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18份滇产岩白菜资源的ISSR分析 总被引：2，自引：1，他引：1
为了揭示云南岩白菜资源的遗传多样性,以采自云南各地的18份岩白菜资源为试验材料,采用ISSR分子标记手段对它们进行了遗传多样性研究,结果表明：26个ISSR引物在18份岩白菜资源间共扩增出275条谱带,其中232条为多态带,多态率达84.2%,表明云南岩白菜资源的遗传多样性非常丰富。不同岩白菜资源间的Dice相似系数分布于0.651~0.841,采自同一产地的不同岩白菜资源未能聚合在一起,表明岩白菜种内遗传分化程度较高。 相似文献
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本试验以云南高海拔地区桃种质资源的样本为试验材料,从提取的100余份DNA样品中随机抽取1份,再用初筛的引物UBC-891,用于ISSR体系的优化。根据单因素试验和正交试验设计,本研究发现了最佳ISSR-PCR反应体系。研究结果表明:25μL的ISSR反应体系中,2.5μL 10×PCR buffer(含 Mg~(2+)),1.5 mmol/L Mg~(2+),2.0 U Taq-DNA聚合酶,0.10 mmol/L dNTPs,0.40μmol/L引物,45 ng DNA组合最佳。Taq-DNA聚合酶浓度对反应影响最大。本研究为引物筛选和云南高海拔地区桃种质资源ISSR遗传多样性研究提供了理论基础。 相似文献
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海南龙血树基因组DNA提取方法比较 总被引：2，自引：0，他引：2
摘 要：为选择一种简单、快速、有效的海南龙血树总DNA的提取方法,分别采用CTAB法、SDS法、SDS-CTAB法和改良CTAB法提取海南龙血树嫩叶片的总DNA,用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和ISSR对所提取的总DNA进行检测。结果表明,改良CTAB法提取的DNA A260/A280在1.7-1.9之间,纯度高、杂质少、DNA完整性好。以该方法提取的总DNA为模板进行ISSR扩增,谱带清晰,多态性、稳定性、重复性好。该法提取的总DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究是有效提取海南龙血树基因组的方法。 相似文献
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为了探讨不同检测方法对甜菜ISSR引物扩增效果的影响以及各方法的优缺点,笔者应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳两种检测方法对甜菜ISSR 引物扩增效果进行了检测。利用12个不同的甜菜品种,对10 个ISSR引物进行扩增,分别采用6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、1%的琼脂糖凝胶电泳以及2%的琼脂糖凝胶电泳对ISSR-PCR的扩增产物进行分离。结果表明：6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳无论是检测的总条带数还是多态性条带数均远高于琼脂糖凝胶电泳,且条带清晰,易于识别,而2%的琼脂糖凝胶电泳检测的条带数高于或等于1%的琼脂糖凝胶电泳,且条带更易于识别,因此,对于利用ISSR 引物进行QTL定位、指纹图谱构建以及遗传多样性分析时,推荐使用6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,而对于种子纯度鉴定以及需要对ISSR扩增产物进行测序,则推荐使用2%的琼脂糖凝胶电泳。 相似文献
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《分子植物育种》2017,(9)
本研究以柱花草(Stylosanthes guianensis)不育和可育两种分离群体为试验材料,采用优化改进后的CTAB法提取柱花草不育和可育两种分离群体的叶片的基因组DNA。试验结果表明:提取出的DNA检测浓度值373.7~604.3 ng/μL,A260/A280处于1.83~1.91,A260/A230处于1.90~2.05。所提的DNA琼脂糖凝胶的电泳条带显示清晰明亮,没有明显的拖带现象。ISSR-PCR琼脂糖凝胶电泳在不育和可育植株的条带之间具有明显的多态性条带。说明用此优化改进的CTAB法提取的目标基因组DNA的纯度高,质量好。能很好地用于分子遗传特性分析和以ISSR-PCR和SRAP-PCR为基础的分子生物学方面。该改进的试验方法简单、高效、快捷。 相似文献
