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【目的】探讨猪黑素皮质激素受体Ⅰ基因（MC1R）碱基突变与其毛色分离的相关性,为研究猪的毛色遗传分子机制及遗传育种奠定基础。【方法】根据GenBank已公布的猪MC1R基因同源序列（AF326520）设计引物,以70头不同毛色的长白猪×巴马小型猪杂交F2代（长×巴F2代）猪血液总DNA为模板,PCR扩增MC1R基因序列,并利用PCR-SSCP对长×巴F2代杂交猪的MC1R基因进行单核苷酸多态性（SNP）分析。【结果】长×巴F2代杂交猪MC1R基因编码区序列约963 bp,与参考序列（AF326520）的同源性为99.37%,共有6处碱基发生突变,其中两处（284G→A和306T→C）为错义突变,284G→A导致95Val→Met,306T→C导致102Leu→Pro;其余4处均为同义突变,分别为6C→T、51G→A、364T→C和730G→A。 PCR-SSCP检测结果显示,长×巴F2代杂交猪的MC1R基因均未表现出多态性。【结论】长×巴F2杂交猪的MC1R基因存在碱基突变,其基因型为ED1,但在不同毛色的长×巴F2代杂交猪群体中并未发现MC1R基因呈多态性,即猪毛色多样性不能简单以MC1R基因的多态性进行分析。 相似文献
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根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因序列，结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性，人工合成引物，利用PCR重叠延伸法，使编码序列区的部分核苷酸突变，采用嵌套PCR，迅速克隆到目的基因片段R -AFP,连接到pGEM-T easy载体上，转化大肠杆菌XL1菌株，筛选到阳性克隆。序列分析结果表明，PCR产物全长240bp，有一个阅读框，编码29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白，与突变前的Rs-AFP2基因相比，在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基（TTG→TTA)，第5号氨基酸Gln相差一个碱基（CAG→CAA），第6号稀有密切Arg相差两个碱基（CAG→CGA），但二者编码产生相同。重新合成引物，将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因分别克隆到pET-21b( )质粒载体上，导入大肠杆菌BL21菌株。Tricine-SDS-PAGE电泳显示工程菌中存在6KD左右的目的蛋白带；软件分析显示，突变后pETAFPm的表达产物约为突变前pETAFPo表达产物的2倍；抑菌结果表明，pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比，已有效的提高表达量。 相似文献
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耐氟喹诺酮类鸡源性沙门氏菌DNA旋转酶gyrA基因序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
取临床分离的对5种氟喹诺酮类药物(环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、单诺沙星和沙拉沙星)均耐药的9株鸡源性沙门氏菌耐药株,提取其染色体DNA。设计引物gyrAF和gyrAR扩增其DNA旋转酶gyrA基因的氟喹诺酮类耐药决定区(QRDR),对PCR扩增产物进行测序及序列分析。与质控菌株相比,9株临床分离耐药株中只有菌株38和60的gyrA基因发生单碱基突变,菌株38的gyrA基因第371位碱基发生C→T突变,菌株60的gyrA基因第350位碱基发生A→C突变,两处突变均位于QRDR内,其余菌株的核苷酸未发生任何突变。菌株38的碱基突变导致gyrA基因第121位氨基酸发生R→C取代,即Arg→Cys;菌株60的碱基突变导致gyrA基因第114位氨基酸发生M→L取代,即Met→Leu。上述结果提示,gyrA基因QRDR突变并非沙门氏菌耐药性产生的主要原因。 相似文献
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采用混合基因组DNA池PCR扩增和测序技术,对小梅山猪、枫泾猪、大白猪pgr基因的外显子区域进行扫描,共发现1个单核甘酸多态性位点(SNP)。外显子1序列中1 319 bp处发生C→T的碱基突变,即C1319T,未引起氨基酸的变化,属于同义突变;针对突变位点,建立错配PCR–限制性长度多态性(RFLP)方法进行检测,发现3种猪的pgr基因可以分为AA、BB、AB 3个基因型,小梅山和枫泾猪有AA、AB 2种基因型,大白猪中有BB、AB 2种基因型。 相似文献
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猪在农业和医学领域均具有重要应用价值,利用基因修饰技术能够快速提高猪的经济性状和培育
人类疾病动物模型。CRISPR/Cas9 基因编辑技术具有操作简单、高效和低成本的优势,在猪基因修饰领域具有重
要应用。但 CRISPR/Cas9 易引发基因组结构不稳、大范围染色体重排和基因脱靶等问题,因而具有潜在的生物
安全风险。近年基于 CRISPR/Cas9 开发的碱基编辑技术可以实现单个碱基定向转换,不会导致 DNA 双链断裂,
理论上不会引发插入 / 缺失（Indels）,对基因编辑更精准、更安全。随着碱基编辑工具的不断开发和改良,其
