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本研究旨在探索和建立昆明犬胎儿成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性.试验利用剖腹手术法获得发育30 d的昆明犬胎儿12个,性别鉴定结果为7公5母.公、母胎儿体尺和体重分别为:体长1.90 cm±0.14 cm和2.00 cm±0.05 cm,体宽0.90 cm±0.13 cm和0.90 cm±0.15 cm;体重0.68 g±0.17 g和0.66 g±0.06 g,差异均不显著(P>0.05).以昆明犬胎儿组织为材料,采用胶原酶消化法和细胞冷冻保存技术建立了昆明犬胎儿成纤维细胞系,并对所构建的细胞系进行生物学特性研究.结果表明,分离的胎儿成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈S型,倍增时间约为36 h;冻存前和复苏后的存活率分别为96.1%和94.6%;染色体核型分析显示2n=78(XY),并在体外培养多代后仍能保持正常核型.本研究建立的昆明犬胎儿成纤维细胞系可在体外快速贴壁生长、增殖,进行稳定培养,这不仅使昆明犬遗传资源在细胞水平得以保存,且所获成纤维细胞能作为相关研究中所需细胞的来源. 相似文献
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《中国兽医杂志》2017,(6)
本试验采用组织块贴壁法对初生仔猪的耳组织进行原代培养,成功分离出转pGH基因猪与非转基因猪成纤维细胞,并对细胞进行形态学观察,冻存前和复苏后细胞活力检测,生长动力学分析,波形蛋白免疫组化,染色体计数以及微生物污染检测等生物学特性分析。结果表明,原代细胞经过胰蛋白酶消化和差速离心分离培养出成纤维细胞,7组细胞冻存前细胞活力均在为92%以上,冻存3个月后细胞复苏活力仍在89%以上;细胞生长总趋势呈"S"型,即经历了潜伏期、指数生长期和平台期3个阶段;细胞波形蛋白免疫组化在成纤维细胞中呈阳性反应;染色体计数结果表明,染色体数量稳定;成纤维细胞的细菌、真菌、病毒和支原体检测均为阴性。本试验成功建立了转pGH基因猪与非转基因猪成纤维细胞系。 相似文献
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《当代畜牧》2019,(10)
为了研究不同月龄对幼龄吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞增殖速度的影响,探索最佳的供体年龄,笔者采用组织块培养法建立细胞系,观察细胞形态,测定细胞首次传代时间、平均传代时间及复苏后平均传代时间,分析不同月龄对吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞体外培养的影响。试验结果表明,年龄对细胞形态无影响,但幼龄吕梁黑山羊的月龄会影响首次观察到细胞从组织块迁出的时间、细胞首次传代时间、平均传代时间及复苏后平均传代时间(P<0.05);冻存对3月龄供体的细胞增值速度无明显影响(P>0.10)。说明选择3月龄的吕梁黑山羊个体可以通过组织块法建成稳定的成纤维细胞系。本试验使吕梁黑山羊种质资源在细胞水平得到保存,为吕梁黑山羊成纤维细胞系的建立以及开展其种质资源的保存提供资料。 相似文献
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贵德黑裘皮羊耳成纤维细胞系的建立和生物学特性的研究 总被引：4，自引：1，他引：4
以贵德黑裘皮羊耳缘组织为材料，采用组织块贴壁培养法和细胞冷冻技术成功构建了成纤维细胞系，并对培养细胞进行了形态学、生长动力学观察、细胞活力测定、核型分析和微生物检测。结果表明：细胞群体倍增时间（PDT）约为36h，冻存前细胞活力为96．2％，以DMEM／F-12＋20％FBS中添加10％DMSO冻存成纤维细胞，解冻后细胞活力为93．6％，24h后的贴壁率为85％。在传代10次之前，细胞染色体中二倍体（2n=54）占主体，约为82％～90％，细菌、真菌、病毒、支原体检测为阴性。该细胞系的建立，使贵德黑裘皮羊这一国家重要种质资源在细胞水平上保存下来，也为体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。 相似文献
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本研究旨在建立转双基因（pGH/IGF-Ⅰ）猪胎儿成纤维细胞系,保存转双基因猪的成纤维细胞以便于后续细胞水平研究。试验采用胰蛋白酶消化法对猪胎儿躯干组织进行原代培养,通过原代培养、细胞传代、冷冻保存等成功分离出转双基因猪胎儿成纤维细胞,并对细胞进行了形态学观察、冻存前和复苏后细胞活力检测、生长动力学分析、波形蛋白免疫组化及微生物污染检测等生物学特性分析。结果显示,原代细胞经过胰蛋白酶消化和差速离心分离培养出成纤维细胞,冻存前细胞活力为94.3%,冻存3个月后细胞复苏后活力为91.2%;细胞生长总趋势呈“S”型,经历了潜伏期、指数生长期和平台期3个阶段;细胞波形蛋白在成纤维细胞中呈阳性反应;细胞的细菌、真菌、病毒和支原体检测均为阴性。结果表明本试验成功建立了转双基因猪成纤维细胞系。 相似文献