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采用改良的3×CTAB法提取荷花品种笛女、国庆红、红苔莲的叶片、叶柄和花不同部位的DNA,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测、纯度检测和ISSR分析.结果表明,除叶柄中提取的DNA效果不理想外,其余从叶片、花中提取的DNA纯度高、得率高,OD260/280比值在1.80左右,OD260/230比值在2.01左右.以红苔莲的花为试材,对改良的3×CTAB法提取基因组DNA的参数进行正交试验,选出提取DNA的最优组合.通过荷花基因组DNA的ISSR分析,完全满足实验要求. 相似文献
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《分子植物育种》2021,19(9):3005-3014
为合理利用收集保存的石斛兰种质资源,采用ISSR分子标记方法对22种石斛兰的亲缘关系及遗传多样性进行分析。从100条引物中共筛选出6条扩增条带清晰、多态性高、重复性好的引物;利用筛选出的引物对22种石斛兰基因组DNA进行PCR扩增,共扩增出241条谱带,其中多态性谱带241条,多态性条带比例为100%;采用GenAlEx 6.5软件计算22种石斛兰的平均观测等位基因数(Na)为1.983,平均有效等位基因数(Ne)为1.167,平均Nei's遗传多样性指数(He)为0.133,平均Shannon信息多样性指数(I)为0.247,22种石斛兰表现出丰富的遗传多样性;采用NTSYS-pc 2.1软件计算22种石斛兰的遗传相似系数为0.698 4～0.878 7;基于遗传相似系数进行UPGMA聚类,在相似系数0.795处,可将22种石斛兰划分为10个类群,UPGMA聚类结果与传统的形态学分类结果一致。利用3对引物构建的DNA指纹图谱均可单独鉴别出22种石斛兰。该研究为石斛兰种质资源鉴定、杂交育种亲本选择等提供了理论基础。 相似文献
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小桐子基因组DNA的提取及ISSR-PCR反应体系的优化 总被引：3，自引：0，他引：3
为从小桐子嫩叶中提取高质量的基因组DNA.采用改良CTAB法提取的基因组DNA通过OD260/OD280比值测定,琼脂糖凝胶电泳和ISSR-PCR扩增检测,结果表明改良CTAB法提取的DNA纯度高.可作为ISSR分子标记的模板.同时,采用正交设计的方法,对影响小桐子ISSR-PCR反应体系中的4个因素(引物、Taq DNA Polymerase、10xBuffer(含Mg2 )、dNTPs)在3个水平上进行优化试验.建立了适合小桐子的既稳定又能扩出最多数量谱带的ISSR最优反应体系,即20μl的反应体系中含有30ng模板DNA、0.2mmol/L dNTP、0.3 U Taq酶Polymerase、0.8μmol/L Primer、3.0hanoi/L10×Buffer(含Mg2 ). 相似文献
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白菜种质遗传多样性与亲缘关系的ISSR标记分析 总被引：1，自引：0，他引：1
摘要：从分子水平用ISSR标记法对白菜遗传多样性进行分析,从100个ISSR引物中共筛选出11个多态性明显、条带清晰、反应稳定的引物,对65个样品DNA共扩增出107条谱带,平均每个引物扩增出9.72条带,其中多态性位点102个(93.5% )。种间遗传相似系数在遗传距离在0.40～0.65 之间,表明白菜栽培种内品种间的遗传基础相对较宽,存在较大的遗传变异性。利用UPGMA聚类分析表明：能将65个白菜地方品种划分为四大类。由ISSR标记聚类结果所表现出的大多种质之间的亲缘关系与其来源地有较大的相关性,但也有地理差别很大的白菜资源遗传关系较近的情况。本研究还表明,ISSR 标记比RAPD 标记具有更高的稳定性,在植物遗传多样性的分子标记或克隆研究中,可优先使用ISSR 标记。 相似文献
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为了获得适于龙珠果ISSR-PCR的反应体系,本研究以龙珠果叶片为试验材料,提取基因组DNA,采用L16(45)正交设计试验,对影响龙珠果ISSR-PCR扩增结果的Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度和模板DNA量进行优化,并筛选了最适退火温度。试验结果分析表明,各因素影响显著性为dNTPs浓度>Taq DNA聚合酶用量>Mg2+浓度>模板DNA量>引物浓度。在20μL反应体系中,dNTPs浓度0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、Mg2+浓度2.0 mmol/L、模板DNA 25 ng、引物浓度0.4μmol/L为最佳用量。实验从100条UBC引物中筛选得到22条多态性较好的引物。本研究为龙珠果ISSR标记开发、种质资源鉴定、遗传多样性分析和分子标记辅助选择育种等提供科学依据。 相似文献
