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1.
为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-la株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清.此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的健康仔猪以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)进行基础免疫,然后用强毒株(HuN4-F5)进行多次接种,制备猪高免血清.间接免疫荧光检测(IFA)结果显示,两份多肽抗血清均能与PRRSV经典株和变异株发生特异性反应,IFA抗体效价无差异,表明两份血清没有显著差异.病毒中和试验结果表明,两份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性.间接ELISA和病毒中和试验结果表明,猪高免血清中针对B表位肽的ELISA抗体水平与血清抗PRRSV中和抗体之间没有正相关关系,而且B表位肽不能抑制中和抗体.以上结果表明HP-PRRSV B表位不能诱导产生中和抗体. 相似文献
2.
为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV) GP3株的单克隆抗体(MAb),本研究将HP-PRRSV HuN4株免疫BALB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的GP3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌MAb的细胞株,命名为4G5.抗体亚类鉴定重链类型为IgG1,轻链类型为K.该MAb细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1∶256和1∶1 280.IFA结果显示,MAb 4G5能够识别CH-1R、JXA1-R、HP-PRRSV HuN4株及其疫苗株HuN4-F112,而不识别RespPRRS MLV病毒株.Western blot结果显示,4G5与HP-PRRSV HuN4株及原核表达的GP3蛋白均可以反应,表明其针对的抗原表位为线性表位,中和试验结果显示该MAb无中和活性.通过截短表达GP3蛋白鉴定该MAb抗原表位识别序列为74WCRIGHDRCS83.本研究获得的MAb为进一步研究HP-PRRSV GP3蛋白的结构及功能奠定了基础. 相似文献
3.
经典和高致病性PRRSV疫苗株嵌合病毒的构建及其免疫原性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国预防兽医学报》2015,(4)
为研究经典和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)疫苗株间的生物学差异,本实验以经典PRRSV疫苗株CH-1R的全长感染性克隆p CH-1R为骨架,利用反向遗传操作技术分别将其ORF1a、ORF1b和ORF2-7替换为HP-PRRSV Hu N4-F112的相应片段,构建3个全长c DNA嵌合质粒。将构建的3个重组c DNA质粒经体外转录后转染BHK-21细胞,并于Marc-145细胞中传代,拯救出3种嵌合病毒,分别命名为r CH-1R-T1a、r CH-1R-T1b和r CH-1R-T27。病毒一步生长曲线结果表明,3种嵌合病毒在Marc-145细胞中的生长特性与亲本病毒CH-1R基本一致;动物实验结果显示,嵌合病毒实验组血清中PRRSV N蛋白抗体阳转率分别为3/3(r CH-1RT1a)、2/3(r CH-1R-T1b)和1/3(r CH-1R-T27),而CH-1R免疫组血清N蛋白抗体检测始终为阴性。以上结果表明,HP-PRRSV Hu N4-F112非结构蛋白在N蛋白抗体产生中起关键辅助或协同作用。 相似文献
4.
PRRSV新亚型毒株JL580的基因组变异特征研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)新分离株JL580遗传变异特征,研究扩增得到了该病毒的全基因组序列,并对GP5和NSP2序列进行了比对分析。结果表明:JL580株属于美洲株,且不同于中国现流行的其他毒株,与中国代表毒株CH-1a的核苷酸同源性是84.9%,与HP-PRRSV代表株JXA1、HuN4、TJ的核苷酸同源性分别是84.8%、84.9%、85%。对基因组的进一步分析表明,JL580株GP5蛋白与CH-1a、VR-2332、HuN4相比,R13→Q13,V27→A27,H38→N38,R151→K151;且NSP2存在3处缺失,与HP-PRRSV的30个氨基酸的缺失有明显的不同。JL580分离株的出现表明中国出现了新的PRRSV亚型,这对于PRRSV的防治和新疫苗的研制提供了科学依据。 相似文献
5.
