殖的最佳条件提供前期结果,也为丰富低温等离子体在干细胞领域的研究提供理论依据。 相似文献
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《吉林农业大学学报》2015,(6)
为研究FTY720诱导K562细胞凋亡与线粒体途径的关系。体外培养人白血病K562细胞,用不同浓度FTY720处理细胞24 h,台盼蓝染色法检测K562细胞存活率;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体功能。免疫印迹技术检测线粒体相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。收集FTY720处理48 h细胞,流式细胞技术检测细胞周期。结果表明:随FTY720浓度的增加,K562细胞的存活率下降,细胞凋亡增加,线粒体膜电位下降,促凋亡蛋白Bax表达明显增加。细胞周期分析发现,Sub G1期细胞增加,而S期和G2M期细胞减少。表明线粒体途径参与FTY720诱导K562细胞凋亡。 相似文献
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目的 研究半边旗二萜类成分PAG对人肝癌耐药细胞株增殖与凋亡机制.方法HepG2/ADM细胞用不同浓度(0～75μmol/L)PAG处理24、48、72 h,分别用MTT、流式细胞术、Western blot、DCFH-DA法检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达、活性氧自由基(ROS)水平.结果PAG呈剂量依赖性抑制细胞增殖及caspase 3、PARP和Bcl-2表达,增加G2/M期细胞分布、细胞凋亡、细胞内ROS水平及actived-caspase 3、cleaved-PARP和Bax表达,促进线粒体中细胞色素C释放到胞质;l mmol/L乙酰半胱氨酸可阻断PAG对细胞增殖的抑制作用.结论 半边旗二萜类成分PAG可通过ROS诱导的线粒体凋亡克服肝癌多药耐药. 相似文献
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目的观察漆树黄酮对人肝癌细胞系HepG2端粒酶活性及NF-κBp65表达的影响。方法端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法（TRAP-ELISA）检测不同浓度漆树黄酮对HepG2细胞端粒酶活性的影响,RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达,Western blot检测NF-κBp65蛋白表达。结果漆树黄酮对端粒酶活性具有抑制作用。漆树黄酮组hTERT mRNA和NF-κBp65蛋白表达降低,并且与端粒酶活性下调存在相关性。结论漆树黄酮可能通过下调NF-κBp65蛋白表达而抑制HepG2细胞hTERTmRNA转录,导致端粒酶活性降低。 相似文献
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[目的]研究葛仙米提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的活性。[方法]采用二甲基四氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,形态学法观察凋亡的特征性变化,AnnexinV/PI双染及PI单染流式细胞术法检测凋亡率。[结果]经不同浓度提取物作用后,HepG2细胞的生长受到显著抑制,并呈现时间-浓度依赖关系趋势。观察细胞形态,发现有凋亡特征性变化。AnnexinV/PI双染结果显示,癌细胞早期凋亡率随提取物浓度的升高而显著增高,最高可达79.2%。PI法同样显示凋亡的发生,其凋亡峰最大比率为9.6%,显著高于对照组。[结论]葛仙米甲醇提取物能够诱导肝癌细胞HepG2的凋亡。 相似文献
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目的探讨灵芝多糖对肝癌细胞株HepG2的PTEN蛋白的影响。方法以肝癌细胞株HepG2为供体,氟尿嘧啶作为阳性对照,采用MTT法检测不同浓度和时间灵芝多糖对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用PTEN试剂盒检测PTEN蛋白的活性。结果灵芝多糖对人肝癌细胞24h的抑制率为60%,48h的抑制率为100%,6h凋亡率为63.3%,PTEN蛋白表达下降。结论灵芝多糖对肝癌细胞株HepG2的增殖有明显抑制作用,其凋亡机制可能与PTEN下调有关。 相似文献