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采用碳二亚胺(EDC)法将氟罗沙星(FLE)与载体蛋白BSA、OVA分别偶联合成人工抗原BSA-FLE、OVA-FLE,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外分析法对合成的人工抗原进行了鉴定。BSA-FLE用作免疫抗原免疫Balb/C小鼠,OVA-FLE用作检测抗原包被酶标板检测抗体效价。免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合获得了5株(4F11、2C3、8G2、3C1、2G8)稳定分泌抗FLE抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型鉴定均为IgG1。将3C1接种小鼠制备腹水,用辛酸-硫酸铵法对腹水进行纯化,纯化后腹水效价1∶1 024 000。抗体分子量160.766 KD,亲和常数为8.57×108M-1。 相似文献
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为制备角蛋白19片段（CYFRA21-1）的单克隆抗体（mAb）,采用间接 ELISA 方法检测免疫小鼠的抗体效价,融合、筛选、克隆化单克隆抗体,将筛选得到的单克隆细胞株注入小鼠腹腔制备腹水,采用辛酸硫酸铵法、蛋白 A 柱纯化腹水抗体,以 SDS-PAGE 凝胶电泳、紫外分光光度法检测抗体纯度和浓度;利用鼠抗体亚型鉴定试剂盒对单克隆抗体进行亚型鉴定;采用阻断 ELISA 法测定 mAb 的敏感性（IC50）。结果表明,筛选获得4株分泌角蛋白19片段 mAb 的细胞株,将4株细胞株2F9、3H5、7C3、6F11注入小鼠腹腔,分别获得效价为2．56×105、5．12×105、5．12×105、2．56×105的单克隆抗体,经纯化,抗体蛋白浓度为12．43 mg／mL～16．00 mg／mL,为 IgG1型抗体,其 IC50在1．03 ng／mL～1．53 ng／mL 之间。说明获得了4株分泌高效价 CYFRA21-1单克隆抗体的细胞株,为建立 CYFRA21-1的检测试剂盒奠定了基础。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2015,(5)
将鸭疫里默氏杆菌的pfs基因进行原核表达,重组蛋白经纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株。通过间接ELISA法测定腹水效价、Western blot法检测其免疫反应性,并鉴定抗体的亚型。重组蛋白SDS-PAGE检测结果验证得到26 k Da Pfs蛋白,免疫小鼠后最终获得1株阳性杂交瘤细胞株,命名为2E2E6,为Ig G1亚类,间接ELISA法检测腹水效价为1:64 000。Western blot结果表明制备的单克隆抗体具有良好的免疫反应性。本研究成功制备了Pfs的单克隆抗体,为进一步研究Pfs在鸭疫里默氏杆菌中的作用提供了参考。 相似文献
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采用改进的重氮法合成三聚氰胺免疫抗原(三聚氰胺-BSA)和三聚氰胺包被抗原(三聚氰胺-OVA),以三聚氰胺-BSA免疫BALB/c小鼠,选取间接ELISA测定效价达8000以上的BALB/C小鼠进行融合,用HAT和HA选择性培养基筛选后,得到一株稳定分泌抗三聚氰胺抗体的杂交瘤细胞株命名为3G4,经多次传代培养和反复冻存复苏后能够稳定分泌抗体,在BALB/C小鼠体内诱生腹水,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水。用间接ELISA方法测定杂交瘤培养上清效价为1:1600,腹水效价为1:2.048×10~6,抗体亚类为IgG2b。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2015,(3)
应用重氮化方法制备了磺胺氯吡嗪钠(sulfachloropyrazine sodium,SPZ)完全抗原SPZ-OVA,将成功偶联的人工全抗原(SPZ-OVA)免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,经间接ELISA检测,1号小鼠血清抗体效价达到1:6.4×104。取该小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。利用ELISA方法对融合后的杂交瘤细胞上清进行检测,筛选出能够稳定分泌抗体的细胞株:D9。将细胞株D9扩大培养后,经腹腔注射小鼠使其产生腹水。腹水单抗经纯化后,通过间接竞争ELISA对该单克隆抗体的效价、半数抑制浓度以及特异性进行检测。结果表明,所制备的单克隆抗体效价为1:4×105,半数抑制浓度为326 ng/m L,特异性良好。 相似文献
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牛干扰素单克隆抗体的制备与初步鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
通过IPTG诱导的大肠埃希菌表达重组牛干扰素-γ融合蛋白(BovIFN-γ),利用GlutathioneSepharose 4 Fast Flow亲和层析柱进行融合蛋白的纯化,纯化后的融合蛋白BovIFN-γ作为抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA筛选,有限稀释法克隆亚克隆获得分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、亚类及稳定性进行鉴定。获得一株稳定分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株A12E9,细胞培养上清和腹水效价可达1∶3 200和1∶160 000。 相似文献
