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《江西农业学报》2022,(9)
为分析猪源抗菌肽NK-lysin的理化性质和蛋白结构,并研究猪源抗菌肽在小鼠体内的抑菌效果,以猪小肠组织cDNA为模板进行PCR扩增和测序,通过生物信息学相关软件和工具对其测序结果进行分析。试验选用60只小鼠,随机分为4组(预防组、细菌模型组、治疗组和对照组),设置不同的大肠杆菌和猪源抗菌肽给药方案。结果表明,猪源抗菌肽NK-lysin为稳定的,半衰期在大肠杆菌中(体内)长,与白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)和颗粒性蛋白B(Granzyme B,GZMB)具有相互作用;预防组和治疗组小鼠存活率分别为80.00%和86.67%。综上所述,猪源抗菌肽在小鼠体内安全且具有一定的抑菌作用。 相似文献
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对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源Fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性.结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5-6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源Fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达,含量达到170 mg·L-1.采用琼脂孔扩散法对该抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性等特性进行分析,结果表明:鸡源Fowlicidin-3抗菌肽具有较强的热、酸稳定性;对致病性大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ的最小抑菌浓度分别为3.12、1.56和1.56μg·mL-1.在对大肠杆菌O1感染雏鸡的体内疗效试验中,鸡源Fowlicidin-3显示出了较好的预防和治疗效果. 相似文献
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【目的】研究中华蜜蜂（Apis cerana cerana）抗菌肽Apidaecin在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）中的重组表达,并验证纯化后的重组抗菌肽Apidaecin在体内和体外是否具有抗菌活性,为开发新型、安全具有抗菌和免疫调节功能的抗菌肽制剂提供理论依据。【方法】以意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）Apidaecin为模板,克隆出中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,成功构建his-pHT43/Apidaecin表达载体,并参照MoBiTec所提供的制备方法成功制得枯草芽孢杆菌感受态细胞,现配现用,以保证其活性并得以在枯草芽孢杆菌表达系统中重组表达。使用His标签蛋白纯化试剂盒（可溶性蛋白）进行表达蛋白的分离纯化,使用Easy II Protein Quantitative Kit（BCA）试剂盒测定浓度。纯化得到的重组抗菌肽Apidaecin作用于大肠杆菌K88,在体外进行抑菌圈试验和最小浓度抑菌法测定;在体内,以小鼠为试验动物模型,试验组小鼠腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin,阴性对照组注射相同体积的生理盐水,阳性对照组注射相同体积的头孢霉素,然后人为感染大肠杆菌K88,感染24 h后对小鼠进行解剖,取得肠道样品和血液样品,并从肠道屏障和免疫功能两个方面探讨重组抗菌肽Apidaecin对感染大肠杆菌K88小鼠的保护作用。使用ELISA试剂盒对染菌小鼠血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）与肠道sIgA水平进行测定,采用qRT-PCR法对小鼠肠道紧密连接蛋白基因（claudin-1、ZO-2）以及小鼠肠道细胞因子（促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL6和抑炎因子IL10）的转录水平进行测定。【结果】克隆得到的中华蜜蜂Apidaecin含有183 bp的碱基,编码60个氨基酸,包含Apidaecin的信号肽序列、一个基础的RR二肽以及抗菌肽Apidaecin的氨基酸序列（内含高度保守的8个氨基酸序列）,编码的蛋白质命名为AccApidaecin,其分子量为15.6 kD,等电点为5.33。在IPTG终浓度为3 mmol·L -1,诱导温度为30℃,诱导表达12 h后,可从1 L表达上清中纯化得到约20 mg抗菌肽。药敏试验显示,重组抗菌肽Apidaecin在体外与阴性对照相比有明显抑菌圈出现,且测得的最小抑菌浓度为10 mg·L -1;在小鼠体内,腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin的染菌试验组与注射生理盐水的染菌试验组相比免疫球蛋白含量差异显著(P<0.05),说明腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin能够有效缓解由大肠杆菌K88引起的小鼠免疫球蛋白含量的增加;同时,小鼠肠道相关蛋白的基因表达量也差异显著(P<0.05),说明重组抗菌肽Apidaecin能够有效保护被大肠杆菌K88侵染的小鼠肠道。【结论】在枯草芽孢杆菌中能够成功重组表达中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,并且纯化后的中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin在体外对大肠杆菌K88有良好的抗菌效果;经腹腔注射进入小鼠体内,能够提高小鼠的免疫机能,有效抵抗大肠杆菌K88对小鼠的侵染。 相似文献
