基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器     

车宏莉  张云  汪世平  吴朝阳  沈国励 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2008,35(5):59-62

提出了一种基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器.采用混合自组装单层膜技术在石英晶振金电极表面制备巯基丙酸(MPA)和巯基乙醇(ME)混合功能基底膜,通过偶联剂盐酸1 - 乙基 - 3 - (3 - 二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)及N - 羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化混合膜上富含的羧基基团用于日本血吸虫抗原(SjAg)的高效共价固定.通过夹心式免疫反应,将辣根过氧化酶(HRP)标记的羊抗兔二抗固定到晶体表面,利用HRP催化H2O2 氧化底物4 - 氯 - 1 - 萘酚在晶振表面形成不溶性沉积物,使免疫检测信号得以显著放大.在优化的实验条件下,该传感器可灵敏检测感染兔血清样中日本血吸虫抗体(SjAb)浓度(稀释比)的线性范围是1∶10 000～1∶100,可望用于日本血吸虫病的早期临床诊断.  相似文献   

大白菜病毒害的防治     

李殊然  孙艳华  刘成双 《农民致富之友》2011,(6X):57-57

<正>1病原大白菜病毒病主要毒源为芜菁花叶病毒,其次为黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒。芜菁花叶病毒在55-60℃温度下经10min即可失毒,稀释限点1000倍,体外保毒  相似文献   

莴苣花叶病毒胶体金免疫层析试纸条的研制     

魏梅生  尤佳  马洁  李桂芬 《黑龙江农业科学》2014,(11):74-77

为建立莴苣花叶病毒的现场快速检测方法,采用胶体金标记莴苣花叶病毒的兔多克隆抗体,在硝酸纤维素膜上喷涂检测T线和质控C线,制作胶体金免疫层析试纸条。该试纸条检测莴苣花叶病毒提纯病毒的灵敏度为1μg·mL-1,检测昆诺阿藜病汁液可稀释1 000倍(重量/体积)。试纸条可特异性检测到莴苣花叶病毒的3个分离物,与马铃薯X等8种病毒无交叉反应。田间采集的莴苣样品试纸条和酶联检测的结果一致。该试纸条适用于疑似莴苣花叶病毒感染的莴苣叶片的快速诊断,并在10min内获得检测结果。  相似文献   

免疫斑点法和免疫捕获RT-PCR检测黄瓜绿斑驳花叶病毒   总被引：3，自引：0，他引：3       下载免费PDF全文

尚海丽  周雪平  吴建祥 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2010,36(5):485-490

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科作物上重要的病毒之一.用提纯的黄瓜绿斑驳花叶病毒免疫新西兰大白兔制备CGMMV的多克隆抗体.该多克隆抗体的间接ELISA效价达1∶512 000,与CGMMV17.5 ku外壳蛋白有特异性反应,而与烟草花叶病毒、齿兰环斑病毒和健康植物没有任何反应.用ACP-ELISA分析多抗灵敏度表明多抗检测1∶40 960倍稀释的CGMMV病叶时仍呈阳性反应.用该多抗建立了检测CGMMV的免疫斑点法(dot-ELISA)和免疫捕获RT-PCR方法(IC-RT-PCR).病叶汁液可被dot-ELISA检出的最大稀释度为1∶10 240.IC-RT-PCR从感染CGMMV的病叶组织中扩增到与预期大小相同的480 bp DNA条带,且当CGMMV病叶稀释1∶163 840倍时检测仍呈阳性.检测CGMMV的dot-ELISA和IC-RT-PCR方法的建立为该病毒病的诊断和控制提供了技术支撑.  相似文献   

鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法的建立     

杨舒心  朱明娴  孙长江  谢芳  雷连成 《吉林农业大学学报》2010,32(4):440-442

通过制备兔抗鹿血和小鼠抗鹿血多克隆抗体,建立了以兔抗为包被抗体,鼠抗为检测抗体的鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法。采用方阵滴定法确定了抗原、抗体的最佳反应浓度,并对ELISA各反应条件进行优化。结果表明:兔抗最佳包被浓度为1∶8 000,鼠抗的最佳反应浓度为1∶2 000,最佳封闭时间为60 min。该方法对鹿血检测灵敏,可达3×10-4倍稀释度,且对马血、牛血、羊血、猪血的检测结果均为阴性,说明该方法特异性良好。  相似文献   

