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【目的】筛选出最适宜兴义维蚋蚋卵(胚胎)原代细胞的培养条件和最佳培养基组合,并对其原代细胞进行鉴定,为蚋类细胞系的建立打下基础。【方法】采用组织块和单细胞法对兴义维蚋蚋卵(胚胎)进行原代细胞培养,分析培养基、温度、pH、CO2和培养器皿对细胞培养的影响;并测定蚋卵(胚胎)及原代细胞的rDNA-ITS区序列,通过构建基于ITS区序列的蚋类系统发育进化树鉴定其种属来源。【结果】兴义维蚋蚋卵(胚胎)原代细胞最适宜的培养方法为组织块法,培养基为改良型Shields and Sang M3,pH 6.0~6.5,培养温度28℃,恒温生化培养箱和5% CO2培养箱对原代细胞培养无明显差异,培养器皿为经多聚赖氨酸(PLL)处理的一次性塑料培养皿/板。由基于ITS区序列构建的蚋类系统发育进化树可知,蚋卵(胚胎)及其原代培养细胞均来源于兴义维蚋。【结论】成功建立的兴义维蚋蚋卵(胚胎)原代细胞培养方法可在科研生产中进一步推广应用。 相似文献
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[目的]建立斑马鱼卵巢和精巢组织的原代细胞培养技术,获得原代和传代培养细胞单层。[方法]采用组织块贴壁法进行斑马鱼卵巢和精巢组织的原代细胞培养,采用0.25%胰蛋白酶消化法进行传代培养。[结果]斑马鱼性腺组织的原代细胞培养条件为:最适培养基为DMEM/F12(p H 7.0~7.2),培养温度为24℃,在添加20 ng/m L表皮生长因子(EGF)、20 ng/m L碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、0.5 mmol/Lβ-巯基乙醇和15%胎牛血清时更有利于细胞的存活。其中,卵巢的组织块接种3~4 d后,上皮样细胞首先开始迁出,迁出的上皮样细胞生长5 d后,逐渐凋亡;此后,成纤维样细胞和另一种上皮样细胞开始大量迁出,10 d后可生长汇合成80%的原代细胞单层;可成功传代培养1次,但传代后的上皮样细胞不贴壁,很快死亡,而传代后的成纤维样细胞可贴壁生长,但基本不分裂,健康存活7 d后开始逐渐凋亡。精巢组织接种5 d后,上皮样细胞和成纤维样细胞同时开始迁出,培养16 d后逐渐凋亡,仅得到60%原代培养细胞单层。[结论]初步建立了斑马鱼性腺组织的原代细胞培养条件,并将卵巢组织块迁出的成纤维样细胞成功传代1次。 相似文献
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以仿刺参Apostichopus japonicus体腔细胞为材料,分别用体腔液和MEM、L-15两种培养基进行原代培养,初步探讨了仿刺参体腔细胞培养的基本条件。结果表明：在18℃下封闭培养,体腔细胞在体腔液中直接培养能够贴壁、伸展,细胞呈球形和上皮样,但凝集现象严重;在合成培养基（MEM、L-15）中,体腔细胞凝集明显减少;与MEM培养基相比,体腔细胞在L-15培养基中贴壁时间长,伸展状态好,上皮样细胞较多,可培养至72h;培养基中血清的添加量与细胞的培养状态和可培养时间关系不明显。 相似文献
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优化了杂色鲍原代细胞的培养条件,并利用原代细胞进行了RNAi和外源基因表达。结果表明,较高的渗透压对血淋巴细胞培养起重要作用,淋巴细胞分离液分离血淋巴细胞更利于其生长。原代细胞培养至第5天,在细胞培养液中添加50μg My D88 dsRNA,能够显著降低My D88 mRNA的表达。p EGFP-N1转染培养5 d的鳃细胞,5 d后可以检测到绿色荧光。该研究表明可以成功培养杂色鲍血和鳃原代细胞,并且利用原代细胞可以进行功能基因表达量调低或调研究,为功能基因注释提供了便利条件。 相似文献
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大鼠骨骼肌卫星细胞培养的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
[目的]探讨在体外条件下骨骼肌卫星细胞纯化、培养、鉴定的方法及确定其生物学特性。[方法]取新生大鼠的小腿肌肉,采用肌组织块和肌细胞培养两种方法。分别用胰蛋白酶对培养中的肌组织块和肌细胞进行消化,采用离心及差速贴壁法纯化,得到更高纯度的大鼠骨骼肌肌卫星细胞,进行体外原代骨骼肌和传代骨骼肌的细胞培养。传至第2代后,用分化培养基诱导分化,观察骨骼肌细胞各个阶段的形态特征并拍照。[结果]此方法分离的细胞成活率较高,体外生长、增殖良好。在分化培养基条件下,细胞分化良好,可融合成肌管。[结论]该实验成功探讨了新生大鼠骨骼肌卫星细胞的分化能力并建立了卫星细胞纯化方法,适用于开展细胞移植和肌组织工程方面的研究。 相似文献
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基于当前市场上中华鳖商业化细胞缺乏,不利于开展其病害防控研究的现状,以中华鳖胚胎为对象,采用组织块原代培养技术,从孵育15～20 d的受精卵中获得适宜的胚胎组织,经抗生素、乙醇消毒,通过无菌条件下将组织块均匀分散贴壁在细胞瓶中,然后于30℃恒温培养箱中贴壁培养4 h后加入无血清M199培养基多次清洗,从而获得了中华鳖胚胎组织原代细胞;在此基础上分别对中华鳖胚胎细胞传代培养条件、冻存与复苏等进行系统性研究,初步确定中华鳖胚胎细胞培养温度为26℃,M199或L-15培养基,血清浓度为15%(体积分数),通常7 d传代1次;二甲亚砜冻存保藏后,细胞复苏生长状况正常。 相似文献
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分别采用TC-100加20％胎牛血清做为细胞原代培养基，在27℃，pH6．2—6．4的条件下，对栗蚕（Dicly-opoeajaponica）蛹卵巢组织进行体外培养，细胞贴壁较好，原代培养细胞能够存活两个月之久。细胞形态不一，培养20d后。细胞产生聚集分化现象，每隔7d换液1次。结果表明：TC-100培养基对栗蚕蛹卵巢原代培养细胞来说是比较理想的培养基。 相似文献
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无菌分离取得福寿螺肌肉、外套膜、肾脏及脑组织,分别采用胰酶消化法和研磨法进行组织细胞分离,选取DMEM、F12和改良1640培养基分别进行细胞原代培养,光镜下观察细胞的生长状态,MTT法测定细胞活性。细胞培养一定时间后进行染色体制备及染色体核型分析。结果表明,福寿螺组织细胞在不同的培养基培养下活力具有明显差异,用含水解乳蛋白的DMEM培养基培养的福寿螺外套膜和斧足组织细胞活力较好;用M199培养基培养的福寿螺斧外套膜和脑组织细胞活力较好。核型分析结果表明福寿螺染色体为二倍体(2n=28,NF=56),核型为2B型,核型不对称系数为66.4%。 相似文献