为研究表达猪源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在动物体内的免疫调节特性及对其的保护效力评价,本研究将15头30日龄仔猪随机分成4组,空白对照组(DMEM)4头、疫苗对照组(HuN4-F112株)4头、疫苗组(rPRRSV-GM-CSF株)3头和攻毒对照组(DMEM+HuN4株)4头。疫苗对照组肌注免疫HuN4-F112株105 TCID50/头、疫苗组肌注免疫rPRRSV-GM-CSF株105 TCID50/头,实验空白组和攻毒对照组肌注DMEM 2 mL/头,免疫后28 d,疫苗组、疫苗对照组和攻毒对照组肌注HuN4株(105 TCID50/头)。攻毒后的试验结果表明,免疫rPRRSV-GM-CSF重组病毒组和疫苗株HuN4-F112组获得完全保护,阴性对照组全部死亡;通过IDEXX试剂盒检测仔猪血清中PRRSV抗体水平可知,在免疫14 d后,疫苗组抗体水平显著高于疫苗对照组(P<0.05);由... 相似文献
6.
为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗(HuN4-F112株)诱导的特异性IFN-γ+T细胞反应与其保护作用的相关性,本研究将25头45日龄PRRSV阴性健康仔猪随机均分为5组,第1～3组分别于0 d、7 d、14 d免疫HuN4-F112疫苗(1头份/头,106.0TCID50),第4组为攻毒对照组,第1～4组于21 d用PRRSV强毒株HuN4-F5攻毒(3 mL/头,104.0TCID50),第5组为空白对照组。疫苗免疫后1周～2周产生部分保护,3周产生完全保护,第1～4组保护率分别为5/5、2/5、2/5和0/5。中和抗体检测显示免疫组免疫后7 d和14 d所有猪只均未检测到中和抗体,免疫后第21 d第1组4头猪检测到低效价(≤1∶8)的中和抗体。疫苗免疫后血清中IFN-γ含量略有升高,但变化不大,整体都处于较低的水平。采用酶联免疫斑点技术(ELISpot)检测PRRSV特异性IFN-γ+T细胞反应。免疫组免疫后7 d、14 d、21 d百万外周血单个核细胞中IFN-γ+T细胞频数分别为0±0、0±2、5±8,组间和组内统计分析显示差异不显著。结果表明在HuN4-F112株疫苗早期保护中,IFN-γ参与的特异性细胞免疫反应较弱,在早期免疫阶段难以发挥主要作用。本研究为了解PRRSV疫苗免疫保护机制提供参考,同时,也提示需要采用更多的指标和方法来评价该疫苗诱导的免疫反应。 相似文献
7.
为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HuN4-F112株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、收毒时间和病毒液冻融次数等条件。结果证明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量8%、细胞接毒密度1.5×105个/mL、pH7.1条件下生长状态最好;PRRSV HuN4-F112株的最佳接种剂量为3.0×105 TCID50/mL,收毒时间为接种后70～72小时,在-18℃冻融3次,PRRSV HuN4-F112株增殖效果最好。该结果为HuN4-F112株PRRSV疫苗的生产提供了依据。 相似文献
8.
为筛选免疫效价高的疫苗,获得高免血清并进行临床治疗观察。本试验选用3种猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫健康新西兰大白兔,免疫后分别采血和分离血清,并用猪蓝耳病毒抗体PPA-ELISA检测试剂盒检测血清抗体效价,筛选出抗体效价较高的两种疫苗;免疫猪,制得高免血清对自然发病仔猪进行高免血清治疗试验。免疫兔试验表明,猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(CH-lR株)免疫后血清抗体效价最低,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)血清(简称高致病疫苗血清)抗体效价比猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(CH-la株)血清(简称灭活疫苗血清)低,用后两种疫苗免疫猪,血清抗体效价均能达到1∶1280。自然发病仔猪高免血清治疗试验显示,注射高致病疫苗血清对蓝耳病的治愈率为88%,灭活疫苗血清治愈率为76%。结果表明高免血清是无菌、安全的,所得两种血清可用于临床防治猪蓝耳病。 相似文献
9.
