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雌二醇多克隆抗体的制备与鉴定 总被引：4，自引：0，他引：4
制备雌二醇完全抗原,并通过免疫家兔得到多克隆抗体,为下一步制备雌二醇单克隆抗体和雌二醇检测ELISA试剂盒奠定基础。试验以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用碳化二亚胺法,合成了雌二醇(E2)的2种免疫偶合物:免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA;通过紫外光谱定性证明偶合物偶联成功与否,并对偶合物的蛋白含量、结合比进行测定并以免疫原E2-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,用包被原E2-OVA进行ELISA,对多克隆抗体特异性及效价进行检测。结果表明成功合成了雌二醇人工抗原即免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA,二者的蛋白浓度分别为5.455和7.533mg/mL,结合比分别为7:1和8:1;制备的多克隆抗体特异性好,血清效价为1:106。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2015,(19)
多环芳烃是一类含有两个以上苯环的碳氢化合物,广泛存在于大气、水体、土壤、食品中,苊是多环芳烃的一种。为了制备免疫效果好的完全抗原从而为免疫学检测方法建立基础,分别以3-苊丁酸和5-苊甲酸与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)进行偶联,采用活泼酯法成功制备了3-苊丁酸-BSA、5-苊甲酸-BSA两种间隔臂长的免疫用人工抗原及3-苊丁酸-OVA检测用人工抗原,并通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外扫描法对人工抗原进行了鉴定。分别用两种免疫抗原足垫免疫Balb/c小鼠,通过测定免疫小鼠血清抗体的效价和特异性,分析不同间隔臂长免疫抗原的免疫效果。结果表明:4碳臂(3-苊丁酸-BSA)较1碳臂(5-苊甲酸-BSA)产生了更高苊的特异性抗体。 相似文献
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本研究合成并鉴定了黄曲霉毒素M1人工抗原,通过动物免疫制备出敏感性高、特异性好的鼠源黄曲霉毒素M1多克隆抗血清。采用琥珀酸酐改造黄曲霉毒素M1,并将其改造物按两种方法(DCC和EDC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成免疫抗原AFM1-BSA和检测抗原AFM1-OVA,经过薄层色谱、紫外扫描和凝胶电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。经过测定,免疫的3只小鼠效价均达到了1:104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50%inhibitive concentration,IC50)为37.61ng/m L,且具有良好的特异性。本研究成功合成了黄曲霉毒素M1人工抗原和多克隆抗体血清,为黄曲霉毒素M1单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
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《中国奶牛》2015,(Z1)
本研究合成并鉴定了黄曲霉毒素M1人工抗原,通过动物免疫制备出敏感性高、特异性好的鼠源黄曲霉毒素M1多克隆抗血清。采用琥珀酸酐改造黄曲霉毒素M1,并将其改造物按两种方法(DCC和EDC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成免疫抗原AFM1-BSA和检测抗原AFM1-OVA,经过薄层色谱、紫外扫描和凝胶电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。经过测定,免疫的3只小鼠效价均达到了1:104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50%inhibitive concentration,IC50)为37.61ng/m L,且具有良好的特异性。本研究成功合成了黄曲霉毒素M1人工抗原和多克隆抗体血清,为黄曲霉毒素M1单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
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磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成研究 总被引：1，自引：1，他引：0