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【目的】分离纯化牛乳酪蛋白酶解物,检测酶解物及其分离组分的抑菌活性,并制备抗菌肽乳基料。【方法】从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶及木瓜蛋白酶中筛选一种蛋白酶水解牛乳酪蛋白,将其酶解产物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,以对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)为指标,分析酶解物和分离组分的抑菌活性。【结果】(1)木瓜蛋白酶水解牛乳酪蛋白4.5h,其酶解物对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用。(2)大孔吸附树脂将牛乳酪蛋白酶解物分离成4个组分,其中以体积分数75%乙醇洗脱组分的抑菌作用较强。(3)凝胶过滤色谱将体积分数75%乙醇洗脱组分分离成4个色谱峰,其中A峰对大肠杆菌和沙门氏菌抑制作用较强,B峰对金黄色葡萄球菌抑制作用较强,A峰和B峰经冷冻干燥后成功制备了2种抗菌肽乳基料。【结论】牛乳酪蛋白酶解物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,其分离组分的抑菌活性逐步增强,能够用于抗菌肽乳基料的制备。 相似文献
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牛乳铁蛋白活性多肽(Lactoferricin B,LfcinB)是一种阳离子型抗菌肽,因其具有多种生物学功能,现已被认为具有能够替代传统抗生素的发展前景。然而,由于传统的分离制备方法存在诸多弊端,所以基于基因工程的原核表达技术在制备高纯度和高效表达的该蛋白方面具有极其深远的意义。研究旨在摸索出一套完整的利用原核表达技术制备LfcinB的分子生物学方法。依据大肠杆菌密码子偏爱性的原则,设计了LfcinB的基因序列,通过人工合成的方法获得该基因的优化序列,借助Bam HI和Sal I双酶切、连接等手段将其构建到原核表达载体pGEX-4T-2上,获得重组表达载体pGEX-4T-2-LCB,将该载体转化E.coli Rosetta(DE3)。使用IPTG诱导,结果发现LfcinB在大肠杆菌中表达量超过20%。通过一系列蛋白纯化技术分离得到纯度达到95%以上的LfcinB融合蛋白。抑菌试验结果表明,重组抗菌肽LfcinB融合蛋白具有很好的抑菌活性。研究结果为人们使用基因工程技术制备抗菌肽LfcinB提供了具有重要参考价值的技术路线和理论依据。 相似文献
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《甘肃农业大学学报》2019,(6)
【目的】从临床病死仔猪体内分离肠外致病性大肠杆菌,研究猪群中流行菌株的毒力基因分布、耐药性、致病性情况.【方法】病死仔猪肠外组织分离大肠杆菌,然后进行16S rDNA PCR测序鉴定、种系发育分群、毒力基因检测、抗菌药物的药敏试验、小鼠致病性试验、全基因组测序验证.【结果】共筛选到30株猪源肠外致病性大肠杆菌,其中A群4株、B1群15株、B2群5株、D群6株;毒力基因检测结果发现vaT、iutA、kpsMII、hlyD基因检出率分别为70.0%、33.33%、23.33%、20.0%;药敏试验结果显示:菌株都对多粘菌素B较敏感,对氨苄西林、林可霉素、杆菌肽以及利福平的耐药率为100%;获取了Ex-P27菌株基因组序列图谱,构建了该菌株基因组圈图.【结论】肠外致病性大肠杆菌分离株主要分布在B1群,对氨苄西林、林可霉素、杆菌肽以及利福平均耐药,为指导猪源肠外致病性大肠杆菌的防治与临床用药提供依据. 相似文献
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《湖南农业大学学报(自然科学版)》2010,(Z1)
从蚯蚓体内分离纯化30 kD以下的抗菌肽,并研究其抑菌效果.通过电击诱导蚯蚓产生抗菌肽、超滤浓缩脱盐以及截取3～30 kD的抗菌肽、用阳离子交换分离除去较多杂蛋白、凝胶过滤层析进一步精确分离提纯得到3~30 kD的蚯蚓抗菌肽,有H1和H2两个蛋白浓度较高的峰值.测得其蛋白质量浓度分别为6.82、7.46 mg/μL,其相对分子质量分别在5 856～7 823 kD和14 40～20 00.抑菌活性测定结果表明,H1和H2都有较好的抑菌效果,其中H1对草枯杆菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、大肠杆菌有明显的抑菌效果,H2对巴氏杆菌、大肠杆菌和草枯杆菌也有明显的抑菌效果,H1的抑菌活性比H2高. 相似文献