为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)不同致弱代次病毒对断奶仔猪胸腺的损伤,本研究选用HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞中传代致弱的F5、F15、F23、F30代及弱毒疫苗HuN4 F112代分别接种30日龄的PRRSV抗原及抗体阴性健康断奶仔猪。实验结果显示:HuN4 F30感染组胸腺的眼观病变、胸腺重量、病理组织学变化、病毒载量及胸腺细胞凋亡比例均与F23感染组有显著差别(p<0.05)。本实验结果表明,HuN4 F23代仍然能够引起仔猪胸腺萎缩并导致机体免疫抑制,而F30代已不能引起断奶仔猪胸腺萎缩现象。因此,HP-PRRSV HuN4 F23、F30代可以作为研究HP-PRRSV HuN4致胸腺萎缩的分子机制的关键代次。本研究为进一步研究HP-PRRSV感染诱导仔猪胸腺萎缩和胸腺细胞凋亡的分子机制奠定了基础。 相似文献
10.
不同毒力猪繁殖与呼吸综合征病毒对仔猪肺和外周免疫器官损伤的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究不同毒力的PRRSV对仔猪肺脏和外周免疫器官损伤的差异,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4株)和PRRSV经典株(CH-1a株)感染35日龄健康的断奶仔猪,并在感染后0 d、3 d、7 d、10 d和14 d各迫杀3头,检测肺、颌下淋巴结、肠系淋巴结、腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏的病毒载量及病理变化情况,同时检测血清中抗PRRSV的抗体水平。结果表明:感染后3 d肺脏及各免疫器官可检测到病毒,HuN4感染组病毒载量比CH-1a感染组病毒载量高1 000倍;HuN4感染组病毒载量峰值出现在感染后10 d,而CH-1a感染组维持着较低水平的病毒载量。组织病理学检测显示HuN4感染组淋巴结内淋巴细胞显著减少,呈空泡状;CH-1a感染组淋巴结内淋巴细胞轻度减少,呈星隙状。本实验表明HuN4株比CH-1a株对肺和外周免疫器官造成更严重的损伤。 相似文献
11.
猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗和变异株灭活疫苗的免疫效果评价 总被引：7，自引：1，他引：6
分别采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R致弱毒疫苗株和变异毒株灭活疫苗免疫接种40日龄～45日龄仔猪,免疫接种后4周,用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN-4变异株强毒攻毒,攻毒后21 d剖检,取主要器官作病理组织学观察和病毒抗原定位.结果显示变异毒株灭活疫苗免疫攻毒后导致的病理变化和病毒抗原分布程度均明显高于CH-1R弱毒疫苗免疫组.免疫病理学研究结果表明CH-1R 弱毒疫苗对HU-4株强毒免疫保护效果好于变异毒株灭活疫苗. 相似文献
12.
猪繁殖与呼吸综合征油乳剂灭活疫苗的免疫效果研究 总被引：1，自引：0，他引：1
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍,仔猪呼吸系统症状和高死亡率为特征的传染病.本研究用PRRSV SY株和美洲型代表株VR2332制备成油乳剂灭活疫苗,同时选用2种商品化PRRS油乳剂灭活疫苗(CH-1a株和SD1株),在曾发生过PRRS流行的某猪场进行4种疫苗的免疫试验.使用美国IDEXX公司的试剂盒检测血清中的PRRSV抗体效价,并用XCHeK软件系统处理数据.免疫试验结果显示,一免后第6组(CH1-a株)产生的抗体效价较其它组高;第3组和第4组(VR2332株)在二免后抗体效价较一免有小幅升高.对免疫试验的结果分析显示,接种灭活疫苗后抗体效价未达到预期的水平,其中具体的影响因素或工艺问题尚需要进一步探讨.此外,IDEXX公司的PRRSV试剂盒不能区分野毒抗体和疫苗毒抗体,这也可能是影响测定实际抗体效价的凶素之一. 相似文献
13.