试验旨在研究磺胺二甲嘧啶（SM2）免疫抗原的合成。用重氮化方法将SM2分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,合成了免疫抗原SM2-BSA和包被抗原SM2-OVA。紫外扫描和聚丙烯胺凝胶电泳结果表明, SM2-BSA的紫外吸收光谱与BSA、SM2相比均发生了改变,证明偶联成功,并测得SM2-BSA的结合比为13∶1;用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体。结果表明,半抗原SM2和载体蛋白偶联成功,并可获得高价、敏感的多克隆抗体。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2015,(19)
国内外研究表明通过对奶牛血液及乳汁中孕酮水平的检测能有效的用于奶牛发情鉴定、妊娠诊断及繁殖障碍性疾病的监测。本研究旨在制备鼠抗孕酮单克隆抗体,为奶牛孕酮免疫学检测技术提供研究基础。实验采用碳化二亚胺方法合成孕酮完全抗原,经SDS-PAGE电泳及紫外分光光度计扫描鉴定,结果表明孕酮免疫抗原(P4-BSA)及检测抗原(P4-OVA)合成制备成功。乳化后的P4-BSA经皮下免疫小鼠,三免后血清效价可达到1∶64000。采用聚乙二醇化学融合方法进行细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,最终获得一株能稳定分泌Ig G1型抗孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株,诱生的腹水经辛酸硫酸纯化制备,抗体的特异性较好。 相似文献
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建立多西环素人工抗原(Doxycycline,DOX)的合成及鉴定方法。采用戊二醛偶联法将DOX分别与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原(DOX-BSA)和包被抗原(DOX-OVA)。经SDS-PAGE电泳法、紫外可见吸收光谱鉴定,证实人工抗原成功合成,偶联比分别为8.6∶1和3.8∶1。结果表明建立了一种新的DOX抗原合成方法,为进一步制备特异性DOX抗体和建立检测食品中DOX的酶联免疫方法奠定了基础。 相似文献
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采用改进的重氮法合成三聚氰胺免疫抗原(三聚氰胺-BSA)和三聚氰胺包被抗原(三聚氰胺-OVA),以三聚氰胺-BSA免疫BALB/c小鼠,选取间接ELISA测定效价达8000以上的BALB/C小鼠进行融合,用HAT和HA选择性培养基筛选后,得到一株稳定分泌抗三聚氰胺抗体的杂交瘤细胞株命名为3G4,经多次传代培养和反复冻存复苏后能够稳定分泌抗体,在BALB/C小鼠体内诱生腹水,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水。用间接ELISA方法测定杂交瘤培养上清效价为1:1600,腹水效价为1:2.048×10~6,抗体亚类为IgG2b。 相似文献
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为了合成氯霉素(CAP)人工抗原并制备抗体,试验建立CAP残留的酶联免疫吸附试验(ELISA)法,采用重氮化法将半抗原CAP与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,制得免疫抗原,然后与卵清白蛋白(OVA)进行偶联,制得包被抗原,通过紫外光谱扫描鉴定是否偶联成功;用免疫抗原免疫KM小鼠,制备CAP多克隆抗体,并通过间接ELISA法测定抗体效价。结果表明:通过紫外光谱扫描,CAP-BSA在275 nm处为最大吸收峰,CAP-OVA在276 nm处为最大吸收峰;并且免疫KM小鼠得到的抗体效价高达1∶128 000。说明试验成功制备了CAP人工抗原,并且获得了高效价的多克隆抗体,也进一步证明了药物偶联成功。 相似文献
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为检测抗黄曲霉素抗体建立了一种新颖而简便的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),该法是用黄曲霉素M_1-牛血清白蛋白(AFM_1)-BSA)结合物免疫雌性BALB/CJ小鼠制备抗黄曲霉素M_1抗体。试验用易得的-AFM_1-BSA和黄曲霉素B_1牛血清白蛋白(AFB_2-BSA)来包被试验板,适于检测普通环戊并甲氧基碳-肟法结合的任何黄曲霉素。本法对开发及改进测定黄曲霉素代谢产物抗体的免疫测定方法很有价值。 相似文献
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传染性法氏囊病毒VP2蛋白抗原表位多肽P22的免疫原性及生物学功能鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为鉴定lBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BALB/c小鼠3只,经3次免疫后得到多抗血清3份.应用ELISA检测了抗P22抗体的特异性,并通过抗P22多肽抗体作为特异性抗体检测了P22多肽结合CEF细胞的特性.结果经鉴定3份多抗血清均与P22多肽特异性反应,效价均达到1:105,且能特异性检测P22多肽与CEF细胞的特异性结合.本试验成功制备了P22免疫原,获得了效价高、特异性较好的鼠源抗P22多抗血清,并证明P22多肽与CEF细胞能够特异性结合,为进一步研究多肽疫苗的设计或试纸条的研制及表位单抗的制备提供了新的思路和基础. 相似文献