侵染烟草的黄瓜花叶病毒研究     

李皖湘 《安徽农业大学学报》1982,(1)

从我省主要烟区烟草花叶病标样中所分离的毒源,在鉴别寄主苋色藜上形成局部枯斑,在心叶烟上则为系统侵染。病毒致死温度65～70℃,体外保毒期2～3天,稀释终点为1:1000～2000。电镜观察病毒粒体为球形和血清学试验不与烟草花叶病毒和芜菁花叶病毒起反应。根据这些特性,初步认为属典型的黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic Virus)。本文用反向间接血凝反应、皂土凝聚反应、琼脂双扩散反应、试管沉淀反应和玻片凝聚反应对黄瓜花叶病毒进行了检测比较试验,其中以反向间接血凝法灵敏度最高,病株抽提液稀释至三万倍仍可检出,敏感度比琼脂双扩散试验高256倍,其诊断效率亦较好,均比其它测定法优越。  相似文献   

芜菁花叶病毒的分离鉴定及其多克隆抗体的制备与应用     

潘熙萍  林芳  郑思文  韩洁梅  方丹  施曼玲 《江苏农业科学》2013,41(1):26-28

从呈花叶症状的芥菜病株上分离到毒源,经CP基因克隆、序列分析以及电镜观察鉴定为芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,TuMV).利用提纯的病毒免疫新西兰大白兔,获得TuMV多克隆抗体,其效价为1:40000,多抗仅对TuMV起特异性反应.以1:10000稀释度为TuMV多抗最适工作浓度,建立TuMV间接酶联免疫吸附测定法(ID-ELISA),该方法检测到提纯病毒的绝对量约1.765ng.说明本试验所建立的TuMV ID-ELISA检测方法可有效运用于TuMV的检测.  相似文献   

烟草芜菁花叶病毒的ELISA和RT-PCR快速检测技术研究     

周利飞  刘映红  孙现超  申艳芝 《西南农业学报》2007,20(4):758-761

采用间接ELISA和RT-PCR，建立了烟草芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus，TuMV）快速检测的技术体系。间接ELISA测定结果表明，TuMV多抗按1：3000浓度稀释后，具有较高的检测灵敏度，其检测极限浓度为1：3215；通过改进RNA提取技术，从少量的烟草病叶中提取出高质量总RNA，进行cDNA合成及PCR扩增，得到一条长度约986bp的特异PCR扩增产物，与理论设计的大小一致，可有效地对田间烟株进行快速检测。  相似文献   

太子参中芜菁花叶病毒的RT-PCR检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

黄颖桢  陈菁瑛  朱景花  刘保财  赵云青 《福建农业学报》2016,(6):616-619

建立并应用太子参中芜菁花叶病毒的检测技术。采用RT-PCR技术,设计特定引物从太子参病株中的不同部位扩增特定片段,且进行序列分析和比对。序列比对结果表明,扩增得到的片段为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因序列片段,本研究建立了一种简便可靠太子参中芜菁花叶病毒的检测方法,并且从太子参根、茎、叶和花中均检测到病毒目标序列。  相似文献   

小西葫芦花叶病毒(ZYMV)抗血清制备及检测技术研究     

程珉  张大伟  范卫红  王杰 《安徽农业科学》2005,33(5):805-806

从小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)免疫的母鸡蛋卵黄和兔抗血清中分别提取免疫球蛋白IgY和IgG,用多种血清学方法进行检测。结果表明,免疫鸡和兔25d后,鸡蛋卵黄IgY和兔抗血清的效价分别达到1/64和1/512。在琼脂扩散试验中,当抗体稀释28倍时,与抗原反应无明显沉淀线。在胶乳凝集试验中,抗体稀释210倍时,与抗原反应无明显凝集物。ELISA法以辣根过氧化酶标记抗体IgY和IgG,用双抗夹心法成功地检测出了ZYMV,当抗体稀释106倍时,与抗原反应仍呈阳性。免疫电镜方法检测ZYMV,较一般血清学方法可多捕捉50倍的病毒颗粒。  相似文献   

