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1.
田间灰飞虱抗药性相关细胞色素P450基因和酯酶基因的筛选 总被引：2，自引：0，他引：2
利用毒死蜱、吡虫啉和溴氰菊酯等3类不同药剂,通过毒力生测首先确定了田间灰飞虱对杀虫剂的低水平多重抗性特性;其次通过解毒酶活力测定,发现抗性品系的细胞色素P450氧化酶和酯酶明显升高;进而根据灰飞虱转录组数据进行引物设计,通过PCR克隆对转录组中的细胞色素P450及酯酶基因进行验证,在得到53条细胞色素P450基因序列及72条酯酶基因序列的基础上,利用半定量PCR比较这些基因在灰飞虱田间抗性品系和敏感品系间的表达差异。结果发现:细胞色素P450的CYP6家族中有10条,CYP4家族中有6条,这16条基因序列在抗性品系中的表达量明显高于敏感品系;酯酶中也有12条基因系列在抗性品系中的表达量明显高于敏感品系,它们中3条来自羧酸酯酶家族,8条来自磷酸酯酶家族,1条来自其他酯酶家族。提示:解毒酶基因的过量表达是灰飞虱田间低水平多重抗性的主要机制,也是抗药性发展初期的关键因素,利用分子生物学技术进行田间监测,有利于了解田间灰飞虱的抗药性发展。 相似文献
2.
朱砂叶螨抗甲氰菊酯品系选育及遗传分析 总被引：2，自引：1，他引：2
从保留的室内相对敏感品系分出一个亚品系开始培育朱砂叶螨的甲氰菊酯抗药性品系。连续用药40代，抗性增长68.5倍。以此抗性品系（R）和相对敏感品系（S）杂交、回交，研究朱砂叶螨对甲氰菊酯的抗性遗传形式。正交（SR）和反交（RS）F1代的LC-P线介于S与R之间且偏向S方，显性度DSR和DRS分别为-0.83和-0.29，表明抗性由不完全隐性基因控制；两D值（DRS和DSR）95%置信限没有重叠，表明两个 D值（DSR和DRS）存在显著差异，也表明朱砂叶螨对甲氰菊酯的抗性遗传可能存在母体影响或核外效应；对F1杂合子与亲本的回交（SR♀×S♂和RS♀×R♂）F2代测定表明抗性由单基因控制。 相似文献
3.
利用DD-PCR技术分析水稻铝诱导基因的表达差异 总被引：38，自引：2，他引：38
利用差异显示（Differential Display PCR，简称为DD-PCR）技术比较了水稻对铝极敏感的品种pp2462-11和极抗品种Pedel在铝胁迫条件下基因的表达差异。结果表明：抗性品种和敏感品种在铝胁迫下其苗期mRNA存在明显差异，实验共发现25个差别cDNA，铝既可诱导抗性品种和敏感品种的基因表达，又可抑制其基因表达。本研究推测抗性品种特异表达的片段可能与合成抗性蛋白有关，敏感品种基因的特异表达可能产生一些毒害蛋白，抑制根的生长。 相似文献
4.
【目的】克隆淡色库蚊氯菊酯抗性相关XND-P450基因,并对其进行生物信息学分析,研究其在敏感品系和抗性品系淡色库蚊中表达量的差异,为阐明XND-P450的功能和抗性机制奠定基础。【方法】依据淡色库蚊抗性品系与敏感品系差异表达的EST片段设计PCR引物,采用RACE技术克隆淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因XND-P450全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析;采用半定量PCR技术,对XND-P450基因在敏感品系和抗性品系淡色库蚊中的表达量差异进行检测。【结果】经过克隆获得长度为1 679bp的淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因XND-P450全长cDNA,编码523个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因与致倦库蚊、埃及伊蚊CYP450基因的同源性在70%以上,其编码蛋白相对分子质量为33 244.9u,理论等电点为8.10,属于不稳定的亲水蛋白,氨基酸序列与致倦库蚊及冈比亚按蚊CYP450蛋白的同源性在40%以上。半定量PCR电泳分析显示,抗性品系淡色库蚊中的XND-P450基因表达量较敏感品系高。【结论】克隆了淡色库蚊氯菊酯抗性相关XND-P450基因,该基因在抗性品系淡色库蚊中的表达量高于敏感品系,推测其与氯菊酯抗性相关。 相似文献
5.