《中国预防兽医学报》2021,(3)
类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)105.0TCID50/头,免疫后21 d,免疫组和攻毒对照组每头各肌注2 mL和滴鼻2 mL类NADC30 PRRSV SD53-1603株(104.0TCID50/mL)。攻毒后观察各组实验猪临床症状,可见攻毒对照组所有猪均发热,持续5 d~9 d,免疫组仅2头猪发热1 d~2 d。检测各组实验猪体重变化,结果显示,攻毒后免疫组和攻毒对照组体重增长均显著低于空白对照组(p0.001),但攻毒14 d以后,免疫组体重增长显著高于攻毒对照组(p0.05)。IDEXX ELISA测定各组猪血清中PRRSV的特异性抗体,结果显示免疫后14 d可以诱导免疫组仔猪产生良好的针对PRRSV的特异性抗体。利用荧光定量PCR测定血清和组织中的病毒载量,结果显示免疫组血清和组织中的病毒载量均极显著低于对照组(p0.0001)。对PRRSV免疫后及攻毒后各组仔猪各脏器病理学观察,结果可见攻毒对照组与免疫组相比出现明显的剖检和组织病理学变化。以上结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV可以提供一定的交叉保护,该研究为评价我国现有疫苗是否对类NADC30 PRRSV具有保护效果提供了参考依据。 相似文献
14.
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲型标准株（VR-2332）的ORF6及ORF7部分保守序列，设计合成1对特异引物，通过优化RT—PCR反应条件，建立了从血清中检测PRRSV RNA的RT—PCR诊断方法。60日龄仔猪经鼻腔接种1mL 10^5.6TCID50/／mL PRRSV强毒液，7d后肌肉注射中和效价为1：64的特异性高免血清，每隔1周利用RT—PCR检测猪体内PRRSVRNA，5周内PRRSV RNA检测均为阴性，表明高滴度特异性中和抗体完全终止了PRRSV感染猪体内的病毒复制。 相似文献
15.
为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株在其致弱过程中对仔猪外周免疫器官及肺脏损伤的变化,试验分别采用HuN4F5及其致弱代次F15、F23、F30及HuN4弱毒疫苗F112感染30日龄PRRSV抗原抗体阴性健康断奶仔猪,每天进行体温测定及临床症状观察,并在感染后0,3,5,7,10天检测病毒血症情况。病毒感染后10天剖杀试验猪,观察外周免疫器官及肺脏的病理变化并对肺脏和主要外周免疫器官病毒载量进行测定。结果表明:HuN4 F5、HuN4 F15组在临床症状、病毒血症、外周病毒载量及病理变化方面都明显比其他组严重,HuN4 F23组发病明显减轻,HuN4 F30组、HuN4 F112组无明显发病特征,与空白对照组无明显差异。说明HP-PRRSV HuN4株在致弱过程中,传代至30代时毒力发生显著减弱。 相似文献
16.
为了对高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HP-PRRS)免疫效果进行比较,选择辽宁地区某养殖场临床健康仔猪60头,随机分为Ⅰ组和Ⅱ组,两组仔猪均于30日龄首次免疫某厂家的HuN4-F112株活疫苗,Ⅰ组于60日龄进行加强免疫,两组均于180日龄进行最终免疫,每次免疫后30 d采集血样,进行PRRSV抗体水平检测,两组在首免后30日检测抗体,未见明显差异(P＞0.05);两组均于210日龄再次检测,两组抗体水平差异显著(P＜0.05).同时选择临床健康仔猪90头,随机分为3组(A组、B组和C组),三组仔猪均于30日龄分别免疫HuN4-F112株、TJM株及JXA-R株高致病性猪蓝耳病活疫苗,严格隔离饲养,免疫后30 d后采集血样,进行PPRSV抗体检测,结果表明三种毒株活疫苗对仔猪的免疫效果无明显差异(P＞0.05). 相似文献
17.
