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1.
葡萄柚基因组DNA提取方法的比较及ISSR-PCR体系的优化 总被引：1，自引：1，他引：0
对4种基因组DNA提取方法进行比较,得到一种效率较高的、且适用于葡萄柚ISSR-PCR的DNA提取方法。同时,采用正交设计对影响葡萄柚ISSR-PCR的因子进行优化。实验结果表明,改良的SDS法提取的基因组DNA最适宜进行葡萄柚的ISSR-PCR扩增。ISSR-PCR产物在2%琼脂糖凝胶上检测,发现PCR扩增的平均条带数为2.7条。葡萄柚的最优ISSR-PCR反应体系为：20 μL总体积中含有2×buffer(Mg2+),0.2 mmol/L dNTPs,0.2 μmol/L引物,0.3 U Taq DNA聚合酶,5 ng DNA模板。 相似文献
2.
为建立适合苹果的MSAP(Methylation Sensitive Amplification Polymorphism)反应体系,以‘嘎啦’为材料对MSAP技术中的关键因素进行优化筛选,并用于苹果叶片和愈伤组织的甲基化模式分析。经过不同因素水平摸索,结果表明：600 ng基因组DNA用EcoRⅠ,HapⅡ或MspⅠ各10 U,37℃保温12 h,即可酶切完全。最佳预扩增体系为：酶连产物1 μL、上下游引物各3 μL、2×PCR mastermix 10 μL（Taq酶1 U、dNTPs 5 mM、Mg2+ 30 mM）和ddH2O 3 μL。20 μL选择性扩增体系中,含有60倍稀释的模板DNA 2 μL、上下游引物各3 μL、2×PCR mastermix 10 μL（Taq酶1 U、dNTPs 5 mM、Mg2+ 30 mM）和ddH2O 2 μL。在该体系下选用2对引物对苹果叶片和愈伤组织进行甲基化模式分析,获得了清晰、重复性好的银染指纹图谱。平均每对引物可获得特异性条带12条,共获得特异性条带91条,表明该体系可用于苹果不同发育阶段DNA甲基化模式分析。 相似文献
3.
用液相色谱-串联质谱的方法建立鸡组织中地克珠利残留的检测方法,并考察地克珠利在鸡组织
中的消除规律。用乙腈和乙酸乙酯的混合溶液提取,60℃氮气吹干,乙腈溶解,过0.22 μm微孔滤膜后,
采用液相色谱-串联质谱分析。地克珠利在鸡肝中8~4000 μg/kg 范围内具有较好的线性关系（r2>0.99）,
而在鸡肌肉中8~1200 μg/kg 范围内具有较好的线性关系（r2>0.99）,检测限和定量限分别为0.5 μg/kg 和
0.8 μg/kg。鸡肝脏和肌肉中地克珠利的液相色谱串联质谱测定方法简单、灵敏度高,适用于鸡组织中地
克珠利残留量的检测。 相似文献
4.
基于流式细胞术的澳洲坚果基因组C值测定 总被引：4，自引：1，他引：3
为建立澳洲坚果基因组C值的流式细胞术测定方法,采用改良的OTTO细胞核提取液配方和PI荧光染料,以‘O.C’嫩叶为材料,以基因组DNA含量已知的Pisum sativum L. Ctirad和Zea mays L. CE-777为对照,运用流式细胞术对澳洲坚果基因组C值进行了测定。结果表明,澳洲坚果‘O.C’二倍体基因组DNA总量为1.91488599 pg,其C值为0.957443 pg;按1 pg DNA=0.978×109 bp来计算,‘O.C’基因组大小为1.872758×109 bp;采用2种不同对照材料作为内标测定的结果无显著差异。本研究发现,运用流式细胞术进行澳洲坚果基因组C值测定准确可靠,可为其他物种基因组C值测定提供参考。 相似文献
5.
