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1.
为探讨氟化钠对小鼠成骨细胞中核因子-kB 受体活化因子配体 (RANKL)和骨保护素(OPG)mRNA 表达比率的影响,选取新生小鼠颅盖骨,用胰蛋白酶-胶原酶消化法分离培养成骨细胞.取其第3代成骨细胞,在实验组培养液中加入不同浓度的氟化钠(10-7、10-6和10-5mol/L),并分别培养24、48、96和144h,从细胞板贴壁细胞中提取总RNA,应用荧光定量 RT-PCR 方法检测细胞中 RANKL 与 OPG mRNA 表达比率的变化.结果显示,氟化钠增加了RANKL/OPG mRNA 的表达比率,且呈明显的时间剂量效应关系.对照组和实验组在培养 48 h时,RANKL 与 OPGmRNA 的表达比率显著增加(P相似文献
2.
在大鼠成骨细胞体外培养过程中添加不同浓度的镉,利用xCELLigence细胞实时分析系统观察细胞指数、蛋白免疫印迹杂交检测核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)蛋白表达,研究镉对成骨细胞毒性的影响。结果表明:镉暴露可使成骨细胞指数降低,0.5μmol·L-1镉对细胞增殖和存活具有抑制作用,呈剂量-效应和时间-效应关系;随着镉染毒剂量的增加,RANKL蛋白表达量降低(P0.01);1.0μmol·L-1镉暴露组OPG蛋白表达量明显增加(P0.05),镉浓度增大则导致OPG蛋白表达量降低(P0.01或P0.05);OPG/RANKL比值升高(P0.01)。证明镉暴露通过RANKL/RANK/OPG系统调控骨代谢,效应可能与剂量有关。 相似文献
3.
杜仲总黄酮对大鼠成骨细胞护骨素表达的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]研究杜仲总黄酮对新生大鼠颅盖骨体外培养成骨细胞护骨素的mRNA及蛋白表达的影响。[方法]分别加入浓度为10、100、200μg/ml的杜仲黄酮到SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中,用Realtime-PCR法检测杜仲总黄酮对护骨素的mRNA表达的影响;采用细胞免疫荧光技术检测杜仲总黄酮对护骨素蛋白表达的影响。[结果]与对照组比较,杜仲总黄酮能明显促进成骨细胞护骨素的mRNA和蛋白质的表达。[结论]杜仲总黄酮成分能直接在RNA和蛋白质水平促进体外成骨细胞中护骨素的表达。 相似文献
4.
目的：探讨IL-6RmRNA特异反义寡核苷酸(ASON)在体外对骨吸收的影响及意义。方法：采用器官培养法培养新生的小鼠颅盖骨，并分别用ASON、无义寡核苷酸(NSO)、IL-6或ASON与IL-6联合处理颅盖骨，未加药组为对照。培养一定时间后，测定培养上清液的钙含量，将实验组钙含量与对照组钙含量比值作骨吸收指数。结果：作用48h后，不同剂量的ASON均可轻度降低骨吸收指数，但无剂量依赖关系，ASON(5／μmol／L)对正常培养的颅盖骨的骨吸收的抑制率为8．6％；用IL-6培养颅盖骨使骨吸收指数呈剂量依赖关系升高，ASON(5．0／μmol／L)可能明显抑制由IL-6(40μg／L)引起的高骨吸收指数，其抑制率为58．0％；NSO对骨吸收指数无影响。ASON(5．0／μmol／L)分别作用12、24、48h的骨吸收指数则随时间延长而降低。结论：ASON阻断IL-6R表达后明显抑制IL-6刺激所致的新生小鼠颅盖骨骨吸收，而对正常培养的颅盖骨骨吸收抑制作用较弱。 相似文献
5.
目的 观察人参皂苷（Ginsenoside,GSS）对小鼠成骨细胞增殖活性的影响,并探讨其作用机制。方法 采用MC3T3-E1小鼠成骨细胞系, 加入不同浓度的GSS （3.125~50 μg/mL） 培养后,MTT法检测GSS对成骨细胞增殖的影响,荧光定量RT-PCR法检测不同浓度各组细胞内p21和p27 mRNA的表达水平,并采用Western-blot检测细胞周期相关蛋白表达。结果 与空白对照组相比,3.125~50 μg/mL的GSS在24、48 h时均能够显著促进成骨细胞的增殖(P<0.01或0.05),其作用具有时间依赖性和浓度依赖性。50、25 μg/mL的GSS能够显著抑制p21和p27的mRNA表达(P<0.01),而12.5 μg/mL的GSS对其表达无影响。50、25 μg/mL的GSS抑制了细胞周期抑制蛋白p21及p27表达水平并上调Cyclin D1表达(P<0.01或0.05)。结论 GSS能够通过上调Cyclin D1表达,抑制p21和p27表达,进而促进小鼠成骨细胞增殖. 相似文献
6.