根据已获得的致倦库蚊抗性品系与敏感品系差异表达的EST片段(GeneBank号:EC093827.1),设计特异扩增引物,运用RACE技术从淡色库蚊抗性品系中扩增出该基因的全长cDNA序列,并分析其生物信息学特性,获得淡色库蚊烯醇化酶基因cDNA全长1 311bp序列,编码433个氨基酸,该基因编码的蛋白为水溶性蛋白,具有13个磷酸化位点。同源比对及系统进化分析表明,该基因于不同物种间高度保守,其氨基酸序列与同属蚊科的致倦库蚊同源性高达97.8%,并在其保守结构域中含有多个高度保守的氨基酸位点,推测该基因与淡色库蚊的氯菊酯抗性有一定相关性,并初步预测其在蚊虫产生抗药性过程中的可能机制。 相似文献
6.
为阐明肌动蛋白抗药性相关机制及研制新型卫生杀虫剂奠定基础,根据库蚊抗性与敏感品系差异表达的EST片段,设计特异扩增引物,运用RACE技术从淡色库蚊抗性品系中扩增出该抗性相关基因的全长cDNA序列,分析其生物信息学特性。结果表明,获得淡色库蚊肌动蛋白基因cDNA全长1 708bp序列,其编码377个氨基酸;该基因编码的蛋白为膜蛋白,具有27个跨膜螺旋、1个信号肽切割位点、27个磷酸化位点。 相似文献
7.
在实验室内研究了高温和阿维菌素对朱砂叶满的胁迫效应及胁迫后热休克蛋白的表达。结果表明,朱砂叶螨在34℃下,持续高温饲养1年后对阿维菌素的LC50为26℃下饲养的敏感品系的2.1396倍;抗阿维菌素品系连续用药24代,抗性倍数达4.1494倍。抗阿维菌素品系与敏感品系在高温48℃下胁迫1h后死亡率差异不显著,但均显著高于耐高温品系;采用SDS-PAGE电泳检测各品系43℃热处理前后的蛋白表达情况,结果发现,朱砂叶螨耐高温品系与敏感和阿维菌素抗性品系相比,热急前后,97.2kDa条带都特异表达;阿维菌素抗性品系与敏感品系相比,28.5、26.8kDa条带表达增强,抗性品系43℃热激1.5h后,98.6kDa条带表达明显强于其它条带;43℃热激1.5h后,各品系分子量为54.9kDa的主条带表达减弱,75.9kDa条带表达增强,其中以耐高温品系的75.9kDa条带表达最强。研究结果推测这些蛋白表达的变化可能与其耐热性及抗药性有关。 相似文献
8.
昆虫共生菌广泛参与寄主昆虫抗药性的形成,但对其抗性产生的分子机制的研究相对较少.本研究首先在室内敏感品系基础上建立了灰飞虱抗、感吡虫啉品系,利用现有灰飞虱转录组数据库,序列验证并定量分析了15条灰飞虱共生真菌P450基因,与敏感品系相比,发现其中10条P450基因在吡虫啉抗性品系中显著过量表达(LsSFP450-2、LsSFP450-8、LsSFP450-14、LsSFP450-12、LsSFP450-4、LsSFP450-5、LsSFP450-10、LsSFP450-7、LsSFP450-15、LsSFP450-9),由此推断灰飞虱共生真菌P450解毒代谢途径同样是介导吡虫啉抗药性的潜在因子,此结果为宿主共生菌介导杀虫剂抗性研究及田间害虫有效化学防控提供了新理论视角. 相似文献
9.
[目的]明确土耳其斯坦叶螨对阿维菌素和哒螨灵的抗药性机理和抗性适合度.[方法]在28℃条件下对土耳其斯坦叶螨敏感品系进行室内抗药性选育,选育出对阿维菌素和哒螨灵的抗性品系,组建生命表进行抗性适合度研究.并比较抗性品系和敏感品系的几种常见解毒酶的活性测定来进行抗性机理研究.[结果]土耳其斯坦叶螨对阿维菌素的抗性发展比较慢.在抗性适合度的研究中发现土耳其斯坦叶螨的两种抗性品系在发育历期、产卵量等指标跟敏感品系相比均存在不利性.并发现羟酸酯酶在两种抗性品系和敏感品系中比活力表现不明显,在抗阿维菌品系和敏感系中碱性磷酸酯酶存在差异性,这说明这种酶在解毒阿维菌素过程中起作用.谷胱甘肽S-转移酶、多功能氧化酶、酸性磷酸酯酶和碱性磷酸酯酶在抗哒螨灵品系和敏感品系中均表现差异.说明这些酶在解毒哒螨灵的过程中起作用.[结论]阿维菌素和哒螨灵的抗性与解毒酶活性的变化有关,并且在产生抗性后存在适合度不利性. 相似文献
10.
