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正1试剂配制缓冲溶液:烧杯中依次加入试剂、蒸馏水(500毫升),之后将烧杯置于室温保存;底物:向标有"底物"的试剂瓶中加3.1毫升蒸馏水溶解,混匀备用,为避免试剂瓶温度过低,应降低放入0～5℃的冰箱冷藏;酶试剂:处于溶液状态的酶试剂应 相似文献
2.
波尔山羊胚胎冷冻和移植试验 总被引：1，自引：0，他引：1
用含1．5M乙二醇,0．1M蔗糖、20％NCS(V／V)的PBS液,或含1．5M乙二醇,20％NCS的PBS为冷冻保护液,将42枚A级胚胎(致密桑葚胚16枚,早期囊胚26枚)一并移入冷冻保护液,并进行快速冷冻,在降温至-36℃时将胚胎投入液氮保存。解冻时,胚胎细管先在室温(20～22℃)空气中停留15s后进入水浴快速解冻,解冻后一步除去保护剂,移入含20％NCS的PBS液中保存,手术移植入受体子宫角内。结果表明,解冻后形态质量完好的A级冻胚达88,1％(37／42),移植受体妊娠率达42,9％,说明本试验采用的胚胎冷冻-解冻程序,能有效地进行波尔山羊致密桑葚胚和囊胚的冷冻保存。 相似文献
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解冻温度对大额牛(Bos frontalis)精子活率及形态的影响 总被引：2，自引：1，他引：1
分别用32、35、38、41和44 ℃水浴解冻大额牛细管冻精,解冻后在常温(平均温度18.06±1.50 ℃,相对湿度46.64±4.52 %)下保存40 h,分别在0、6、12、18、24、30、36、38、39和40 h取样在显微镜下观察记录精子活率和活力;并在解冻后0、6、12、18和24 h用姬姆萨染色,在显微镜下观察记录精子形态,统计分析5个时段的精子畸形率.研究结果:①35 ℃解冻的精子复苏率为68.80 %,极显著高于44 ℃解冻的54.2 %(P<0.01),但与其它3个解冻温度比较差异不显著(P>0.05).②以38～44 ℃解冻的精子存活时间在38～39 h之间,以32 ℃解冻的存活时间最短,仅为36 h.④解冻后0 h的精子活率在42.50 %～50.00 %之间,不同解冻温度间差异不显著(P>0.05);保存6、12和18 h时,分别以35、38和41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后,各解冻温度间差异不显著P>0.05).④解冻后0 h的精子活力以35 ℃极显著高于44 ℃(P<0.01);保存6 h以32～41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存18 h,以32和41 ℃高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后各解冻温度间差异不显著(P>0.05).⑤用41和44 ℃解冻的总精子畸形率极显著高于38 ℃(P<0.01),显著高于35 ℃(P<0.05),32、35和38 ℃间及32、41和44 ℃间差异不显著(P>0.05),用35和38 ℃解冻对精子形态损伤较小.研究表明:解冻温度越高大额牛冻精的精子活率和活力降低速度越快,精子畸形率也高,且解冻温度对精子头部和尾部形态的影响最大;大额牛细管冻精宜用38±3 ℃水浴10s解冻,解冻后在18 ℃以下常温下保存6h对其精子活力等影响不大. 相似文献
4.
为探讨0.25 mL奶牛细管冻精解冻后的最佳保存环境和适宜的输精时段,本试验对奶牛细管冻精40℃下20 s解冻后在0℃～4℃,14℃～16℃,25℃～27℃下分别保存2,4,6,8,10h的活力进行了测定.结果表明:在本次实验中,奶牛细管冻精解冻后在0℃～4 ℃和14℃～ 16℃保存到10h精子活力0.434±0.0167和0.423±0.0196与初解冻精子活力(0.441±0.030)差异不显著(P＞0.05);在25℃～27℃随保存时间延长精子活力呈下降趋势,保存6h精子活力和初解冻相比差异显著(P＜0.05),保存8,10h差异极显著(P＜0.01).从而得出,奶牛细管冻精解冻后在0℃～4℃和14℃～16℃保存10h以内,精子活力仍然维持在一个较高水平,符合输精要求,在此温度和时间范围内进行长距离携带,对精液质量影响小,可以达到预期的输精效果;环境温度在25℃左右时,冻精解冻后宜于6h以内进行输精. 相似文献
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1 牛冷冻精液的保存1 1 稀释液的配方12 %的蔗糖液 75ml、甘油 5ml、卵黄液 2 0ml。1 2 稀释方法将经过检查合格的精液 (活力 0 6以上 ,精子密度中等 )按 1∶2～ 5倍比例进行稀释 ,其稀释原则应保证每个颗粒精液中所含精子数不少于 30 0 0～ 4 0 0 0万个 ,解冻后呈直线前进 相似文献
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三、牛冷冻精液解冻与镜检注意事项 1.细管精液解冻首先将水浴 锅内水温加热到370℃～39℃,然后用镊子取1支冷冻后的细管精液迅速浸泡入37℃～39℃温水中并晃动,待溶解后取出,用卫生纸或纱布擦掉细管上的水珠,再用细管剪剪去超声波封口端,挤2小滴精液于载玻片上,盖上盖玻片进行冻后活力检测. 相似文献
7.