目的探讨阳和汤对裸鼠移植性人乳腺癌骨转移模型的作用及其相关调节因子的影响。方法股骨接种人
乳腺癌细胞建立裸鼠乳腺癌骨转移模型。随机分为阳和汤高、低剂量组、唑来磷酸组、模型组、假手术组,动态观察各组
裸鼠骨转移癌的生长情况, 测量骨转移癌体积, 绘制生长曲线; 给药20 d 后处死动物, 测取瘤质量, 计算抑瘤率;
ELISA 法检测裸鼠血清中相关调节因子PTHrP、RANKL、OPG 含量的变化。结果1.阳和汤高、低剂量组、唑来磷酸组的
骨转移癌灶体积均小于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）;2.阳和汤高、低剂量组、唑来磷酸组PTHrP 和RANKL 含
量明显低于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）,而OPG 含量水平增加,RANKL/OPG 的比率下降,差异有统计学意义
（P＜0.05）。结论1.阳和汤有抗移植性人乳腺癌骨转移作用;2.阳和汤下调PTHrP、RANKL 的含量、增加OPG 的含量,
抑制RANKL/OPG 比率可能是其抑制乳腺癌骨转移的作用机制之一。 相似文献
7.
氟对体外培养成骨细胞骨钙素基因表达的调控 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探讨氟对成骨细胞骨钙素(OCN)基因表达的影响。【方法】应用酶消化法分离初生小鼠头盖骨成骨细胞,取第3代成骨细胞,加入不同浓度（0～10-3mol?L-1）氟化钠,提取细胞总RNA,通过实时荧光定量PCR方法,观察成骨细胞OCN基因表达的变化。【结果】各浓度NaF均能刺激体外培养成骨细胞OCN基因的表达呈剂量依赖关系,当浓度为5×10-4mol?L-1时OCN基因表达量的增加最为明显,约为对照组的30倍。【结论】各浓度的NaF均能在基因水平刺激OCN的表达,OCN在氟中毒所致的骨相损害中起着重要的作用。 相似文献
8.
用不同浓度血小板微颗粒(PMPs,0、25、50 μg·mL-1)分别处理RA-FLS,根据高通量基因芯片分析基因表达谱的改变,应用类风湿关节炎-成维样滑膜细胞(RT-qPCR)、Western blot和ELISA方法检测核因子κB受体活化因子(RANKI)和骨保护素(OPG)的表达;利用Western blot检测相关信号通路抑制剂对PMPs作用下类风湿关节炎-成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和OPG表达的影响.结果 表明:PMPs可上调RA-FLS中RANKL表达,下调OPG表达;抑制NF-κB、CXCR2的活化能拮抗PMPs对RANKL和OPG表达的影响;PMPs上调RA-FLS中Erk的磷酸化水平时,IκB和NF-κB的磷酸化水平也随之上调.说明PMPs可能通过激活CX-CR2/Erk/NF-κB信号通路上调RA-FLS中RANKL、下调OPG,参与类风湿关节炎的骨质破坏与重塑. 相似文献
9.