桃蚜的抗性选育及其两种解毒酶活性研究 总被引：3，自引：0，他引：3
于室内对桃蚜进行高效氯氰菊酯抗药性筛选，选育至10代后抗性倍数增长到49．86倍。生化分析表明，抗性品系酯酶(Est)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)活性均显著高于敏感品系。比较两个品系酯酶与谷胱甘肽-S-转移酶活性个体频率分布发现，抗性品系的桃蚜有更多的个体向酶活性高的区域分布。酶动力学测定结果显示，抗性桃蚜酯酶对底物α-NA的Km和Vmax都显著大于敏感品系；而谷胱甘肽S-转移酶对底物DTNB的Km则显著小于敏感品系，但两个品系的Vmax差异不显著。酯酶同工酶电泳表明，与敏感品系相比，抗性品系缺失E3酶带，但其酯酶同工酶染色较深。 相似文献
11.
对久效磷抗性棉铃虫品系的选育及其乙酰胆碱酯酶的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
用久效磷对采集于山东聊城抗性地区的棉铃虫Helicoverpa armigera (Huebner)进行抗性品系选育，经过10代的室内选育，抗性倍数达211．88倍，为选育前的6．67倍，发现筛选后对氰戊菊酯，氯氰菊酯和灭多威的抗生分别下降了8．13，7．44和13．36倍，对甲基对硫磷和辛硫酸的抗性基本保持不变，这说明久效磷与其他5种被试药剂之间没有明显的交互抗性，还对抗，感棉铃虫体内AChE进行了研究，对久效磷抑制粗酶液的实验表明，抗性品系锦铃虫体内AChE的交互抗笥，还原抗，感棉铃虫体内AChE进行研究，对久效磷抑制粗酶液的实验表明，抗性品系棉铃虫体内AChE的I50是敏感品系的3．18倍，酶液纯化使抗，感品系AChE的I50分别下降6．69和3．49倍，说明粗提液中存在AChE保护因子，且这种保护因子在抗性品系中更有效，但纯化后，抗，感品系的AChE敏感性之间仍存在1．66倍的差异，此外，两品系AChE的动力学参数也存在显差异，由此认为AChE敏感性降低与其它因子共同组成了棉铃虫对久效磷的抗性机制。 相似文献
12.
抗氟苯虫酰胺小菜蛾差异表达基因及其通路 总被引：1，自引：1，他引：0
【目的】随着氟苯虫酰胺等双酰胺类杀虫剂的广泛应用,小菜蛾（Plutella xylostella）对该类药剂的抗性愈发突出。研究旨在从转录组水平研究小菜蛾对氟苯虫酰胺的抗性机制,明确小菜蛾对氟苯虫酰胺产生抗性的关键基因及通路,为揭示小菜蛾对氟苯虫酰胺的抗性机制打下基础。【方法】以室内筛选的小菜蛾抗氟苯虫酰胺品系（Rh28）、田间抗性种群（Rz36）和敏感品系（S）为材料,通过转录组测序技术（RNA-Seq）,获得抗性小菜蛾品系/种群在转录水平上的差异表达基因及抗性显著上调表达基因,采用基因本体（GO）显著性富集分析及京都基因与基因组百科全书数据库（KEGG）富集分析,确定差异表达基因具有的主要生物学功能及其参与的主要生化代谢和信号转导途径。【结果】通过将不同抗性品系/种群与敏感品系的RNA-Seq数据对比,获得数量不等的差异表达基因。将差异基因富集的生物学过程（biological process）和信号通路（pathway）进行GO分析,发现其主要集中于对刺激物的反应（response to stimulus）、催化活性（catalytic activity）和代谢过程（metabolic process）等条目中;而KEGG分析发现,差异基因主要集中于代谢通路（metabolic pathway）中,基因数量占比最高,为17.84%。通过统计分析进一步获得了抗性显著上调表达基因,并对其中218个基因开展了GO分析,其仍然主要集中在代谢过程、对刺激物的反应和生物调节（biological regulation）等条目中;通过对抗性显著上调基因进行KEGG分析,发现其仍主要集中在代谢通路中,其中谷胱甘肽-S-转移酶、细胞色素P450解毒酶及参与昆虫多种生理反应的热激蛋白（Hsp）超基因家族等基因的表达量均显著上调。通过聚类热图分析发现,显著表达上调的基因较多集中在内质网上蛋白质的加工（protein processing in endoplasmic reticulum）、酪氨酸代谢（tyrosine metabolism）、咖啡因代谢（caffeine metabolism）和Wnt信号通路（Wnt signaling pathway）中。【结论】获得了小菜蛾抗氟苯虫酰胺差异表达基因及抗性显著上调表达基因,其主要富集于代谢过程、应激反应及对刺激物的反应等条目中,这些基因的相互协同调控是小菜蛾对氟苯虫酰胺产生抗性的重要机制。 相似文献
13.