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采用碳二亚胺(EDC)法合成游离3,3',5,5'-四碘甲状腺原氨酸(FT4)的完全抗原FT4-BSA和FT4-OVA,将FT4-BSA作为免疫原,免疫BALB/c雌鼠,以FT4-OVA为包被原,利用ELISA方法确定抗FT4多克隆抗体的效价和敏感性。通过杂交瘤技术筛选出分泌抗T4单克隆抗体(T4 McAb)的杂交瘤细胞株,制备腹水单抗。经检测,腹水单抗效价是1∶9.0×104,以此建立的间接竞争ELISA方法,半数抑制质量浓度(IC50)是24.7 ng/mL;FT4单抗与游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)的交叉反应率是4.2%,与促甲状腺激素(TSH)无交叉反应;经抗体类型鉴定,获得的单抗重链属于IgG1亚类,轻链属于κ型。结果表明:本试验制备的单抗特异性强、敏感性高,能够为T4免疫学检测方法的建立和相关研究奠定良好基础。 相似文献
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合成、鉴定了马波沙星(MBF)人工抗原,为马波沙星单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。以牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清蛋白(OVA)为载体蛋白,采用碳二亚胺法分别合成马波沙星免疫抗原(MBF-BSA)和包被抗原(MBF-OVA),并使用紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA方法鉴定人工抗原合成效果。初步鉴定结果显示,MBF-BSA与MBF-OVA均偶联成功;用免疫抗原MBF-BSA免疫小鼠,经ELISA方法检测,五免后血清中抗体效价可达1∶5.12×105,半数抑制率为90.20 ng/m L。研究表明,马波沙星人工抗原合成成功,其免疫抗原具有良好的免疫原性,免疫小鼠可获得高效价、高特异性多克隆抗体。 相似文献
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目的合成氨基脲人工抗原并制备其多克隆抗体。方法以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),并采用碳化二亚胺法和混合酸酐法将其分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成氨基脲人工抗原。以氨基脲人工抗原(CPSEM-BSA)为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA法测定其抗体效价。结果经薄层层析、红外光谱和元素分析等方法鉴定合成半抗原即为CP-SEM。紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明人工抗原合成成功。免疫获得抗氨基脲的多克隆抗体,其抗体效价为1:64000。结论氨基脲人工抗原合成成功,并获得抗氨基脲的多克隆抗体。 相似文献
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通过N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星和沙拉沙星分别与牛血清白蛋白偶联制备免疫抗原,与卵清白蛋白偶联制备检测抗原,筛选一种可用于多种氟喹诺酮残留的检测抗体。将免疫抗原分别免疫獭兔制备多克隆抗体,采用间接竞争ELISA法测定抗体特异性。诺氟沙星抗体特异性较强,与同类药物的交叉反应较少,沙拉沙星抗体与同类药物发生交叉反应最多,且与诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星的交叉反应率较高。结果表明,确定沙拉沙星抗体作为进一步研究的抗体。 相似文献
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《畜牧与兽医》2021,(7)
为进一步制备洛克沙胂新型人工抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将4-羟基苯胂酸衍生物与牛血清白蛋白偶联作为免疫原免疫新西兰白兔,利用紫外扫描法、质谱法对偶联产物进行鉴定并计算偶联比,间接竞争酶联免疫吸附法检测其免疫活性。结果显示,成功合成了具有较高的免疫活性洛克沙胂的人工抗原,4-羟基苯胂酸衍生物与牛血清白蛋白、卵清蛋白的偶联比分别为4.2∶1和12.6∶1,包被抗原和抗体的最适工作浓度分别为1.6×10~4、8.0×10~3,以此建立了洛克沙胂的间接竞争ELISA检测方法,该方法的半数抑制浓度(IC_(50))为(41.81±0.68)ng/mL,在鸡蛋中的空白添加回收率范围为72.5%～91.4%%,变异系数(RSD)10.07%。交叉反应试验表明,除3-氨基-4羟基苯胂酸(16.15%)外,与2-氨基苯胂酸(9.59%)、4-羟基苯胂酸(0.43%)、阿散酸(1.63%)和苯胂酸(0.95%)只存在微弱的交叉反应。本研究为洛克沙胂ELISA快速检测试剂盒的研制奠定了基础。 相似文献