[目的]观察不同剂量三氧化二砷(As2O3)对体外培养的大鼠成骨细胞增殖、骨形成蛋白-2(BMP-2)基因表达的影响。[方法]不同浓度(10、1、0.1μmol/L)的三氧化二砷作用于体外培养的成骨细胞48和72 h后,观察成骨细胞的形态,采用MTT法检测成骨细胞的增殖,并通过RT-PCR检测成骨细胞BMP-2基因的表达情况。[结果]10μmol/L As2O3组可见部分成骨细胞变圆变小,细胞核固缩、碎裂,细胞膜皱褶、凹陷;1μmol/L As2O3组成骨细胞数目众多和分裂相明显;0.1μmol/L As2O3组成骨细胞间连接紧密。10μmol/LAs2O3组大鼠成骨细胞OD值明显低于对照组,而72 h OD值低于48 h OD值,有显著性差异(P0.01);1μmol/L组As2O3OD值明显高于对照组,而72 h OD值高于48 h OD值,有显著性差异(P0.01);0.1μmol/L As2O2组72 h OD值与48 h OD值无显著差异(P0.05),且OD值与对照组无显著差异(P0.05)。RT-PCR结果表明,10μmol/L组72 h BMP-2基因表达明显低于48 h,且BMP-2的表达明显低于对照组,有显著性差异(P0.01);1μmol/L As2O3组72 h BMP-2基因表达与48 h无显著差异(P0.05),且BMP-2基因表达与对照组(P0.05);0.1μmol/L As2O3组72 h BMP-2基因表达明显高于48 h,且BMP-2的表达明显高于对照组,有显著性差异(P0.01)。[结论]As2O3对体外培养大鼠成骨细胞增殖和BMP-2 mRNA表达具有双向调节作用,并且呈剂量-时间依赖性。 相似文献
10.
骨保护素对体外培养大鼠破骨细胞的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】探讨不同浓度骨保护素（osteoprotegerin,OPG）对破骨细胞（osteoclasts,OC）生成和活化的影响。【方法】通过成骨细胞（osteoblasts,OB）与脾细胞共培养的方法在体外诱导脾细胞转化为OC。采用形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色计数、扫描电镜观察象牙片吸收陷窝方法检测OC的生成和活化。【结果】 随着OPG浓度（5、10、25、50、75 ng•ml-1）的增加,TRAP阳性OC数逐渐减少,各试验组与对照组比较差异均极显著（P＜0.01）;象牙片吸收陷窝的数目和面积也逐渐减少,OPG浓度为50 ng•ml-1、75 ng•ml-1时观测不到吸收陷窝。【结论】OPG通过抑制OC生成和活化,从而抑制OC的骨吸收,OPG浓度达50 ng•ml-1以上可完全阻断OC的活化。 相似文献
11.
目的 探讨铁调素（Hepcidin）在慢性牙周炎性牙槽骨吸收过程中的作用,阐明铁离子及其相关调节蛋白在牙槽骨吸收中的重要生物学意义,以期为探索出有效地防治牙槽骨吸收的方法提供理论基础。方法 检测慢性牙周炎患者龈沟液（GCF）中铁离子、核因子KB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）的表达水平,分析铁离子的含量与RANKL和OPG表达的相关性以及铁离子的含量与牙周炎性牙槽骨吸收的关系。结果 20例慢性牙周炎组受检牙GCF中铁离子、Hepcidin和RANKL的浓度高于健康对照组（P<0.05）,OPG的浓度低于健康对照组（P<0.01）。慢性牙周炎组GCF中RANKL和OPG的浓度与该受检牙4项临床指标：牙周探诊深度（PD）、附着丧失（AL）、菌斑指数（PLI）、龈沟出血指数（SBI）无相关（P>0.05）,铁离子浓度与Hepcidin浓度呈正相关（P<0.01）,与RANKL浓度呈正相关（P<0.05）,与OPG浓度无相关（P>0.05）。结论 慢性牙周炎导致的牙槽骨吸收与局部Hepcidin升高和发生铁过载有关。 相似文献
12.
破骨细胞(Osteoclast,OC)是一种高度分化的多核巨细胞。其形成和活化受RANKL/RANK/OPG和TNFα/IL-1两种机制的调控。1,25-(OH)2-D3作用于成骨细胞(Osteoblast,OB)表面受体,促进核因子κB受体活化子配体(Receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表达,从而刺激OC的生成和活化。而骨保护素(Osteoprote-gerin,OPG)通过与OC表面核因子κB受体活化子(Receptor activator of NF-κB,RANK)竞争性地结合RANKL,阻断RANKL介导的OC分化和骨吸收,从而对调控和维持骨骼正常代谢发挥作用。此外,中、高浓度的钙、磷对OC的生成和活化也具有抑制作用。 相似文献
13.