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以郏县红牛耳缘组织为试验材料,采用组织块贴壁法培养,成功建立郏县红牛成纤维细胞系,对其进行细胞形态、细胞活力、生长曲线、染色体核型分析及微生物检测等生物学特性研究。结果显示:细胞形态为典型的成纤维细胞,生长曲线呈S型,细胞倍增时间为39h,冻存前和细胞复苏后活力为98%以上;细胞染色体2n=60,细胞株1-P9、1-P14及2-P9二倍型比例为89.86%、73.82%、78.02%;细菌、真菌、病毒及支原体检查均为阴性。结果表明该细胞系的建立实现了郏县红牛遗传资源在细胞水平上的成功保存。 相似文献
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马头山羊是武陵山脉的地方良种,以个体较大,肉和板皮质量优良而著称,是湖北省重点保护的品种。本研究选取性别不同的1岁马头山羊作为试验对象,利用纤维蛋白酶消化法建立马头山羊耳部组织成纤维细胞系,并分析、比较成纤维细胞不同天数生长形态、生长曲线和冻存前后存活率等生物学特征。结果表明,培养48 h后,可观察到组织块周围有许多典型成纤维细胞形态的细胞环绕生长,细胞倍增时间约为24 h,细胞冻存后的复苏率分别为96.0%和96.5%,细胞生长呈现出典型的“S”形。此细胞系的建立为马头山羊遗传资源保护及其他研究提供理想的试验材料。 相似文献
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为建立天祝白牦牛肌肉、胚胎、肾脏、耳、肝脏等5种组织成纤维细胞体外制备、分离、培养成纤维细胞的方法,采用组织块法和酶消化法制备这5种组织成纤维细胞。结果显示:用组织块法成功制备了耳组织成纤维细胞,组织块直径较小的成活率较高且生长速度较快。用消化法成功制备5种组织成纤维细胞,复苏后较冻存前细胞存活率有所下降,但均保持在90%以上,复苏后细胞的存活率:胚胎>耳>肌肉>肾脏>肝脏。5种组织成纤维细胞在离体培养条件下的生长曲线均呈"S"型,生长速度:肌肉>胚胎>肾脏>耳>肝脏。结果表明:用消化法成功地从天祝白牦牛5种组织中体外制备、分离和培养了成纤维细胞,用组织块法成功地体外制备了耳组织成纤维细胞。 相似文献
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试验旨在建立广灵驴成纤维细胞库,以期在细胞水平上对广灵驴进行保护。本研究以1月龄广灵驴耳缘皮肤组织为试验材料,采用组织块贴壁法进行成纤维细胞培养,建立了广灵驴耳缘皮肤组织成纤维细胞系,并对其相关生物学特性进行了鉴定。结果发现,试验所建立的广灵驴成纤维细胞系大多数细胞呈长梭形,部分细胞呈三角状或星型。在培养过程中,广灵驴原代成纤维细胞在贴壁4 d时开始有细胞从组织边缘游离出来,贴壁14 d后,细胞汇合率达到80%,可以进行第一次传代培养;细胞生长态势良好,生长曲线呈典型的S型曲线;细胞冻存复苏后活率有所下降,但生长状态良好。细胞分裂中期染色体数2n=62,说明成功建立了广灵驴成纤维细胞系。通过本方法建立的广灵驴成纤维细胞系为后续广灵驴的相关研究奠定了基础。 相似文献
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广灵驴成纤维细胞系的建立及其相关生物学特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
试验旨在建立广灵驴成纤维细胞库,以期在细胞水平上对广灵驴进行保护。本研究以1月龄广灵驴耳缘皮肤组织为试验材料,采用组织块贴壁法进行成纤维细胞培养,建立了广灵驴耳缘皮肤组织成纤维细胞系,并对其相关生物学特性进行了鉴定。结果发现,试验所建立的广灵驴成纤维细胞系大多数细胞呈长梭形,部分细胞呈三角状或星型。在培养过程中,广灵驴原代成纤维细胞在贴壁4d时开始有细胞从组织边缘游离出来,贴壁14d后,细胞汇合率达到80%,可以进行第一次传代培养;细胞生长态势良好,生长曲线呈典型的S型曲线;细胞冻存复苏后活率有所下降,但生长状态良好。细胞分裂中期染色体数2n=62,说明成功建立了广灵驴成纤维细胞系。通过本方法建立的广灵驴成纤维细胞系为后续广灵驴的相关研究奠定了基础。 相似文献