不仅能产生 C → T（A → G）突变,还能产生 C、A 两种碱基的同时突变以及 C → G 突变,增加了应用范围;改
良的碱基编辑工具在保持编辑效率的同时能够降低甚至消除旁侧突变、非 C → T（A → G）突变以及 Indels,使
得碱基编辑技术在猪遗传修饰上具有更加重要的潜在应用价值。综述了不同的碱基编辑系统原理、碱基编辑技
术在基因修饰猪模型构建和猪遗传改良中的应用,以及碱基编辑系统在猪成纤维细胞中的编辑效率和脱靶情况,
以期为开展猪碱基编辑应用实践提供参考。 相似文献
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用等位基因特异PCR检测普通小麦（Triticum aestivum L.）的单核苷酸多态性 总被引：8，自引：0，他引：8
【目的】以2份六倍体小麦Opata85和W7984及其重组近交系（RIL）的111个株系和3份小麦二倍体野生近缘种为材料，研究用等位基因特异PCR检测普通小麦中单核苷酸多态性的方法。【方法】利用直接测序的方法检测2份六倍体小麦和3份小麦二倍体野生近缘种TaDREB1基因的DNA序列，在B基因组上发现了2个SNPs。以其为3?端，设计等位基因特异引物及其互补引物，对SNP进行分型，同时研究了特异引物3?端碱基错配对等位基因特异PCR的影响，优化了PCR反应体系。【结果】等位基因特异引物3?端不同位置的碱基错配及不同类型的碱基错配对PCR结果影响较大；在等位基因特异PCR中，Mg2+、dNTP及Taq DNA聚合酶的用量均大于普通PCR。【结论】只要在等位基因特异引物3?端加上合适的错配碱基，并且优化其PCR反应体系，用等位基因特异PCR方法检测六倍体小麦中的单核苷酸多态性是可行的。 相似文献
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采用易错PCR方法对枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipaseA进行定向进化,并首次采用对硝基苯棕榈酸酯（pNPP）法进行96孔板高通量筛选。结果表明：第一轮易错PCR没有产生随机突变,第二轮易错PCR反应在Mn2+浓度为0.2 mmol·L-1时,产生了突变菌株。对该条件下构建的文库中124株突变菌株进行pNPP高通量筛选,突变株4B2的吸光度值A405为1.395,与未突变株PET32a lipaseA（A405=0.448）差异显著。测序结果表明,突变株4B2脂肪酶基因lipaseA有5个核苷酸位点发生了突变,其中3个是同义突变,2个是错义突变,分别是82位的天冬酰胺（AAU）突变为酪氨酸（UAU）,143位的赖氨酸（AAG）突变为苏氨酸（ACG）。突变株4B2发酵上清液转化生物柴油的转酯效率较对照菌PET 32a lipaseA有明显提高,前者为79.5%,后者为49.72%。本研究为枯草芽孢杆菌脂肪酶lipaseA转酯活性位点的探索奠定了基础。 相似文献
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【目的】探讨猪黑素皮质激素受体Ⅰ基因(MC1R)碱基突变与其毛色分离的相关性,为研究猪的毛色遗传分子机制及遗传育种奠定基础。【方法】根据Gen Bank已公布的猪MC1R基因同源序列(AF326520)设计引物,以70头不同毛色的长白猪×巴马小型猪杂交F2代(长×巴F2代)猪血液总DNA为模板,PCR扩增MC1R基因序列,并利用PCR-SSCP对长×巴F2代杂交猪的MC1R基因进行单核苷酸多态性(SNP)分析。【结果】长×巴F2代杂交猪MC1R基因编码区序列约963 bp,与参考序列(AF326520)的同源性为99.37%,共有6处碱基发生突变,其中两处(284G→A和306T→C)为错义突变,284G→A导致95Val→Met,306T→C导致102Leu→Pro;其余4处均为同义突变,分别为6C→T、51G→A、364T→C和730G→A。PCR-SSCP检测结果显示,长×巴F2代杂交猪的MC1R基因均未表现出多态性。【结论】长×巴F2杂交猪的MC1R基因存在碱基突变,其基因型为ED1,但在不同毛色的长×巴F2代杂交猪群体中并未发现MC1R基因呈多态性,即猪毛色多样性不能简单以MC1R基因的多态性进行分析。 相似文献
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为获得稳定的聚合酶链式反应（PCR）产物,采用正交设计L25（56）对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应（EST-SSR PCR）反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子（Mg2+）浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平。优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mgL－1DNA模板,0.500 molL－1引物,1.250 mmolL－1 Mg2+,0.250 mmolL－1 dNTPs,0.072 5 16.67 mkatL－1 rTaq酶。通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度。对优化出的EST-SSR PCR反应体系进行稳定性检测,结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带。图6表3参15 相似文献