目的研究小鼠脾Th17细胞分化模型中IL-17F、RORα、Stat3表达。方法提取C57/BL6J小鼠脾淋巴细胞,采用免疫磁珠纯化CD4-＋CD62L-＋T细胞,分为对照组及Th17分化组。对照组用RPMI1640培养;Th17分化组加抗小鼠CD3ε、CD28、IFN-γ、IL-4单抗及IL-6、TGF-β1、IL-23孵育。培养48 h后,采用Real-time PCR检测两组细胞IL-17F、RORα、Stat3 mRNA表达。结果 Th17分化组IL-17F、RORα、Stat3 mRNA表达明显高于对照组（P〈0.01）。结论小鼠脾Th17细胞分化过程中伴有RORα、Stat3 mRNA表达上调。 相似文献
14.
《山西农业科学》2017,(6):940-943
为了探究不同浓度的氟化钠对小鼠MC3T3-E成骨细胞内Ca~(2+),NO浓度以及细胞凋亡的影响,建立细胞梯度染氟模型,获取MTT细胞增殖曲线;通过DAPI和HE染色观察细胞核及细胞形态学变化;运用荧光探针Fluo-3 AM和DAF-FM DA标记染氟成骨细胞,采用流式细胞仪测定成骨细胞内Ca~(2+),NO浓度变化。结果表明,随着氟浓度的增加,细胞形态异常,细胞增殖率降低,成骨细胞内Ca~(2+),NO的浓度增加,高氟长时间作用会使细胞生命活性降低,生理反应减弱或缺失,从而影响Ca~(2+),NO的浓度。试验证明,高氟通过增加细胞内Ca~(2+),NO的浓度抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。 相似文献
15.
目的 从Notch1信号通路探讨姜黄素诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的分子机制。方法 （1）利用流式细胞技术检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60 μmol/L）处理结肠癌SW480株24 h和48 h后的细胞凋亡情况。（2）通过RT-PCR检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60 μmol/L）处理结肠癌SW480细胞株24 h和48 h后,Notch1信号通路中膜受体基因Notch1及下游靶基因Hes-1 mRNA表达情况,观察姜黄素对Notch1信号通路中Notch1及Hes-1基因mRNA表达的影响。结果 （1）姜黄素能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡;（2）姜黄素能一定程度上下调Notch1信号通路中Notch1及Hes-1基因mRNA的表达（P＜0.05）。结论 姜黄素能一定程度上诱导结肠癌SW480细胞株凋亡,这种对结肠癌SW480细胞毒性作用可能与调控Notch1信号通路中膜受体基因Notch1及下游靶基因Hes-1转录有关。 相似文献
16.
研究精氨酸双糖苷（Arginyl-Fructosyl-Glucose,AFG）抑制黑色素瘤B16细胞的增殖及诱导凋亡作用,并初步探讨了其Bcl-2、Caspase-3、Bax信号通路的作用机制。培养黑色素瘤B16细胞,配制1,2.5,5,10,25,50,75,100μmol/L的精氨酸双糖苷作用于黑色素瘤B16细胞,48 h后利用CKK-8法检测精氨酸双糖苷对B16细胞增殖影响;采用LDH检测给药后细胞乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）表达水平;用Hoechst33258荧光染色法观察精氨酸双糖苷对B16细胞凋亡形态的影响;采用RT-PCR和Western Blot法分析精氨酸双糖苷对B16细胞Bcl-2、Caspase-3、Bax mRNA和蛋白表达的影响。结果表明：随着给药浓度的增大和培养时间的增加,精氨酸双糖苷对B16细胞的抑制率增加,48 h后抑制率达到平台期。50,75,100μmol/L浓度的精氨酸双糖苷抑制效果最佳,B16细胞存活率显著降低（P<0.05,P<0.01）,可明显观察到B16细胞凋亡;RT-PCR和Western ... 相似文献
17.
LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
《河北农业大学学报》2017,(5)
为建立LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型,通过分离、培养奶牛蹄真皮细胞,用不同浓度的LPS处理蹄真皮细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,RT-PCR法检测CYP3A4、CYP1A1mRNA的表达,Western blot法检测CYP450蛋白的表达,并通过ELISA法检测细胞上清液中TNF-ɑ、IL-1β的含量,来确定LPS是否对细胞造成损伤。结果表明,随着LPS浓度的升高,对蹄真皮细胞的损伤也随之升高,CYP450蛋白的表达呈升高的趋势,在10μg/mL时表达最明显,10μg/mL LPS处理48h,对CYP3A4、CYP1A1mRNA表达的抑制作用较明显,模型组TNF-ɑ和IL-1β的含量极显著高于对照组(P0.01)。本试验表明,10μg/mL LPS作用48h可建立可靠的蹄真皮细胞炎症模型。 相似文献
18.