《福建农林大学学报(自然科学版)》1999,28(2):1
中华蜜蜂精液在液氮(－196 ℃)中贮存121
d,精液与含有8％二甲亚砜的三羟基氨基甲烷缓冲稀释液以1∶1.5混合,不用平衡,在广口保温瓶中距液氮面2
cm或5 cm处预冻,在35～39
℃水浴中解冻,可产生较好的解冻后活力比率(超过60％).当室温高于20
℃时(4月份),样本必须于13 ℃下平衡0.5 h左右,其解冻后活力比率可达30％.春季采集并冷冻的样本,其解冻后活力不如冬季采集并冷冻的.用在液氮中贮存了1～121
d的精液分别以4～5 μL的剂量给24只处女王人工授精,4只开产但首先产的不是受精卵.解冻后的精液能够于13
℃下保存46 h.磺胺不能用于精子冷冻. 相似文献
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试验结果表明 :丝瓜只能短期冷藏 7d左右 ,冷藏适温 1 2～ 1 4℃ ,1 1℃以下会出现冷害。贮藏病害为瓜类疫病。冷藏 ( 1 2～ 1 4℃ ) 百菌清处理可抑制病害发生。丝瓜速冻是丝瓜加工的一种可行方法 ,试验结果显示 :用 0 .1 %的 VC浸 2 0～ 30 min,0 .1 %～ 0 .2 %Na2 SO390～ 1 0 0℃烫漂液 90～ 1 0 0℃水烫漂 ,0 .5%～ 0 .8%的柠檬酸液浸 2 0～ 30 min,0 .2 %Na2 SO3浸 1 5～ 30 min,0 .2 %Na2 SO3 0 .2 %的 Ca Cl2 浸 5～ 30 min,90～ 1 0 0℃水烫 2 0 s的护色效果均较好。速冻丝瓜解冻后组织略软 ,口感同新鲜丝瓜 相似文献
9.
将 5头荷斯坦种公牛细管冻精在不同温度、不同时间下进行解冻 ,对解冻后的精液品质进行检测。结果表明 :解冻后顶体正常率、精子活率随解冻温度升高而升高 ,而畸形率随解冻温度升高而降低 (P<0 .0 1) ;高温(37℃ ,75℃ )下随着解冻时间延长 ,活率增高 (P<0 .0 5 ) ;低温 (5℃ )、室温 (15℃ )下解冻 ,活率与解冻时间长短没有明显关系 (P>0 .0 5 ) ;精子顶体正常率、畸形率、存活时间与解冻时间无显著关系。在实践中建议使用 75℃ 2～6 s解冻。 相似文献
10.
筛选比较了不同保存液、保护剂、降温方式、解冻方式对缺帘鱼精液超低温保存活力的影响,初步解释了缺帘鱼精子经超低温短期保存后活力明显较鲜精低的原因.结果显示:Ringer's液作为保存液,16%二甲亚砜作为保护剂,选取五步法超低温冷冻保存精子[精子缓慢降温至-150℃→液氮面上3 cm(约-170℃),停留4 min→液氮面(约-190℃),停留1 min→液氮];40℃水浴解冻取得最好的冻后活力,解冻后精子活力为(35.2±4.5)%. 相似文献
11.
柿品种'禅寺丸'花粉超低温保存研究 总被引：11，自引：2，他引：9
对柿品种‘禅寺丸’(Diospyros kaki Thunb．CV．Zenjimaru)花粉进行了干燥脱水法(Dehydration)和玻璃化法(Vitrification)液氮超低温保存研究,结果表明：0℃下硅胶干燥8h或(20士1)℃下玻璃化液PVS2处理40～60rnin后直接投入液氮保存,40℃解冻70s后,相对存活率(TTC检测)和萌发率都在90％以上,且活力与保存时间长短无关。该结果为柿花粉的长期保存提供了技术支持。 相似文献
12.