在实验室内对桔全爪螨进行辛硫磷抗性选育,选育12代后抗性上升了18.6倍。比较抗辛硫磷品系和相对敏感品系体内多功能氧化酶的酶学特性及辛硫磷和增效醚(PBO)对该酶的抑制作用,结果表明,桔全爪螨抗性品系多功能氧化酶的活性、比活力和米氏常数(Km)均显著高于敏感品系。辛硫磷对敏感品系体内MFO的抑制效果显著强于抗性品系,且MFO活性抑制率与药剂抑制浓度之间呈显著的线性关系。以PBO作用于桔全爪螨,相对敏感品系和抗性品系MFO的活力均受到抑制,但对抗性品系的抑制效果强于敏感品系。研究结果说明桔全爪螨对辛硫磷的抗性形成与多功能氧化酶的活力的升高有关。 相似文献
14.
桃蚜抗性品系选育及其3种解毒酶活性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
对桃蚜进行室内高效氯氰菊酯抗药性筛选,选育至10代后抗性倍数增长到49．9倍。生化分析表明,抗性品系酸性磷酸酯酶(ACP)、碱性磷酸酯酶(ALP)及多功能氧化酶(MFO)活性均显著高于敏感品系。磷酸酯酶酶动力学测定结果表明,与敏感品系相比,抗性桃蚜酸性磷酸酯酶对底物的km,kmax差异都不显著;碱性磷酸酯酶Km差异不显著而Vmax则显著大于敏感品系。 相似文献
15.
采用纸片扩散法测定金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)对6种抗生素的敏感性。结果表明,在测定的121株金葡菌中,耐苯唑西林金葡菌(MRSA)为26株,占21.5%;对苯唑西林敏感菌(MSSA)为93株,占76.9%;中介菌株为2株,占1.6%。金葡菌对6种抗生素耐药率最低的是头孢噻肟为2株,占1.6%。mecA基因的PCR扩增结果显示:所有的MSSA mecA基因均阴性,中介株mecA基因阳性1株,而MRSA中mecA基因阳性株为9株。MSSA对大部分抗生素仍保持良好的敏感性,而MRSA表现为多重耐药性,PCR技术可以作为快速检测金葡菌耐药基因的有效方法。 相似文献
16.
【目的】通过比较Cry1Ac抗、感棉铃虫昆虫中肠碱性磷酸酶（ALP1）表达量的差异及抗性棉铃虫取食Cry1Ac蛋白对ALP1表达量的影响,分析ALP1表达量变化与抗性的关系,为进一步明确Bt抗性机制、制定抗性治理策略提供理论依据。【方法】利用实时荧光定量PCR技术,比较敏感棉铃虫、Cry1Ac抗性棉铃虫取食含Cry1Ac蛋白的饲料和正常饲料后ALP1表达量的差异。【结果】ALP1在棉铃虫整个发育期都表达,幼虫的表达量最高,蛹期表达量最低,在成虫体内也有较高的表达;ALP1在幼虫中肠表达量最高,其次是后肠、前肠、马氏管,表皮中的表达量最低;与敏感品系相比,对Cry1Ac具有中等水平抗性的棉铃虫ALP1表达量明显增加,尤其是取食含Cry1Ac蛋白饲料的抗性棉铃虫幼虫的ALP1的表达量显著升高,但抗性棉铃虫取食正常饲料后,2、3龄幼虫的ALP1的表达量与敏感棉铃虫差异不显著;所有的抗性品系4龄棉铃虫幼虫中肠ALP1的表达量都显著高于敏感品系,而且随着棉铃虫抗性倍数的升高,ALP1的表达量呈逐渐降低的趋势。【结论】抗性棉铃虫中肠ALP1表达量的改变可能与Cry1Ac抗性、Cry1Ac代谢有一定的关系。 相似文献
17.