龙眼SRAP反应体系的建立和优化 总被引：3，自引：1，他引：2
采用分步优化的方法对影响龙眼SRAP-PCR反应的模板DNA用量、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、TagDNA聚合酶用量等进行了研究。确立了适合龙眼SRAP分析的反应体系,即体系总体积25μl,包含1×PCR Buffer ,Mg2+ 2.0mmol/L,dNTPs 0.5 mmol/L,引物0.3μmol/L,模板DNA 10ng, TaqDNA聚合酶1.5 U。结果表明,该体系能很好地满足龙眼基因组SRAP扩增的要求,SRAP标记应用于龙眼遗传研究是可行的。 相似文献
6.
红叶石楠RAPD反应体系的优化 总被引：3，自引：2，他引：1
建立并研究适合红叶石楠的RAPD的最佳反应体系,为以后开展红叶石楠的遗传多样性研究、物种资源研究和亲缘关系鉴定等提供重要的参考。采用改进后的CTAB法,成功地提取了红叶石楠基因组DNA,通过单因素试验,研究了Mg2+、dNTP、引物的浓度和模板DNA,Taq酶的用量对RAPD反应的影响,建立适合于红叶石楠的RAPD反应体系。结果表明,在25 μL的RAPD反应体系中最佳反应条件分别是10×PCR Buffer 2.5 μL、Mg2+ (25 mmol/L) 2.0 μL、引物(20 μmol/L) 2.0 μL、dNTPs (2.5 mmol/L) 1.8 μL、DNA模板(49.5 μg/mL) 2.0 μL、Taq聚合酶0.3 μL (5 U/μL)。适宜的PCR循环程序为94℃预变性4 min,然后44个循环（94℃变性30 s,36℃退火30 s,72℃延伸2 min）后,72℃延伸10 min,最后16℃保存。改进的CTAB法能成功地提取红叶石楠基因组DNA,利用单因素试验设计所建立的RAPD反应体系,通过重复试验证明了该体系稳定可靠,可应用于红叶石楠遗传多样性、亲缘关系等方面的研究中,为红叶石楠在分子生物学研究奠定了基础。 相似文献
7.
橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化 总被引：1，自引：1，他引：0
为探索适合橡胶草基因组DNA的提取方法和RAPD反应体系。采用改良CTAB法提取橡胶草叶片总DNA,得到的DNA能满足RAPD分析需要。通过单因子实验法分析DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶以及Mg2+浓度对RAPD扩增结果的影响,建立了适合于橡胶草RAPD分子标记的最佳反应体系,即20 μL体系中包括：模板DNA30 ng、Taq DNA聚合酶1.75 U、dNTPs浓度0.25 mmol/L、Mg2+浓度2.0 mmol/L、引物浓度0.5 μmol/L、10×PCR Buffer 2.0 μL。RAPD扩增反应程序为：94℃预变性5 min,94℃ 30 s,37℃ 30 s,72℃ 70 s,45个循环,最后72℃延伸10 min。该反应体系具有较好的稳定性及可重复性。 相似文献
8.
摘 要：为了从分子水平对款冬种质资源进行鉴定和遗传多样性分析,分别采用SDS法、CTAB法、改良SDS法和改良CTAB法提取款冬叶片基因组DNA,比较不同方法的提取效果,并用改良CTAB法提取的DNA进行ISSR-PCR扩增体系摸索,建立优化的ISSR-PCR反应体系。结果显示：改良SDS法和改良CTAB法都可以提取出高质量的DNA,最优的ISSR-PCR反应条件为: 20μl反应体系中含DNA模板约20ng,Taq 酶1.0 U,Mg2+ 2.00 mmol/L,dNTPs 0.20 mmol/L,引物0.6 μmol/L,1×PCR缓冲液。 相似文献
9.