Effects of ozone-treated domestic sludge on hydroponic lettuce growth and nutrition     

Peng YANG  Yan-zhi GUO  Ling QIU 《农业科学学报》2018,17(3):593-602

Here, the ozone-treated domestic sludge was diluted up to four different multiples and utilized as a nutritional source for hydroponic lettuce growth. Additionally, lettuce was cultured using the modified Hoagland nutrient solution as a control. The effects of ozone-treated domestic sludge on lettuce growth and nutrition were studied. Results showed that the lettuce treated with modified Hoagland inorganic nutrient solution had increased leaf number, plant height, fresh weight and dry weight compared to those treated with the ozone-treated domestic sludge dilution (P<0.05). However, the lettuce cultivated with the 2-fold ozone-treated sludge dilution showed significantly higher (P<0.05) contents of chlorophyll, soluble sugar and ascorbic acid (Vc) compared to that treated with modified Hoagland nutrient solution. And the nitrate concentration in the lettuce cultured with the 2-fold ozone-treated sludge dilution was 53.93% less than that cultured with the modified Hoagland nutrient solution, which was a significant improvement (P<0.05). This study suggested that the 2-fold ozone-treated sludge dilution is optimal for lettuce hydroponic nutrient requirements.  相似文献   

猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立     

王晨燕  王隆柏  吴学敏  陈如敬  车勇良  周伦江 《福建农业学报》2017,32(8):823-827

采用特异性好的鼠源抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体为捕获抗体,兔源多克隆抗体为检测抗体,建立PEDV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳反应条件为:抗PEDV单克隆抗体E1包被质量浓度4.40μg·mL~(-1),37℃包被2h,采用5%BSA封闭液封闭1h,兔抗PEDV抗体工作质量浓度为5.91μg·mL~(-1),酶标二抗稀释度为1∶2000,以OD450nm≥0.381作为阳性判定标准。该ELISA方法对猪轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应。敏感度可达30μg·mL~(-1)(5×103.12);重复性变异系数小于10%。采用该方法和RT-PCR方法同时检测临床样品42份,阳性样品符合率为92.30%,表明建立的PEDV双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性好、敏感性高和方便快捷等优点,可用于PEDV快速检测。  相似文献   

牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

王芳  冯宇  张阁  蒋卉  朱良全  丁家波 《中国农业科学》2016,49(9):1818-1825

【目的】建立高通量牛布鲁氏菌间接ELISA诊断方法,为科学高效诊断牛布鲁氏菌病提供技术手段。【方法】以提纯的猪布鲁氏菌S2株脂多糖(LPS)作为包被抗原,采用棋盘滴定法确定了抗原包被浓度、包被液、抗原包被时间、封闭液、样品稀释液、血清稀释倍数、兔抗牛酶标抗体稀释液、兔抗牛酶标抗体稀释浓度、最佳TMB底物反应时间等参数,初步建立了牛布鲁氏菌间接ELSIA方法。并用上述条件初步建立的方法对176份牛布鲁氏菌病阳性血清和132份牛布鲁氏菌病阴性血清进行检测。检测结果经SPSS17.0软件分析,构建受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积,确定敏感性和特异性;通过Youden指数确定阴阳性判定的临界点。使用质控阴、阳性血清评价试剂盒的批内和批间重复性。用本研究建立的ELISA试剂盒及商品化试剂盒同时对临床上1 200份牛血清样本进行比对检测,比较其符合率。【结果】通过棋盘法确定的试剂盒中各组分的最佳条件为:抗原包被浓度为10μg·m L-1,最适包被液为碳酸盐缓冲液,最佳包被时间为2—8℃、16 h,最适血清稀释度为1﹕50,最佳封闭液为含有3%明胶的PBST,最佳样品稀释液为含有0.5%蔗糖的PBST,最佳兔抗牛酶标抗体稀释液为含有5%马血清的PBST,最佳兔抗牛酶标抗体工作浓度为1﹕20 000,最佳TMB底物反应时间为15 min。按上述条件建立的间接ELISA方法检测176份牛布鲁氏菌病阳性血清和132份牛布鲁氏菌阴性血清,并统计结果后使用SPSS17.0软件分析该方法受试者工作特征曲线(ROC)线下面积为0.98。最佳判定临界点为样本OD值/阳性OD值(S/P)×100%=20%。在此临界值上时,敏感性为97.7%,特异性为95.5%。对1 200份临床样本的比对检测显示,本研究建立的间接ELISA方法与进口商品化试剂盒的总符合率为96.25%。【结论】建立了特异性和敏感性良好的牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测方法。  相似文献   