嗜卷书虱抗性与敏感品系乙酰胆碱酯酶的比较 总被引：2，自引：0，他引：2
对嗜卷书虱(LiposcelisbostrychophilaBadonnel)DDVP抗性品系(RDDVP)和PH3 抗性品系(RPH3 )乙酰胆碱酯酶(AChE)的生物化学性质进行了初步研究。比较发现嗜卷书虱RDDVP品系和RPH3 品系的酶原蛋白均显著高于敏感品系(P< 0. 05), 2个抗性品系间也存在着显著差异(P< 0. 05)。RDDVP和RPH3 品系的AChE活力和比活力都明显低于敏感品系,且差异均达到了显著水平(P< 0. 05 )。RDDVP品系的Km 值较敏感品系显著升高(P< 0.05),是敏感品系的1. 33倍,说明酶发生了质的变化,与底物的亲和能力显著降低;而RPH3 品系无显著变化。从Vmax看,RDDVP无明显变化,而RPH3 却显著降低(P< 0. 05)。研究结果表明, 2个抗药性品系都存在靶标抗性,其抗性的形成与AChE在量和(或)质上的变化有一定的相关性。 相似文献
18.
【目的】大豆疫霉根腐病是由大豆疫霉菌引起的严重影响大豆生产的世界性病害之一,选用抗病品种是控制该病最经济有效的措施。筛选抗大豆疫霉菌PGD1的优异抗源和多抗疫霉根腐病种质资源,推导大豆种质抗疫霉根腐病基因,为热带、亚热带地区大豆抗病育种提供有效抗源。【方法】采用下胚轴创伤接种法,利用在广东发现并分离的大豆疫霉菌PGD1菌株,接种鉴定主要来自广东、广西、福建、海南、湖南、江西和四川等华南省份631份大豆种质资源的抗病性,筛选抗大豆疫霉菌PGD1种质资源;再用其他6个不同毒力的大豆疫霉菌株接种鉴定抗大豆疫霉菌PGD1的种质,筛选多抗资源,通过基因推导方法分析抗病种质的抗病基因类型。【结果】631份大豆种质中有101份种质抗大豆疫霉菌PGD1,占鉴定种质的16.0%;73份为中间反应类型,占11.6%;457份表现感病,占72.4%。其中83份抗大豆疫霉菌PGD1的种质对其他6个不同毒力菌株Pm14、Pm28、PNJ1、PNJ3、PNJ4、P6497的侵染率分别为28.9%、34.9%、9.6%、66.3%、57.8%和10.8%。4份种质同时抗7个不同毒力的大豆疫霉菌株,分别为ZDD21538、ZDD21604、ZDD14286和明夏豆1号,占鉴定种质的4.8%。毒力频率为0的种质有15份,占鉴定种质的18.1%。83份大豆种质对7个不同毒力的大豆疫霉菌株共产生20种反应型,1种反应型与单个抗病基因的鉴别寄主Williams79反应型一致,可能含有抗病基因Rps1c;45份种质产生的9种反应型符合一些2个或2个以上已知抗病基因组合的反应型,这些种质可能含有已知抗病基因组合;38份种质共产生11种反应型既不同于任何含有单个已知抗病基因品种的反应型也不同于2个或2个以上已知抗病基因组合的反应型,它们可能含有新的抗病基因或基因组合。【结论】华南地区大豆种质中蕴藏着丰富的抗大豆疫霉菌PGD1和多抗大豆疫霉菌抗源,这些抗病种质可作为热带、亚热带地区大豆抗病育种的重要亲本和抗病基因定位的重要研究材料。 相似文献
19.
The sensitivity of a susceptible and two resistant strains of cotton bollworm, Helicoverpa armigera, to phoxim, malathion and methomyl was determined by a topical application of bioassay method. YG strain, collected from field of Yanggu,Shandong Province of China, possessed 7-, 13- and 20-fold of resistance to the above three antiacetylcholinesterases based on the comparison of LD50 values with a laboratory susceptible strain. There were not significant difference of the specific activity and the Vmax value among the three strains. But the affinity of AChE to acetylthiocholine (ATCh), in YG strain was the lowest among the three strains tested. A eDNA encoding partial AChE gene was cloned from the three strains by RT-PCR and there was one nucleotide acid difference between YG strain and other two strains which resulted in no amino acid mutation. This partial AChE gene was used as a probe to perform Southern blot. The results indicated that there was no gene amplification in resistant cotton bollworm. Altered AChE with a decreased sensitivity to inhibitors appeared to be one of important resistance mechanisms in cotton bollworm against OP and carbamate compounds. 相似文献