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为了解新疆春秋两季不同地区耐药猪源大肠杆菌携带β-内酰胺酶和16S rRNA甲基化酶基因及其共存情况。通过PCR方法对克拉玛依地区142株春季猪源耐药菌、9株克拉玛依秋季猪源耐药菌、78株昌吉地区春季猪源耐药菌和52株昌吉地区秋季猪源耐药菌进行β-内酰胺酶(blaTEM、blaCMY-2、blaLAP-1、blaKPC、blaSHV和blaOXA)和16S rRNA甲基化酶(arm A和rmt B)基因检测,并对检出耐药基因的PCR产物进行测序。结果显示:克拉玛依春季猪源耐药菌携带的β-内酰胺酶基因为blaTEM(142/142,100%)、blaOXA(16/142,11.3%)、blaCMY-2(7/142,4.9%)和blaLAP-1(1/142,0.7%);克拉玛依秋季猪源耐药菌携带的β-内酰胺酶为blaTEM(9/9,100%)和blaOXA(1/9,11.1%),克拉玛依春秋两季猪源耐药菌均未检测出16S rRNA甲基化酶基因;昌吉地区春季猪源耐药菌携带的β-内酰胺酶基因为blaTEM(78/78,100%)、blaOXA(9/78,11.5%)、blaCMY-2(3/78,3.8%)和16S rRNA甲基化酶基因rmt B(1/78,1.3%);昌吉地区秋季猪源耐药菌携带的β-内酰胺酶基因为blaTEM(52/52,100%)、blaOXA(4/52,7.7%)、blaCMY-2(3/52,5.8%)和blaSHV(1/52,1.9%),未检测出16S rRNA甲基化酶基因。上述结果表明春秋两季不同地区猪源大肠杆菌blaTEM检出率均为100%;其次不同地区春季猪源大肠杆菌对blaOXA检出率均高于秋季猪源大肠杆菌。产生β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因是猪源菌对β-内酰胺类及氨基糖苷类抗菌药物耐药的主要原因之一,养殖场应合理使用抗菌药物,加强对产生β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因的监控。 相似文献
10.
抗菌肽具有抗菌谱广、不易产生耐药性、无残留等优点,而金黄色葡萄球菌是羊和兔皮下脓肿病的主要病原菌之一。通过对羊皮下脓肿组织样本分离到的金黄色葡萄球菌进行体外抗菌肽抑菌活性检测,同时建立试验兔金黄色葡萄球菌皮下脓肿模型,使用抗菌肽进行防治,最后在羊场开展抗菌肽防治羊皮下脓肿病的试验。结果发现抗菌肽对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为3 900μg/mL,抑菌圈直径达到40 mm,抗菌效价U=1.3×107。试验兔防治试验发现,预防组：预防性饲喂抗菌肽能避免金黄色葡萄球菌皮下脓肿病的发生;治疗组：饲喂抗菌肽可使致病后的试验兔14 d内康复。抗菌肽防治羊皮下脓肿病发现,预防试验：预防组发病率为0.6%(n=834),而对照组发病率为12.4%(n=780);治疗试验：发病后采用抗菌肽结合简单外科手术治疗,14 d内治愈率达95.5%(n=110),3个月内复发率为0,而未用抗菌肽,仅采用简单外科手术治疗,14 d内治愈率为36.4%(n=110),3个月内复发率为77.3%(n=110)。说明抗菌肽具有较好的防治羊皮下脓肿病的效果。 相似文献
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中密度纤维板抗菌处理方法及抗菌效果 总被引：2，自引：0，他引：2
选取LS-500光触媒基础蜡、硅藻纳米复合光触媒液体活性炭、LS-E100(CAPP)吡喃多胺聚酯,配制成不同稀释倍数的抗菌剂;采用喷涂、刷涂工艺对中密度纤维板进行处理;分析抗菌剂的种类、稀释倍数、施加方式等因素,对纤维板的抗菌性能和物理力学性能的影响规律。结果表明:2种处理,中密度纤维板的力学性能,均随着抗菌剂稀释倍数的增大而降低;涂刷工艺处理后的试件,力学性能优于喷洒处理试件的力学性能。涂刷工艺处理的中密度纤维板抑菌圈直径,大于喷洒工艺处理的抑菌圈直径。3种抗菌剂对阳性金黄色葡萄球菌的抑制作用,好于对阴性大肠杆菌的抑制作用;抗菌剂稀释倍数越小,抗菌效果越好。硅藻纳米复合光触媒对阴性大肠杆菌的抑制效果,比LS-500、LS-E100的抑制效果差;其对阳性金黄色葡萄球菌的抑制效果是3种抗菌剂中最好的。 相似文献
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柞蚕抗菌肽Moricin的抑菌活性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
《山东农业科学》2016,(1)
本研究在对柞蚕抗菌肽Moricin基因成功进行克隆及毕赤酵母表达的基础上,对其生物活性进行了研究。结果表明,抗菌肽Moricin对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌临床分离菌株的抑菌圈直径为12~21 mm,表明Moricin对这些菌株均具有较强的抑菌活性,对临床耐药菌株的抑菌作用尤其明显。Moricin对上述菌株的最低抑菌浓度为3.9~15.6μg/m L。Moricin对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的广谱抑菌活性使其在畜禽疫病防治和生产中具有潜在的重要价值。 相似文献