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猪流行性腹泻病毒S基因B细胞表位的筛选及其单克隆抗体的制备与鉴定 《畜牧与饲料科学》2022,43(4):14-18
目的 应用生物学软件与单克隆抗体技术相结合的方法鉴定PEDV S2基因B细胞表位肽。方法 利用CLC Sequence viewer 6.8软件及在线数据库IEDB筛选出PEDV S2基因B细胞表位,并人工合成表位肽。将表位肽与钥孔血蓝蛋白（KLH）耦联后作为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,通过ELISA法筛选出抗体效价较高的小鼠进行1次加强免疫,3 d后取脾脏制备脾细胞悬液进行细胞融合。经HAT选择培养基培养筛选有效杂交瘤细胞,采用ELISA法筛选阳性克隆继续进行扩大培养。将部分阳性杂交瘤细胞进行小鼠腹腔注射,并收集腹水。通过ELISA方法分别检测小鼠腹水和单克隆细胞株培养上清液抗体效价,确定最高效价作为后备细胞株。结果 筛选出B细胞表位肽序列为:MQYVYTPTYYML;免疫多肽抗原后融合前血清抗体效价达到1:2 000;BALB/c小鼠腹水及单克隆细胞株培养物上清液ELISA检测结果显示抗体效价达到1:4 000。结论 筛选出了PEDV S2基因B细胞表位,为PEDV表位肽疫苗载体构建研究提供参考。 相似文献
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SMD单克隆抗体的制备及测定方法的建立 总被引：6，自引：0，他引：6
用戊二醛作为偶联剂 ,将磺胺对甲氧嘧啶 (SMD )与牛血清白蛋白 (BSA )或卵清蛋白 (OVA)偶联形成完全抗原 ,经紫外分光光度计扫描鉴定。以人工抗原免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与骨髓瘤细胞 (SP2 /0 -Ag1 4)融合 ,用间接ELISA联合竞争ELISA法筛选出产生针对SMD抗体的杂交瘤细胞。经克隆 ,得到 3株特异性好的阳性杂交瘤细胞 ,注入小鼠腹腔产生腹水。建立了测定SMD的ELISA法 ,其检测下限小于5ng/mL。 相似文献
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《中国兽医杂志》2016,(2)
本研究采用鸡胚繁殖NDV-XX08,差速离心法纯化NDV,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与NSO细胞进行融合,用间接ELISA和血凝抑制试验(HJ)进行筛选,挑选效价高的杂交瘤细胞进行克隆和亚克隆,建立阳性杂交瘤细胞株,最终得到一株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,命名为4F12。采用体外细胞培养和体内诱生腹水的方法制备了其McAb。对获得的单克隆抗体采用ELISA,HI,Western-Blotting方法进行鉴定。杂交瘤细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1:160和1:3.2×10~4。获得的单克隆抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡胚阴性尿囊液、鸡正常组织、鸡[gG、鸡传染性囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽流感检测抗原均无交叉反应性。HI试验表明,制备的单抗没有血凝抑制活性。Western-Blotting证明获得的单抗与新城疫病毒蛋白有特异性反应。经连续传代20次,冻存、复苏3次,4F12杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体。 相似文献
12.
采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)(Onderstepoort株)核蛋白单克隆抗体(MAb);小鼠腹腔注射阳性克隆生产腹水;以G蛋白亲和层析法进行纯化;用透析法对单抗进行FlTC(异硫氰酸荧光素)标记;Sephadex G-25去除游离荧光素;测定F/P值及荧光抗体工作浓度;以吸收、阻断、抗原交叉试验对荧光抗体进行特异性鉴定.结果表明,获得6株能稳定分泌CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取抗CDV核蛋白的CE3单抗成功地制备了质量较高的荧光抗体. 相似文献
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《中国畜牧杂志》2015,(19)
国内外研究表明通过对奶牛血液及乳汁中孕酮水平的检测能有效的用于奶牛发情鉴定、妊娠诊断及繁殖障碍性疾病的监测。本研究旨在制备鼠抗孕酮单克隆抗体,为奶牛孕酮免疫学检测技术提供研究基础。实验采用碳化二亚胺方法合成孕酮完全抗原,经SDS-PAGE电泳及紫外分光光度计扫描鉴定,结果表明孕酮免疫抗原(P4-BSA)及检测抗原(P4-OVA)合成制备成功。乳化后的P4-BSA经皮下免疫小鼠,三免后血清效价可达到1∶64000。采用聚乙二醇化学融合方法进行细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,最终获得一株能稳定分泌Ig G1型抗孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株,诱生的腹水经辛酸硫酸纯化制备,抗体的特异性较好。 相似文献
14.
