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1.
山羊卵母细胞孤雌激活和孤雌胚体外发育的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
用离子霉素、乙醇、电刺激和Ca-A23187对体外成熟山羊卵泡卵母细胞的孤雌激活和孤雌胚体外发育进行了较为系统的研究。结果表明:2.5,5.0,10.0μmol/L离子霉素对卵母细胞激活率分别为54.0%,58.2%,57.9%,孤雌胚发育率分别为1.5%,3.4%,0%,激活率和发育率均无显著差异(P>0.05)。5.0,10.0,15.0,20.0μmol/L Ca-A23187对卵母细胞激活率分别为31.0%,46.4%,41.8%,45.8%,其中5.0μmol/L Ca-A23187激活率显著低于其他处理组(P<0.05)。5.0μmol/L处理大于4-细胞发育率,极显著低于10.0μmol/L和20.0μmol/L处理(P<0.01),显著低于15.0μmol/L处理(P<0.05)。3%,7%,11%和15%乙醇对卵母细胞激活率分别为40.0%、61.4%、63.0%和67.9%,其中3%乙醇活化率极显著低于其他各组(P<0.01)。15%乙醇致卵母细胞死亡率为15.4%,显著高于其他各组(P<0.05)。7%和11%乙醇处理2~4-细胞和大于4-细胞的发育率,均显著高于3%和15%乙醇处理(P<0.05)。15%乙醇处理大于8-细胞的发育率,极显著低于7%乙醇(P<0.01),显著低于11%乙醇(P<0.05)。在含Ca2 电激液中,用1.00,1.25,1.50,1.80 kV/cm电压刺激卵母细胞,活化率分别为48.4%,54.3%,55.8%,45.1%,2~4细胞卵裂率分别为52.3%,57.9%,54.7%,53.1%,差异均不显著(P<0.05)。 相似文献
2.
【目的】探讨牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)操作中,卵母细胞第一极体位置以及受精卵化学激活方法对ICSI卵体外发育的影响。【方法】采集牛卵巢,成熟培养卵母细胞后,调整其第一极体分别位于相当于时钟6点和12点的位置,进行牛卵母细胞胞质内显微受精,以ICSI卵不进行激活处理为未激活组,分别采用乙醇、离子霉素及离子霉素联合6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)激活ICSI卵,统计ICSI卵的形态完整率、卵裂率和囊胚发育率。【结果】第一极体分别位于相当于时钟6点和12点的位置时,所获得的ICSI卵形态完整率(92.9%和94.0%)、卵裂率(37.1%和40.0%)和囊胚发育率(12.9%和12.2%)均无统计学差异(P>0.05)。未激活组ICSI卵的卵裂率较低,不能发育到囊胚;用乙醇或离子霉素激活时,ICSI卵的卵裂率(25.7%和27.6%)和囊胚发育率(3.3%和3.4%)均显著高于未激活组(7.5%和0)(P<0.05);用离子霉素与6-DMAP联合激活时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率分别为38.9%和13.9%,显著高于乙醇激活组、离子霉素激活组及未激活组(P<0.05)。【结论】对牛卵母细胞进行ICSI操作时,第一极体分别位于相当于时钟6点和12点位置时,对ICSI卵的发育无显著影响;采用离子霉素和6-DMAP联合激活,有利于ICSI卵的体外发育。 相似文献
3.
不同化学激活方法对山羊卵母细胞激活效果的研究 总被引：6，自引：1，他引：6
激活是体细胞核移植技术的关键步骤。本研究对常用化学激活剂乙醇、钙离子载体A2 3187和离子霉素以及添加 6 二甲基氨基嘌呤 (6 Dimethylaminopurine ,6 DMAP)和放线菌酮 (cycloheximide ,CHX)对山羊卵母细胞的激活效果以及不同卵龄的卵母细胞激活后体外发育效果进行了比较。结果表明 :离子霉素处理组激活率显著高于乙醇和A2 3187处理组 (89.6 %vs 6 3.5 % ,6 8.7% ;P <0 .0 5 ) ;离子霉素 +6 -DMAP处理组激活率显著高于离子霉素 +CHX和离子霉素 +CHX +细胞松弛素D处理组 (90 .1%vs 5 8.9% ,6 3.7% ;P <0 .0 1) ;体外成熟 2 4、2 6、2 8h组桑椹胚率分别为 16 .0 %、2 0 .6 %和 33.3% ,30h组桑椹胚率下降 (13.8% )。以上结果说明 ,在本研究的激活条件下 ,山羊卵母细胞适宜的激活方法为 :成熟起始后 2 8h使用离子霉素和 6 DMAP进行联合激活。 相似文献
4.