Germination and appressorium formation of Pyricularia oryzae Cavara can be inhibited by reduced concentration of Blasin®Flowable with carbon dioxide microbubbles     

Tamaki Masahiko  Kobayashi Fumiyuki  Suehiro Keisuke  Ohsato Shuichi  Sato Michio 《农业科学学报》2018,17(9):2024-2030

We investigated the possibility to reduce the usage of Blasin^®Flowable (BF), a disinfectant inhibiting the germination and appressorium formation of Pyricularia oryzae Cavara conidia, by using carbon dioxide microbubbles (CO₂MB). Germination was significantly inhibited by 10 000-fold diluted BF solution containing CO₂MB generated by the decompression-type generator compared to CO₂ millibubbles (CO₂MMB) and CO₂MB generated by the gas-water circulating-type generator. Appressorium formation in the 10 000-fold diluted BF solution containing both CO₂MBs was less than that in CO₂MMB. Scanning electron microscopy showed wrinkles and dents on the surface of conidia treated with 5 000-fold diluted BF solution containing both CO₂MBs. Via transmission electron microscopy, we observed the expansion of the vacuole and the intracellular space and bloated or absent lipid granules in the conidia treated with BF solution containing both CO₂MBs. Our results show that inhibition of the conidium germination and appressorium formation of P. oryzae Cavara by 10 000-fold diluted BF solution could be achieved by using the decompression-type CO₂MB.  相似文献   

刚地弓形虫RH株SAG3蛋白抗体检测的ELISA方法建立     

马亮  任保彦  左绍志  宫鹏涛  李建华  张国才  杨举  张西臣 《安徽农业科学》2012,40(15):8527-8528,8550

[目的]利用纯化的刚地弓形虫RH株表面蛋白SAG3的原核重组蛋白为基础,建立抗体间接ELISA检测方法。[方法]采用棋盘滴定法,确定间接ELISA的最佳条件。采用鼠抗新孢子虫阳性血清、鼠抗安氏隐孢子虫阳性血清、鼠抗柔嫩艾美尔球虫阳性血清、鼠抗蓝氏贾第虫阳性血清以及鼠抗微小隐孢子虫阳性血清和健康小鼠阴性血清作对照,检测血清之间是否有交叉反应。[结果]最佳包被条件为:抗原包被浓度0.25μg/孔,被检血清稀释度1∶400,酶标二抗稀释度1∶3 000,封闭剂5%脱脂奶粉的PBST溶液;血清之间没有交叉反应。该方法的灵敏度为1∶1 600。[结论]该方法灵敏度高,特异性较强,可重复性较好,可用于对弓形虫感染的检测及流行病学调查。  相似文献   

镀液组成对木材化学镀镍金属沉积速率的影响   总被引：4，自引：0，他引：4  

黄金田 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》2005,26(1):57-60

为了确定镀液组成对木材化学镀镍金属沉积速率的影响,本文用点滴法加入镀液的方法进行了木材化学镀镍实验,分析了木材化学镀镀镍镀液的主盐浓度、还原剂浓度、络合剂浓度等对金属镍沉积速率的影响,从而得出木材化学镀镍比较理想的镀液组成。这对于利用化学镀镍这一金属加工技术对木材进行化学镀,对进一步研究木材与金属的复合以及开发功能性木质复合材料具有重要的实际意义。  相似文献   