马波沙星(MBF)是一种氟喹诺酮类抗菌药。本试验利用碳二亚胺法合成马波沙星免疫原和包被原,经紫外分光光度法、SDS-PAGE和免疫学方法,鉴定人工抗原合成成功。通过免疫小鼠和单克隆抗体技术,获得2株可分泌马波沙星抗体的杂交瘤细胞株(5G2和7H5),并将建筑细胞注入小鼠的腹腔内,获得腹水型单克隆抗体。经过纯化和ELISA鉴定,结果表明5G2株单克隆抗体的效价较高,达1.28×10^5,其单抗亚型是IgG2b,轻链是Kappa。经ELISA方法优化了最佳封闭液和抗原抗体的最佳工作浓度,当MBF药物浓度在100~5000pg/mL时,有良好的线性关系,线性方程y=0.3798x-0.6613,R^2=0.9872,IC50=1.029pg/mL,LOD=45.13pg/mL,LOQ=322.59pg/mL。 相似文献
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采用改进的重氮法合成三聚氰胺免疫抗原（三聚氰胺-BSA）和三聚氰胺包被抗原（三聚氰胺-OVA）,以三聚氰胺-BSA免疫BALB／c小鼠,选取间接ELISA测定效价达8000以上的BALB／C小鼠进行融合,用HAT和HA选择性培养基筛选后,得到一株稳定分泌抗三聚氰胺抗体的杂交瘤细胞株命名为3G4,经多次传代培养和反复冻存复苏后能够稳定分泌抗体,在BALB／C小鼠体内诱生腹水,用辛酸一硫酸铵沉淀法纯化腹水。用间接ELISA方法测定杂交瘤培养上清效价为1：1600,腹水效价为1：2．048×10^6,抗体亚类为IgG2b。 相似文献
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抗水牛伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗原单克隆抗体的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
用纯化的伊氏锥虫变异表面糖蛋白（variant surface glucoprotein, VSG）免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经过3次克隆和间接ELISA方法筛选,获得3D7、5B9 2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用间接ELISA方法检测杂交瘤细胞培养液上清效价和小鼠腹水效价,其中细胞培养上清效价分别为1∶6400和1∶12800,腹水效价分别为1∶105和1∶106。单抗的亚型鉴定结果表明,3D7、5B9分泌的抗体都为IgG1亚类κ链。 相似文献
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抗氨苄青霉素单克隆抗体的制备及初步鉴定 总被引：4，自引：2，他引：2
利用碳化二亚胺(EDC)法将氨苄青 霉素(Ampicillin,AMP)与匙孔嘁血蓝蛋白 (mcKLH)偶联制备免疫原免疫Balb/c小鼠, 应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓 瘤细胞(SP2/0)融合,建立分泌氨苄青霉素单 克隆抗体的杂交瘤细胞株。同上方法将氨苄 青霉素连接到阳离子化的牛血清白蛋白(cB SA)上制备检测抗原,对AMP KLH偶联物 免疫小鼠产生的抗体进行检测。通过对杂交 瘤细胞培养上清的检测、鉴定,筛选出8株高 亲和力的杂交瘤细胞株,用其制备的腹水 ELISA效价达到2×106,纯化后的单克隆抗 体(McAb)可以应用于氨苄青霉素残留的快 速检测。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体的制备与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP-1)脂多糖(LPS)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法:腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用于细胞融合,且于融合前3天加强免疫1次。常规方法进行融合,HT、HAT培养液选择培养融合后的细胞,ELISA检测细胞培养上清中的LPS抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆传代。结果:获得2株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其小鼠腹水单克隆抗体效价132000～164000。结论:已成功建立2株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的免疫胶体金分型诊断技术奠定基础。 相似文献
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抗狂犬病毒单克隆抗体的研制及应用 总被引：2，自引：0，他引：2
应用杂交瘤技术获得4株分泌抗狂犬病毒(Rabies virus,RV)单克隆抗体细胞株,并对其特性进行分析。经鉴定,它们所分泌的抗体类型为IgG1,腹水效价为1∶105~1∶107,ELISA法和间接免疫荧光检测(indirect immunofluoreseent assay,IFA)结果表明:该4株单抗对RV有良好的特异性,对正常Vero细胞及人白蛋白和其他细胞培养物无非特异性反应。将这些单抗腹水进行Protein G亲和层析纯化后获得的纯化抗体用于制备反相亲和层析柱,并以反相亲和层析法纯化RV以获得高纯度RV抗原。应用纯化的RV建立胶体金免疫层析法(gold-immunochromatography assay,GICA)检测RV抗体血清,结果显示,GICA与标准ELISA法检测比较的总符合率为96.1%。 相似文献
20.
为了研究捻转血矛线虫诱导山羊产生Th9型免疫应答的特点,制备了抗山羊IL-9单克隆抗体。采用基因克隆、表达和纯化得到重组蛋白IL-9,并以重组IL-9为免疫原,重组蛋白IL-9和His-tag为筛选抗原,通过杂交瘤细胞技术,筛出1株稳定分泌抗山羊IL-9单克隆抗体细胞株,命名为6A11A8。将该细胞株接种小鼠腹腔,制备腹水,并将纯化后的抗体与生物素耦合,用流式细胞术检测山羊外周血单核细胞(PBMCs)中表达IL-9的细胞亚类。结果显示:融合蛋白大小约为16 ku,主要分布于包涵体中,筛选出的6A11A8细胞株产生的抗体效价高、特异性强,其细胞上清抗体效价可达1∶2430,其抗体亚型为IgG2bκ,层析柱纯化小鼠腹水后其效价可达1∶512 000,该单抗可识别山羊PBMCs中分泌IL-9的亚类细胞。结论:本研究获得了山羊IL-9单克隆抗体,为研究山羊Th9型免疫反应奠定了基础。 相似文献