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牛胎儿成纤维细胞的分离培养 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了牛胎儿组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特征,并对培养细胞的冷冻保存和复苏进行了观察.采取组织块培养法进行原代培养,在接种第5天到第6天成纤维细胞生长旺盛;用0.25%胰蛋白酶消化,传代培养细胞生长状态良好;用液氮冷冻法保存传代细胞,解冻后持续传代至第12代仍生长良好,第8代细胞冻存前和复苏后的活率分别为97.0% 和94.3%,无显著差异(P>0.05);分离纯化的胎牛成纤维细胞的生长曲线都正常;成功地建立了牛胎儿成纤维细胞系.该细胞可经多次传代培养和冷冻保存. 相似文献
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用胰蛋白酶热消化分离并培养肾组织原代细胞,组织块法培养耳缘组织原代细胞,并通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞并用液氮保存,细胞复苏后进行了活力、形态、生长特性、微生物污染和染色体等检查。结果发现,滩羊肾和耳缘细胞呈成纤维形,平均复苏活力94.5%和97.7%,生长均良好,生长曲线均呈"S",最大增殖浓度和倍增时间分别为2.8×105/mL、25.5 h和3.2×105/mL、24.2 h,保存的细胞经细菌、真菌、病毒和支原体检查为阴性,染色体为2n=54,二倍体占主体。本研究,滩羊肾和耳缘组织细胞成功分离培养并保存,使滩羊这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。 相似文献
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本试验对1头黄占鹿的耳缘皮肤组织采用0.1%胶原酶(Ⅰ型)消化组织块法进行原代培养,反复传代纯化,获得了成纤维细胞,进行了生物学特性观察,并对各代细胞进行了常规冷冻保存。利用Photoshop软件对F12代细胞染色体进行了核型分析,结果表明该黄占鹿的染色体数目为68,常染色体中1号和7号为M染色体,其余的均为A常染色体;X染色体是最大的A染色体,Y染色体是最小的M染色体;该黄占鹿的核型式为4(M)+62(A),XY(A,M);对部分冷冻细胞进行了解冻培养,解冻存活率和贴壁率分别为61.04%、38.85%。 相似文献
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成年黇鹿耳皮肤成纤维细胞的分离与培养 总被引：2，自引：0，他引：2
本试验对1头黇鹿的耳缘皮肤组织采用0.1%胶原酶（Ⅰ型）消化组织块法进行原代培养,反复传代纯化,获得了成纤维细胞,进行了生物学特性观察,并对各代细胞进行了常规冷冻保存.利用Photoshop软件对F12代细胞染色体进行了核型分析,结果表明该黇鹿的染色体数目为68,常染色体中1号和7号为M染色体,其余的均为A常染色体;X染色体是最大的A染色体,Y染色体是最小的M染色体;该黇鹿的核型式为4（M）＋62（A）,XY（A,M）;对部分冷冻细胞进行了解冻培养,解冻存活率和贴壁率分别为61.04%、38.85%. 相似文献
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犬皮肤成纤维细胞是研究创伤愈合的重要试验模型,其培养方法还不甚成熟。试验旨在通过参考已有的皮肤成纤维细胞培养方式,经过优化、改进,建立高效稳定的犬真皮成纤维细胞原代培养方法。结果表明采用0.2%Ⅱ型胶原酶一步消化14 h方法最合适犬皮肤成纤维细胞的培养,原代细胞培养48 h后即可贴壁,5 d即可基本铺满培养皿底,经消化后传代细胞基本可做到纯化,细胞特异性标记染色显示三代传代细胞表现为纤维连接蛋白及波形蛋白阳性,角蛋白阴性,细胞存活率95%,细胞培养效率100%。冻存细胞复苏后生长曲线无明显变化。该方法可用于相关试验的研究。 相似文献
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试验以金华猪耳缘皮肤组织为材料,采用组织块贴壁法进行耳缘组织分离、培养、传代,并进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制等生物学特性研究。结果表明:金华猪耳缘组织成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后存活率分别为95.6%和93.8%;生长曲线呈"s"型。通过试验建立了稳定的金华猪耳缘组织成纤维细胞培养方法,说明组织块贴壁方法是获得成纤维细胞的简单有效方法,获得的细胞可在体外至少传代10代以上,能为体细胞克隆、转基因和异种器官移植等相关研究提供核细胞来源。 相似文献