检测牛奶中结合珠蛋白的电流型免疫传感器的研制     

丁守强  刘彬  谭勋  潘韬 《南京农业大学学报》2011,34(5)

为构建可定量检测牛奶中结合珠蛋白(Hp)含量的电流型免疫传感器,以三电极系统中的金电极为工作电极,采用层层自组装技术将L-半胱氨酸、纳米金颗粒和抗牛Hp抗体依次组装在工作电极上,制成免疫传感器。制成的免疫传感器对Hp的线性检测范围为15～100 mg.L-1,最低检测限为0.63 mg.L-1,并具有较好的重现性和稳定性。分别采用该传感器和ELISA检测试剂盒对隐性乳房炎患牛乳样中的Hp含量进行检测的结果表明,两种检测结果间无显著差异(P>0.05)。结论:制备的免疫传感器可定量检测牛奶中的结合珠蛋白(Hp)。  相似文献   

大蒜提取液对烟草黑胫病和青枯病的防治效果初探   总被引：6，自引：0，他引：6  

商胜华  陆宁  陈庆园  王晓莉 《贵州农业科学》2009,37(10)

研究了大蒜提取液对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var nicotianae)和青枯病菌(Ralstonia solanacearum)的抑制作用,并进一步测定了大蒜提取液防治烟草黑胫病的效果.结果表明,浓度大于1.5%的大蒜提取液对于烟草青枯病菌的抑菌半径与5000倍72%农用链霉素相当,浓度大于1.5%的大蒜提取液对烟草黑胫病菌的抑菌效果显著;而盆栽试验表明,只有稀释倍数小于10倍的大蒜提取液才对烟草黑胫病具有防治效果,而稀释倍数大于10倍的大蒜提取液对烟草黑胫病基本没有防治效果.  相似文献   

检测禽β-防御素6夹心ELISA法的建立及应用     

梁瑞  梁盈  祁克宗  王爱荣  彭开松 《中国农业科技导报》2014,16(4):176-180

为定量检测禽β-防御素6(avian beta-defensin6,AvBD6),建立了AvBD6的双抗体夹心ELISA法,并应用于鸡血清中AvBD6浓度的检测。研究结果显示,包被抗体(鼠抗AvBD6 B细胞线性表位的多克隆抗体)、检测抗体(兔抗AvBD6氮端的多克隆抗体)和辣根过氧化酶(HRP)标记羊抗兔IgG的最佳工作稀释倍数分别为2 500、2 000和10 000,AvBD6在20~320 ng/mL的线性范围内,标准曲线回归方程为:y=12 024x-2 583,(R2=0.984 2)。对不同状态下鸡血清AvBD6浓度检测结果显示:ACTH(25 IU/kgBW)注射1 d后,对照组AvBD6浓度高于ACTH组;连续注射ACTH 5 d,对照组AvBD6浓度低于ACTH组,但二者间差异均不显著(P0.05)。大肠杆菌感染后24 h和沙门氏菌感染后3 h、24 h,感染组AvBD6浓度均显著地高于对照组(P0.05),表明AvBD6参与对大肠杆菌和沙门氏菌系统感染的抵抗。  相似文献   

左氧氟沙星人工抗原间接ELISA检测方法的建立     

张冠世  张凤凤  胡亚南  肖佳佳  裴凯祥  李林育  黄瑞蕊  李引乾 《西北农业学报》2012,21(3):51-54

为检测所制备的左氧氟沙星人工抗原品质,采用西北农林科技大学兽医药理实验室制备的左氧氟沙星人工抗原免疫BALB/c小鼠,制得鼠抗左氧氟沙星人工抗原的多克隆抗体.以采集的抗血清为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG为二抗、四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立左氧氟沙星人工抗原间接酶联免疫检测法( ELISA).试验结果表明,间接ELISA最佳反应条件为包被抗原质量浓度1 mg/L、4℃过夜、抗原抗体于37℃作用1h、酶标二抗稀释度为1∶2 000.该方法的灵敏度高,且具有良好的准确性和重复性,可以评价左氧氟沙星人工抗原的品质.  相似文献