《山西农业科学》2017,(4):557-560
试验以原代睾丸支持细胞为对象,通过胶原酶和胰酶的消化分离支持细胞,用HE染色及GATA-4免疫荧光对分离的支持细胞进行鉴定;利用q RT-PCR法检测不同浓度(0,0.1,1,10 mg/L)Na F对支持细胞骨架ARP2,ARPC3和ARPC4处理24 h后mRNA相对表达量,旨在研究氟对雄性生殖功能的影响。结果显示,ARP2在0.1 mg/L Na F组mRNA相对表达量显著降低(P0.05),在10 mg/L Na F组mRNA相对表达量极显著降低(P0.01);ARPC4在10 mg/L Na F组mRNA相对表达量显著降低(P0.05);ARPC3的mRNA表达量没有显著变化。表明氟化钠通过引起支持细胞骨架相关基因相对表达量的下降,影响睾丸支持细胞的结构与功能,进而损伤睾丸的生精功能。 相似文献
19.
从断奶大鼠中获得新鲜的胃粘膜,分离培养胃粘膜上皮细胞,培养30 h后,试验组换为分别含有1×10^-4、1×10^-3、1×10^-2和1×10^-1μmol/L生长素（Ghrelin）的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液。继续培养4 h,收集培养液和细胞,分别测定培养液中胃蛋白酶活性和细胞中H^＋-K^＋-ATPase活性。试验结果表明：1×10^-3μmol/L的Ghrelin可显著提高胃蛋白酶的活性（P〈0.05）,1×10^-4、1×10^-3和1×10^-2μmol/L的Ghrelin显著提高胃黏膜上皮细胞中H^＋-K^＋-ATPase的活性（P〈0.05）。表明Ghrelin体外作用于胃粘膜上皮细胞可刺激胃蛋白酶和胃酸的分泌。 相似文献
20.
【目的】利用虾青素较强的抗氧化特性,通过探讨黏膜屏障重塑对脂多糖（LPS）诱导的牛子宫内膜细胞炎症的影响,为牛子宫内膜细胞炎的预防和治疗提供理论基础。【方法】培养液中添加1 μg·mL -1 LPS,培养子宫内膜细胞6 h,检测培养液中炎症因子TNF-α和IL-6含量,建立细胞的体外炎症模型。在此基础上去掉培养液,重新加入含1×10 -6 mol·L -1 虾青素的新鲜培养液,继续培养细胞24 h。对照组为不添加LPS或AST,LPS组为仅添加LPS,AST组为添加LPS和AST。采用ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6炎症因子分泌量以及细胞SOD和CAT酶活性,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇（ROS）水平,利用免疫荧光染色检测细胞紧密连接蛋白Claudin、CDH1、TJP1的分布情况,利用荧光定量RT-PCR法和Western Blot法分别检测Claudin、CDH1、TJP1基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平。【结果】利用1 μg·mL -1 LPS培养子宫内膜细胞6 h,检测发现培养液中炎症因子IL-6和TNF-α分泌水平显著高于对照组（P小于0.05）,说明LPS诱导子宫内膜细胞产生炎症反应。与对照组相比,细胞内ROS水平显著增加（P小于0.05）,SOD和CAT酶活性都显著降低（P小于0.05）,说明LPS诱导的子宫内膜细胞炎症造成了氧化损伤。加入1×10 -6 mol·L -1 虾青素培养细胞24 h后,发现培养液中IL-6和TNF-α因子的分泌水平显著低于LPS组（P小于0.05）,同时ROS阳性细胞比率显著下降（P小于0.05）,SOD和CAT酶活性都显著升高（P小于0.05）。LPS组与对照组相比,细胞膜处Claudin、CDH1、TJP1蛋白的荧光信号减弱,这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著降低（P小于0.05）。加入1×10 -6 mol·L -1虾青素培养24 h后,与LPS组相比,在细胞边缘和细胞核内可以检测到荧光信号很强的Claudin、CDH1、TJP1蛋白,而且这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著升高（P小于0.05）。【结论】虾青素通过降低子宫内膜细胞因炎症反应产生的氧化损伤,减轻炎症导致的子宫内膜细胞紧密连接结构损伤,对子宫内膜的物理免疫屏障起保护作用,为牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论借鉴意义。 相似文献