天然果蔬保鲜剂的研究与应用 (二 ) 总被引：2，自引：0，他引：2
高海生! 《农业工程技术:农产品加工》2000,(12)
二、中草药复合半透膜保鲜剂 据实验,用百部、虎杖、良姜、黄连素等中草药进行超临界提取,提取物再配以淀粉、魔芋、卵磷脂等就可以制成中草药复合半透膜果蔬保鲜剂,其组成如下： 配方一 (单位：克 /升 )淀粉 0 5～ 2 0、良姜 0 5～ 1 0、百部 0 5～ 1 0、虎杖 0 5～ 1 0、魔芋 0 5～ 1 5、黄连素 0 5～ 1 0、卵磷脂 0 1～ 2 0.苹果采收后经上述保鲜剂处理可保存 6个月基本无损耗,番茄、茄子、黄瓜经处理后 10℃～ 15℃温度下可保存 2个月. 配方二 花椒 50克、桂皮 50克、丁香 50克、氧化淀粉 300毫升.氧化… 相似文献
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三、细管冻精解冻方法 解冻时首先把水浴锅(保温杯)内的水温调至37℃～40℃,取1支细管冻精迅速泡人温水中并且轻微晃动,待溶解后立即取出,用纱布或消毒纸擦干细管上水珠,用细管剪剪掉机器封口端(注意:剪口要正,左面要平整,剪口不能偏,否则输精时会发生精液倒流而影响输精效果),装入输精枪内,然后在恒温的显微镜下检查精子的活力,取一小滴精液放在载玻片上再压上盖玻片,在显微镜上检查精子活力,解冻后的精子活力必须在0.35以上才能使用.用消毒的纱布或毛巾包好,在1小时之内给母牛输精. 相似文献
14.
将豆类丝核菌菌株 7-1、7-3接种于改良 Czapek′s培养基 ,置 2 5～ 2 7℃培养箱培养 1 4d。收集菌丝体 ,自然干燥后乙醇索氏提取 ,回收乙醇至糖浆状 ,H2 O∶ CH2 Cl2 (3∶ 1 ,v/v)萃取 ,水层调 p H1 0后 ,再用 H2 O∶CH2 Cl2 (3∶ 1 ,v/v)萃取 ,水层调 p H7,浓缩后上 73 2型强酸性阳离子交换树脂 ,用 1 mol/LNH4 OH洗脱 ,收集氨洗液 ,调 p H7,浓缩后冻干 ,得到一种浅黄色粉末。取苦马豆素标准品 1 0 0 μg及浅黄色粉末提取物 1 0mg,分别用 1 ml吡啶溶解 ,取 0 .1 ml加 BSTFA0 .1 ml,5 0℃水浴 3 0 min。取反应液 1 μl,直接进样作 GC。结果表明 ,在相同的气相色谱条件下 ,在相同出峰时间 (1 .2～ 8min)内 ,标准品的峰形与总生物碱的峰形完全一致 ,可以判定生物碱中含有苦马豆素。根据计算得出菌株 7-1、7-3生物碱中苦马豆素含量为 5 .90 3 mg/g和 7.0 0 6mg/g。 相似文献
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贵州主栽樱桃品种的花粉量及其低温保存效果 总被引：1，自引：0，他引：1
《西南农业学报》2018,(10)
【目的】为比较贵州主栽樱桃品种花粉量及其花粉的保存方法,以期为杂交育种和授粉树的选择提供参考。【方法】以贵州主栽的2个中国樱桃及4个甜樱桃品种为材料,用纤维素酶解法测定其花粉量,花粉离体培养法测定比较了不同发育时期、干燥时间、保存温度及预冻解冻方式对花粉萌发率的影响。【结果】中国樱桃单花花粉量显著低于甜樱桃,且中国樱桃大花蕾期的花粉活力最高,随着保存时间的延长,花粉萌发率逐渐降低。采后1周内未经干燥的花粉,在4℃保存效果最佳,萌发率达50.98%,而-196℃保存花粉萌发率最低(27.11%),其原因可能是花粉含水量较高导致水分结晶而引起花粉结构破坏;长期保存以25℃干燥30 min后,保存在-196℃下效果最佳,保存16周后萌发率仍达11.14%;未经干燥的花粉,在-80℃保存后室温解冻30min效果最佳,萌发率达17.01%。【结论】人工授粉时应采集大花蕾期花粉,如需在采后1周内授粉,可将花粉保存于4℃;长期保存则应经25℃干燥30 min后保存于-196℃,室温解冻30 min,可达最佳效果。 相似文献
16.