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研究股权结构有助于了解我国上市公司的资本来源状况、收益权和支配权。文中借助分析指标，从股权集中度、股权集中程度、最大股东优势指数及各种股本比例等方面，对农业上市公司的股权结构进行了分析，明确了农业上市公司股权结构的现状与问题，并提出了解决问题的对策。 相似文献
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以2001~2012年沪深两市A股制造业上市公司为研究样本，借鉴Wurgler的资源配置效率估算模型，从盈余管理角度探讨了中国现实制度背景下信息透明度对资本配置效率的影响。实证结果表明，无论是在行业层面还是公司层面，信息透明度与资本配置效率均呈显著的正相关关系，其中以修正的DD模型衡量的盈余管理解释力度最强。进一步采用深交所信息披露考评结果作为稳健性检验的替代指标，结论依然不变。可见，改善上市公司盈余质量，提高信息透明度，是正确引导证券市场资本有效配置的关键。 相似文献
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以2007~2008年沪深两市A股上市公司年报作为研究基础,运用描述性统计和两阶最小二乘法分析了自愿性信息披露对上市公司股票流动性的影响。验证了自愿性信息披露会促进上市公司股票的流动性,同时发现自愿性披露信息中财务方面信息对上市公司股票流动性的提高作用最大。 相似文献
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赵海林 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2014,(3):130-134
新经济时代，智力资本及其绩效越来越受到广泛关注。从智力资本增值的概念、计量出发，建立绩效和智力资本增值的实证模型，对深交所A股上市公司按行业和板块分类进行实证研究，发现智力资本对不同类型企业多重绩效均产生影响。 相似文献
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以2011—2013年深市、沪市农业上市公司数据为样本,运用OLS回归与固定效应模型相结合的方法,对企业社会责任、广告投入与企业价值的关系进行研究。结果表明:农业企业广告投入对企业社会责任的履行具有积极显著的影响;广告投入在履行农业企业社会责任、提升企业价值方面具有重要作用;农业企业社会责任活动可以提升企业价值,但只有在一定条件下是可行的,较低的广告支出不会因为社会责任的履行提升企业价值;农业企业社会责任不是产品质量的信号。因此,农业企业在提升自身的经营业绩的同时,需要在可承受范围内增加企业广告投入,在披露社会责任活动时积极宣传企业责任,逐渐形成企业声誉,提升企业价值。 相似文献
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基于2002～2008年深交所制造业上市公司的证据,本文以控股股东与上市公司之间的关联交易作为研究对象,结合独立董事所占比例、专业性和薪酬等基本特征,考察了独立董事能否有效发挥其监督职能。研究发现:独立董事的专业性对控股股东与上市公司的关联交易有显著的抑制作用,独立董事薪酬与控股股东与上市公司关联交易的频率显著正相关,独立董事的比例对控股股东与上市公司关联交易没有显著影响。这些结论有助于我们从新的视角去改进我国上市公司独立董事制度以提高其监督制约控股股东的职能。 相似文献
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零息票收益率曲线是利率期限结构理论分析的基础,在金融估价和风险管理中发挥着重要作用。提出基于多项式样条函数构造零息票收益率曲线的过程及改进方法：考虑国债采样日位于付息日之间、年付息次数可变的情形,使分析更具一般性;针对多项式样条函数拟合时回归系数不显著的问题,采取剔除不显著变量的方法进行改进;讨论比较了两种样条值确定方法在我国的适用性,并研究了模型的稳定性。选取上交所国债进行的实证研究表明,在现阶段我国国债样本数据较少、结构不甚合理的情况下,采用剔除不显著变量的三段三次样条函数可以较好地构造我国的零息票收益率曲线。 相似文献
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本文以生产建设兵团13家上市企业2007-2010年财务数据作为样本,依据企业生产经营主要产品特性和市场销售情况把企业分为八类型;通过构建反映企业生产经营和财务等方面抗风险能力的指标体系,实证分析了金融危机时代不同类型上市企业抗风险能力的大小及影响的主要因子。实证结论为:2007-2010年间兵团不同类型企业抗风险能力大小依次为:工程类企业>建材类企业>工业内销型企业>商业服务型企业>农业内外销型企业>工业内外销型>农业内销型企业>农业外销型企业;影响兵团上市企业抗风险能力的主要因子为盈利能力、成长能力和运营能力;并针对实证结论提出后金融危机时代提升抗风险能力的相应对策。 相似文献
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采用1200家中国上市公司金融危机期间2007~2011年的面板数据和随机效应模型，对财务弹性与公司投资行为的关系进行检验，研究发现：不同行业、不同所有权控股、不同板块上市公司的财务弹性及投资行为存在明显差异；财务弹性对投资规模具有较为明显的促进作用，对投资方向的影响作用不明显。 相似文献
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对市场效率问题的研究对于转型时期的中国股票市场具有深远的现实意义。本文以有效市场理论为切入点, 选取上海证券交易市场综合指数每日收盘价为研究对象来分析中国股票市场的效率;并从制度、信息披露和上市公司本身等三个方面分析了我国股票市场效率低下的原因。 相似文献