检测分析成年雌性中国鲎不同组织的营养成分,探索其繁殖期的营养需求,寻找促进中国鲎性腺发育和卵细胞成熟的方法。采用国标生化分析方法对成年雌性中国鲎肌肉、黄色结缔组织和卵的常规营养、氨基酸和脂肪酸进行测定。结果表明,3种组织在常规营养成分、氨基酸和脂肪酸组成上较为一致,但在含量上存在着明显差异,肌肉水分含量最高(77.5%),卵粗蛋白含量最高(27.9%),黄色结缔组织粗脂肪(16.5%)、粗灰分(1.6%)、钙(1220 mg/kg)、磷(107 mg/100 g)含量均最高。3种组织中检测出17种氨基酸、13种脂肪酸;氨基酸组成中以谷氨酸(Glu)含量最高,脂肪酸组成中以棕榈酸(C16:0)和油酸(C18:1)含量为最高。DHA和EPA含量均为卵>黄色结缔组织>肌肉。以上结果说明,成年雌性中国鲎肌肉具有高蛋白质、低脂肪的特点,卵中含有丰富的氨基酸和不饱和脂肪酸。研究结果对于其种质资源保护、合理开发利用和营养价值评价均具有一定参考意义。 相似文献
10.
2009年7-8月于养殖群体中随机抽取93尾尼罗罗非鱼作为实验样本,逐尾测定肌肉、肝脏、性腺和肠脂的能量密度等相关生化成分,选择与能量密度相关显著的生化成分作为预测因子,分别建立肌肉等组织的能量密度预测方程。结果表明尼罗罗非鱼肌肉和肝脏能量密度与各自粗脂肪含量的相关关系均达极显著水平（P<0.01）,经协方差分析后分别建立公共方程为Em = 0.196 Fm + 21.931（r=0.902）和El = 0.187 Fl + 19.697（r=0.914）。肠脂能量密度与其干物质含量相关极显著（P<0.01）,建立雌雄公共方程为Ef = 0.159 Df + 23.973（r=0.917）。经统计分析,卵巢和精巢的理想预测因子分别为粗脂肪含量和干物质含量,分别建立预测方程为Eo = 0.118 Fo + 25.493（r=0.909）和Es = 0.268 Ds + 19.697（r=0.905）。 相似文献
11.
15个西兰花芽苗菜中萝卜硫素含量差异研究 总被引：1，自引：1，他引：0
西兰花芽苗菜营养价值高且富含萝卜硫素,具有预防和抑制癌症的功效。为分析种质资源间萝卜硫素含量的差异,采用响应面中心复合设计法对超声浸提时间、水解时间和提取液pH条件3个因素进行优化分析,获得最优萝卜硫素提取方法,并用该方法对种质资源中萝卜硫素含量差异分析。结果表明,超声处理时间为12 min、pH条件为5.0、水解时间为4.3 h是提取西兰花芽苗菜萝卜硫素的最佳条件。利用该方法检测到15个种质资源的芽苗菜中萝卜硫素含量差异显著,其中CDBY-10中含量最高(506.896 μg/g)、CDBY-22中含量最低(50.416 μg/g)。15个种质资源中萝卜硫素含量主要分布在0~200 μg/g,频次拟合不显著。多数种质资源萝卜硫素含量符合晚熟>早熟>中熟的规律。CDBY-10、CDBY-20、CDBY-15可作为高萝卜硫素西兰花芽苗菜进行深入科学研究和商业开发。 相似文献
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氨态氮、亚硝态氮、硝态氮对麦穗鱼的急性毒性研究 总被引：3，自引：1，他引：2
为了对麦穗鱼的人工养殖和作为水生毒理学的实验材料提供参考。在水温(12.7±1)℃、溶氧5.60~9.87 mg/L的条件下,研究了氨态氮、亚硝态氮、硝态氮对麦穗鱼的急性毒性。试验结果表明：非离子氨对麦穗鱼的24、48、72、96 h的LC50值（95%置信区间）分别为0.435 mg/L (0.407~0.466 mg/L)、0.384 mg/L (0.356~0.417 mg/L)、0.371 mg/L (0.344~0.402 mg/L)、0.346 mg/L (0.316~0.383 mg/L),非离子氨对麦穗鱼的安全浓度是0.0346 mg/L。