玻璃化法超低温保存匍匐翦股颖胚性愈伤组织及其植株再生 总被引：2，自引：0，他引：2
采用玻璃化法对匍匐翦股颖愈伤组织进行超低温保存条件及植株再生进行初步研究.结果表明:将继代2次的愈伤组织接种到预培养基上,4℃低温预培养5 d.预培养后的愈伤组织在常温下用装载液过渡10 min,再于0℃下用玻璃化溶液PVS2处理50 min后,加入新鲜的PVS2迅速投入液氮中保存1 h以上,取出后在30℃水浴中解冻,用MS+1.0 mol.L-1蔗糖溶液洗涤3次,每次10 min,细胞存活率可达85.6%,接种在恢复培养基上培养,胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生. 相似文献
17.
刺桫椤DNA的简便快速提取方法 总被引：8，自引：0，他引：8
采用 SDS高盐提取介质简便快速提取刺桫椤 ( Alsophila spinulosa)叶片 DNA,整个提取过程可在 1 0 0 min内完成 ,且对鲜叶或用硅胶快速干燥的干叶均适用 .提取的 DNA相对分子量为48kb,OD2 60 /OD2 80 =1 .84± 0 .0 3;DNA 得率分别为 :60 0～ 1 2 0 0 μg/( g·鲜叶 ) ,35 0～ 5 5 0 μg/( g·干叶 ) ;提取的 DNA无需经 RNase消化等后处理 ,即可用于限制性内切酶酶切和 RAPD反应 相似文献
18.
本文初步确定了麦麸中提取植物酯酶的工艺、酶促反应的最佳检测波长和酶促反应最适条件。酶活测定采用分光光度法,波长确定为533纳米,酶活力用单位时间酶促反应速率表示。酶促反应的最佳条件为:酶液保存温度0～5℃;反应温度40℃,保温时间15分钟,pH7.5,酶量30μL,8毫克/毫升固兰B盐0.5毫升,3毫克/毫升底物(α-乙酸蔡酯)200μL。同时探讨了从麦麸中提取的植物酯酶用于快速检测蔬菜中农药残留的方法。 相似文献
19.
柿休眠芽茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生 总被引：15，自引：2，他引：15
对柿 (DiospyroskakiThunb .)休眠芽茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究 ,结果表明 ,1.5～2 .0mm茎尖在含有 0 .3、0 .5和 0 .7mol·L-1蔗糖的改良MS培养基 (KNO3 和NH4NO3 减半 )上预培养各 1d ,室温(2 0℃ )下装载液 (2mol·L-1甘油 ,0 .4mol·L-1蔗糖 )停留 2 0min ,0℃下玻璃化液 (PVS2 或PVS3 )处理 30～ 4 0min ,投入液氮保存 1d后 ,4 0℃水浴化冻 1min ,含蔗糖 1.2mol·L-1的改良MS培养基洗涤 2 0min ,接种于含 0 .2mg·L-1CPPU、1mg·L-1BA、0 .0 5mg·L-1IAA、5 0 0mg·L-1可溶性PVP、30g·L-1蔗糖和 7g·L-1琼脂的改良MS培养基 (再生培养基 )表面的滤纸上 ,暗处理 1d后转移到新鲜的上述再生培养基中 ,暗培养 1周后转到正常光下 ,成活率高达 70 .2 % ,再生植株生长和分化正常。本研究结果为柿种质的长期保存提供了新途径。 相似文献
20.
为明确三七染色体的数目和倍性,采用多倍体三七籽条根尖进行染色体制片技术研究。结果表明,用8-羟基喹啉预处理根尖6 h(更换试液2 h/次),清洗,然后在水中延展10 min,用卡诺固定液Ⅰ固定3～24 h,换入70%酒精保存,水洗后加1 mol/L HCl于58～60℃水浴锅中水解10 min,倒去HCl,置于45%乙酸中浸泡2 min,用Schiff试剂染色40 min左右,2.5%纤维素酶+1.25%果胶酶混合酶液酶解37 min,洗涤酶液,固定,制片可得到较好的染色体制片效果,能清楚看到加倍的染色体。 相似文献