为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21d用PRRSV变异株HuN4强毒攻毒,ELISA方法检测血清中PRRSV特异的抗体水平及TNF-α、IFN-α、IL-1、IL-6和CRP细胞因子水平,荧光定量RT-PCR方法检测病毒血症的发生和持续情况,并取主要器官进行病理组织学观察。结果表明:HuN4活疫苗组免疫后14d便可检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d各细胞因子水平升高,攻毒后21d病毒血症完全消失,免疫后各器官没有明显病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化轻微;JXA1株灭活苗组免疫期间没有检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d～9d各细胞因子水平升高,攻毒后病毒血症持续存在,免疫后各器官有轻微病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化比HuN4活疫苗组严重,但比对照组明显减轻。本实验表明,HuN4活疫苗能够快速有效的激发机体的体液免疫反应,在抵抗PRRSV变异株HuN4强毒攻毒时,临床症状明显优于JXA1灭活苗。 相似文献
18.
19.
《中国预防兽医学报》2015,(5)
为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异特点,本研究在PRRSV流行病学调查中分离到一株PRRSV,该分离株在高致病性PRRSV(HP-PRRSV)NSP2区1 aa+29 aa缺失的基础上,突变为49 aa+29 aa的缺失株,将其命名为Henan-A14(NCBI序列号:KJ819936)。此外,该分离株在MARC-145细胞中的复制能力减弱,即其细胞嗜性有所改变。血清中和试验结果显示5份HP-PRRSV疫苗抗血清均不能中和该分离株,推测其抗原发生了较大变异。为鉴定该缺失是否影响病毒的复制,本研究以HP-PRRSV p Hu N4-F112株的感染性克隆为骨架,拯救出一株在NSP2区相应位置连续缺失48 aa的重组病毒,而该重组病毒在MARC-145细胞中的复制及血清中和试验结果表明,NSP2基因区48 aa缺失既不影响PRRSV的复制效率,也不影响病毒对HP-PRRSV制备的阳性血清中和效率。本研究的结果证明Henan-A14分离株在MARC-145细胞中复制能力的降低,以及病毒抗原中和表位与NSP2中相关的氨基酸缺失无直接关系。该分离株的鉴定为进一步研究HP-PRRSV的变异具有重要的参考价值。 相似文献
20.
某地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与中国高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(hp-PRRSV)同源性极高,为了筛选适合该地区病情的疫苗,指导养殖户生产,试验选择hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)和PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株)作为疫苗候选株,选取30日龄、健康状况良好、群体差异性小的断奶仔猪30头,随机分成A、B和C组,每组10头,A组注射hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株),B组注射PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株),C组注射相同剂量生理盐水作对照,免疫前和免疫后14、28、42、56、70、84 d采集血清,通过淋巴细胞计数、血清病毒核酸检测、血清抗体检测等分析猪体内hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)和PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株)免疫应答情况.试验结果显示,淋巴细胞数量方面,仔猪免疫后,淋巴细胞数量均上升,42 d时A、B组均达到最大值,A组为19.3×109/L,B组为16.7×109/L,C组则一直处于原始水平;抗体阳性方面,14 d时A组为80%,B组为60%,C组为0,42 d时A组为100%,B组为80%,C组为0;病毒核酸阳性率方面,14 d时A组为90%,B组为100%,C组为0,42 d时,A组为40%,B组为70%,C组为0,70 d时,A组为0,B组为20%,C组为0.由此可知,hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)能快速诱导猪发生免疫应答、产生免疫抗体,抗体持续时间长、效价高、稳定性良好,且疫苗毒在体内存在时间短、减毒时间快、安全性高,对所研究地区猪群免疫具有优越效果. 相似文献