亚硝态氮对麦穗鱼的24、48、72、96 h的LC50值（95%置信区间）分别为422.862 mg/L (365.741~490.035 mg/L)、327.746 mg/L (276.875~394.054 mg/L)、266.291 mg/L (228.302~310.877 mg/L)、236.907 mg/L (200.488~281.108 mg/L),亚硝态氮对麦穗鱼的安全浓度是23.6907 mg/L。硝态氮对麦穗鱼的24、48、72、96 h的LC50值（95%置信区间）分别为2.155 g/L (2.074~2.242 g/L)、1.929 g/L (1.864~1.999 g/L)、1.769 g/L (1.701~1.842 g/L)、1.663 g/L (1.577~1.780 g/L),硝态氮对麦穗鱼的安全浓度是0.1663 g/L。在3种化合物中,非离子氨对麦穗鱼毒性最大,亚硝态氮次之,硝态氮对麦穗鱼的毒性最小。 相似文献
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马氏珠母贝TLR2基因cDNA的分子特征及组织表达分析 总被引：1，自引：0，他引：1
TLR2（toll like receptor 2）是TLR模式识别受体家族的重要成员之一,参与有机体的免疫识别。本研究采用cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆获得了马氏珠母贝（Pinctada martensii）TLR2基因（PmTLR2）cDNA的全长序列并对其序列特征进行分析;同时检测了PmTLR2基因的mRNA在马氏珠母贝六个组织中的表达。结果表明：PmTLR2基因的cDNA全长2614 bp,包含41 bp的5'UTR,299 bp的3'UTR,27 bp的polyA,开放阅读框为2274 bp,编码758个氨基酸残基。多序列比对显示PmTLR2与牡蛎TLR2的序列相似性最高,为51%;Smart软件分析显示PmTLR2的蛋白序列中含有8个亮氨酸重复序列（Leucine rich repeats,LRRs）, 1个C端亮氨酸富集区（Leucine-rich repeat C-terminal,LRR-CT）,1个N端亮氨酸富集区（Leucine-rich repeat N-terminal,LRR-NT）,1个TIR（Toll/IL-1R）同源结构域（TIR）;荧光定量PCR分析表明PmTLR2在马氏珠母贝肝胰脏、性腺、血淋巴、鳃、外套膜和闭壳肌六个组织中均有表达,鳃中表达量最高。本研究为进一步阐述PmTLR2在马氏珠母贝免疫应答中的作用机制提供理论基础。 相似文献
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H2O2溶液对 2种红葡萄离体叶中主要茋化物含量的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
比较H2O2诱导后美国红提(‘红地球’)和紫香无核(‘新农4号’)离体葡萄叶片中的白藜芦醇(Res)、白藜芦醇苷(PD)、紫檀芪(PS)、ε-二聚体葡萄素(ε-VF)4种芪化物的含量,为利用葡萄生产废弃叶片的综合利用提供依据.采用H2O2溶液对红提和紫香无核离体葡萄叶片进行诱导,采用高效液相色谱法分析4种芪化物的含量变化.H2O2诱导后的两种离体叶片4种芪化物的积累呈现显著的量时依赖性;2.5％H2O2处理48 h后叶片4种芪化物含量可提高6倍以上,以红提的含量相对较高,总芪化物鲜重达到138.82μg/g.用H2O2诱导后的离体葡萄叶中4种芪化物含量比诱导前有了较为明显的增加. 相似文献
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巴西橡胶树红根病菌DNA提取有效方法比较 总被引：1，自引：1，他引：0