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为满足水稻SSR分析需要大规模DNA样品的要求,以水稻幼苗叶片为材料,采用改良的CTAB法提取水稻基因组DNA.经质量和纯度检测结果显示：改进的方法程序简单,药品用量少,省时省力,且提取DNA的OD260/OD280均在1.8～1.9之间,琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增条带清晰、无污染、无降解.表明该方法适用于SSR分析的水稻基因组DNA的提取,所得DNA的质量和纯度完全满足试验要求. 相似文献
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彩色马蹄莲ISSR体系的建立及初步分析 总被引：2，自引：0，他引：2
选取白花马蹄莲和10个颜色有代表性的彩色马蹄莲栽培品种为材料,采用改进的SDS法提取叶片基因组DNA,通过正交设计研究Mg2+、Taq DNA聚合酶和模板DNA、引物的影响,确定彩色马蹄莲最佳ISSR反应体系为:每20μL中含1×PCR Buffer、1.5 mmol/L MgCl2、0.6μmol/L引物、20 ng模板DNA、1 UTaqDNA聚合酶.从100个引物中筛选出的15条进行分析,共获得了109条带,其中多态性为99条,占总数的90.8%.选用NTSYS软件进行聚类分析,绘出了供试材料的亲缘关系图,为系统进行马蹄莲属植物的遗传多样性分析和品种选育提供了参考. 相似文献
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为建立枸杞ISSR-PCR反应体系,通过单因子优化试验和L16(45)正交试验设计对相关参数进行了优化,其最优体系为20μL含Mg2+2.0 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.6μmol/L、Taq DNA聚合酶0.75 U、模板DNA 60 ng。对优化体系进行了稳定性检测,并从100条ISSR引物中筛选出12条,对7份枸杞资源进行了PCR扩增。实验结果表明,12条ISSR引物对7份枸杞种质资源共扩增出132个条带,其中多态性条带共123条,比率为93.2%;7份枸杞资源遗传距离分布在2.57~8.39,其中长辣椒与黑枸杞遗传关系最远;平均有效等位基因数为1.715 6,平均Nei's多样性指数为0.403 9,平均Shannon's指数为0.588 8。ISSR标记可用于枸杞遗传多样性研究。 相似文献
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采用ISSR分子标记技术对5个桉树原种和3个推广的杂交桉树品种进行基因组DNA多态性分析。从100条引物中筛选出10条用于ISSR-PCR扩增,共扩增出155条DNA条带,其中多态性条带148条,占总条带数的95.5%。通过NTSY Spc 2.10e软件分析ISSR扩增结果,结果表明,桉树资源具有较丰富的遗传多样性,8份桉树材料的遗传距离(GD)值范围为0.419 5～1.003 4,遗传相似性(SM)值范围为0.420 0～0.693 3。应用UPGMA法进行聚类分析,将8份桉树材料划分为3个大类,邓恩桉和赤桉为一类;巨尾桉、尾巨桉、尾细桉、韦塔桉、粗皮桉为一类;托里桉则独成一类。 相似文献
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目的:从新疆贝母干叶片中提取高质量的DNA,建立ISSR-PCR体系并进行优化。方法:通过改进的CTAB法提取基因组DNA;综合利用单因素实验和L9(34)正交实验2种方法,对镁离子、dNTP、模板DNA含量、TaqDNA聚合酶量、引物浓度等因素进行优化,并采用温度梯度筛选引物的退火温度。结果:新疆贝母20μL ISSR-PCR最适反应体系dNTP为0.3 mmol/L,Mg2+为2.0 mmol/L,模板浓度为40～100 ng/(20μL),引物为1.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0 U/20μL,引物UBC 859的最适退火温度为50.7℃。结论:此提取方法得到的DNA纯度高,ISSR-PCR扩增效果显著,为新疆贝母种质资源鉴定、遗传多样性分析奠定研究基础。 相似文献