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[目的]研究含多种中药成分的抗菌喷雾的体外抗菌效果并对其抗菌机理进行分析.[方法]选用大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)2种菌,用肉汤稀释法和荧光染色法测定抗菌喷雾对其抑菌活性、抑菌率、最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),用滤纸片法测定其抑菌环,用扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)观察抗菌喷雾对细菌表面结构和超微结构的影响.[结果]中药抗菌喷雾在极短的时间内对E.coli和S.aureus的抑菌率就能达到100％,滤纸法显示抑菌环明显;MIC和MBC结果说明了中药抗菌喷雾在稀释5倍之后仍对2种细菌具有抑制作用;喷雾作用后的细菌大量死亡,表面及内部结构均发生明显变化.[结论]多种中药成分的抗菌喷雾对E.coli和S.aureus具有显著的联合抑菌效果. 相似文献
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《湖北农业科学》2015,(18)
研究以大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aurous)、酵母(Yeast)、匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)、黑曲霉(Aspergillums niger)、灰绿青霉(Penicillium glaucum)为供试菌,测定树莓(Rubus chingii Hu)乙醇提取物的抑菌活性。结果表明,树莓乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌具有比较显著的抑菌效果;在一定温度及pH范围内,其抑菌率与时间呈正相关;而在时间相同的情况下,其抑菌率与乙醇提取物浓度呈正相关。 相似文献
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观察丝光绿蝇(Lucilia sericata)三龄幼虫经针刺体壁诱导48 h后的血淋巴在不同pH琼脂平板上对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeiktic us)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌效果,以及经不同pH缓冲液处理后对溶壁微球菌的抑菌效果.结果表明,丝光绿蝇幼虫经针刺诱导后48 h的血淋巴在pH 6.0、6.5的琼脂平板上对金黄色葡萄球菌的抑菌环较大较清晰,随pH增加抑菌环直径减小.在piH 6.0时,对溶壁微球菌的抑菌环直径最大,随pH增加抑菌环直径减小.用pH 6.0的缓冲液稀释处理血淋巴时,对溶壁微球菌的抑菌环最大,用pH 9.0缓冲液稀释后对溶壁微球菌的抑菌环最小.说明丝光绿蝇幼虫经针刺体壁诱导产生的抗菌物质在酸性条件下比在碱性条件下具有更强的抑菌活性. 相似文献
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RAAB W 《Science (New York, N.Y.)》1946,103(2683):670-671
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随着人们生活质量的提高,高科技含量的材料不断被开发出来,抗菌塑料就是重要的一种。由于向塑料的原材料中添加了抗菌剂,使它具有抑菌和杀菌效果,而抗菌塑料的抗细菌、抗霉菌的效果需要微生物学的方法加以检测,根据塑料的几何形状和接触菌体的效果应该采用覆膜法:在待检测的材料上,均匀涂上一定量的细菌接种培养液,培养后用活菌平板计数法综合统计抗细菌率,根据抗细菌率确定材料属于抗菌还是强抗菌材料。 相似文献
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[目的]研究芥菜提取物的抑菌活性,为开发芥菜作为杀菌剂应用于农业生产奠定基础,为芥菜资源的合理利用提供理论依据。[方法]采用菌丝生长速率法,测定芥菜提取物对西瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、葡萄座腔菌和烟草黑胫菌等植物病原菌菌丝生长的抑制作用。[结果]结果表明,采用不同有机溶剂获得的芥菜提取物对西瓜枯萎病均有一定抑制作用,以95%乙醇提取的抑菌效果最好,其提取物的抑菌率可达90%以上。最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)分别为0.5 g/mL和1.0 g/mL,通过毒力方程的测定,它的半抑菌浓度(EC50)为0.2212 g/mL。通过试验对其他10种植物病原菌的抑菌活性表明：芥菜乙醇提取物对水稻纹枯菌、葡萄座腔菌、烟草黑胫菌、辣椒菌核病菌等4种病原菌的抑菌效果较强,其EC50分别为0.0898 g/mL、0.1265 g/mL、0.1679 g/mL、0.1685 g/mL,对葡萄炭疽病菌的抑制效果最弱,EC50为0.5833 g/mL。[结论]芥菜提取物具有很强的抑菌活性,并且具有较广的杀菌谱,值得进一步深入研究。 相似文献