旨在筛选适用于橡胶树红根病菌DNA提取的有效方法并评价其效果。利用CTAB改良法、氯化苄改良法、SDS改良法等3种方法提取橡胶树红根病菌菌丝体DNA,并通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳对DNA样品进行检测,比较提取DNA的产量、质量;再选用提取效果最好的方法提取5个时间段（4、6、8、10、12天）的菌丝DNA并进行ITS-PCR检测。CTAB改良法提取的样品DNA纯度最好,产率最高,OD260/OD280为1.82~1.84,浓度可达280 μg/mL;培养4~6天的菌丝提取的DNA质量最高,适合PCR检测需要。CTAB改良法是一种适用于橡胶树红根病菌DNA提取的理想方法。 相似文献
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乐清湾围塘养殖泥蚶繁殖周期与环境因子的关系 总被引：1，自引：1，他引：0
为了研究人工养殖环境条件及气候变化对乐清湾泥蚶性腺发育造成的影响。自2010年3月-2011年2月,利用组织学等手段对乐清湾围塘养殖泥蚶的性腺发育作了周年观察,同时对围塘养殖环境温度、盐度和叶绿素a做了周年调查和分析。结果表明：其性腺发育分为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期5个阶段。配子发生开始于3月,水温为16.6℃,大部分个体在6-7月性成熟,此时水温和叶绿素a含量达到最高,7月后大规模产卵。乐清湾围塘养殖泥蚶为雌雄异体,泥蚶的卵细胞直径呈显著的周年变化,从3月(8.87±2.4) μm开始增加,7月达最大值(48.47±9.51) μm。随着产卵的发生,卵径急剧减小,至8月,卵径降低至(18.57±2.77) μm。卵径变化与性腺发育周期具有明显的相关性,卵径可以作为判断泥蚶性腺成熟度的一个良好指标。 相似文献
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朝鲜蓟加工品中多酚含量研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为研究分析不同产地朝鲜蓟罐头食品中多酚种类、含量的差异,应用液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱方法(LC-MS/MS)进行检测,样品在避光条件下经70%的甲醇水溶液室温震荡提取1 h后,进行液相色谱-质谱分析。采用Agilent proshell 120 EC-C18色谱柱,流动相A为0.1%乙酸-水,流动相B为乙腈,采用线性梯度洗脱。结果表明,此方法共定性定量出朝鲜蓟罐头中17种多酚物质,同一样品中不同多酚含量差异显著,绿原酸含量最高为625.701 μg/g,洋蓟素的含量次之,平均值为315.823 μg/g;按照不同地区多酚含量比较,亚洲样品中,多酚含量普遍偏低。由此得出,应用LC-MS/MS可以快速高效检测出朝鲜蓟罐头食品中多酚含量,多酚含量因产地不同差异显著。 相似文献
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不同居群芦竹纤维素和木质素含量的比较研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为了阐明芦竹纤维素和木质素含量与居群的关系以及与生长发育时期的关系,从而为开发利用芦竹资源提供依据,分别采用酸碱洗涤法和Klason法测定了8个居群芦竹成熟期的纤维素和木质素含量,并测定了芦竹2个居群在不同生长期的纤维素和木质素含量。结果表明：（1）芦竹同一居群不同部位的纤维素与木质素含量由高到低均为：秆＞枝＞叶;（2）8个居群芦竹纤维素含量由高到低依次为：浙江嵊州芦竹＞南京市郊西解芦竹＞湖南衡阳芦竹＞浙江慈溪芦竹＞江苏阜宁芦竹＞湖南凤凰芦竹＞贵州铜仁芦竹＞云南洱源芦竹;纤维素含量最高的是采自浙江嵊州的样品,为49.2%;（3）8个居群芦竹木质素含量由高到低依次是：湖南凤凰芦竹＞贵州铜仁芦竹＞云南洱源芦竹＞浙江嵊州芦竹＞南京西解芦竹＞湖南衡阳芦竹＞江苏阜宁芦竹＞浙江慈溪芦竹,木质素含量最高的是采自湖南凤凰县的样品,为27.7%。（4）随着生长期的延长,芦竹的纤维素和木质素含量都有不同程度的提高,在生长期2~6个月时增长快,此后6个月增长缓慢。 相似文献