目的:探寻一种稳定有效的卵母细胞激活方法,为兔体细胞核移植提供实验基础。方法:兔超排后获得卵母细胞体外成熟22~24 h,经脱颗粒处理后采用不同激活剂和不同处理时间进行激活,体外培养5~7 d,观察胚胎发育与囊胚形成情况。结果:卵母细胞经过离子霉素作用5 min或者乙醇作用7 min均能被激活,但两者卵裂率、囊胚率都较低;乙醇和离子霉素分别与6-DMAP联合激活兔卵母细胞时,离子霉素+6-DMAP处理组卵裂率(73.7%)显著高于乙醇+6-DMAP处理组(38.5%,P<0.05);与离子霉素联合激活时,2.0 mmol/L的6-DMAP处理5.0 h时的卵裂率和囊胚率最高,达75.6%和45.5%。结论:激活方法对兔卵母细胞孤雌激活率的影响很大,不同激活剂的联合应用及激活剂的作用时间对兔卵母细胞的激活存在显著差异。 相似文献
5.
《江西农业学报》2022,(9)
目的:探寻一种稳定有效的卵母细胞激活方法,为兔体细胞核移植提供实验基础。方法:兔超排后获得卵母细胞体外成熟2224 h,经脱颗粒处理后采用不同激活剂和不同处理时间进行激活,体外培养524 h,经脱颗粒处理后采用不同激活剂和不同处理时间进行激活,体外培养57 d,观察胚胎发育与囊胚形成情况。结果:卵母细胞经过离子霉素作用5 min或者乙醇作用7 min均能被激活,但两者卵裂率、囊胚率都较低;乙醇和离子霉素分别与6-DMAP联合激活兔卵母细胞时,离子霉素+6-DMAP处理组卵裂率(73.7%)显著高于乙醇+6-DMAP处理组(38.5%,P<0.05);与离子霉素联合激活时,2.0 mmol/L的6-DMAP处理5.0 h时的卵裂率和囊胚率最高,达75.6%和45.5%。结论:激活方法对兔卵母细胞孤雌激活率的影响很大,不同激活剂的联合应用及激活剂的作用时间对兔卵母细胞的激活存在显著差异。 相似文献
6.
猪卵母细胞孤雌激活方法及影响因素的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
研究了离子霉素、电刺激、二硫苏糖醇、6-DMAP和硫柳汞等单独或结合使用及极体形态对猪卵母细胞的激活率、原核类型及激活卵卵裂的影响。结果表明:(1) 单独用离子霉素(88.9%)或电脉冲(80.0%)处理卵母细胞的激活率与二者同6-DMAP结合处理的激活率(84.3%和79.1%)差异不显著,但6-DMAP处理明显(P<0.05)提高电激活卵的1PN比率,而对离子霉素激活卵作用不明显。(2) DTT后处理显著提高硫柳汞处理对卵母细胞的激活率(由4.6%提高到82.6%)。(3) 极体皱缩(85.4%)和极体 相似文献
7.
牛卵母细胞的去核与激活 总被引：5，自引：0，他引：5
比较了Ionomycin(离子霉素)和乙醇及其与其他物质的组合激活牛卵母细胞的效果,并研究了去核时间、细胞松弛素B、末期去核等对去核效率的影响。结果表明,配合使用6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)或放线菌酮(CHX)可显著提高Ionomycin或乙醇激活牛卵母细胞的效率,Ionomycin+6-DMAP激活的牛孤雌胚在8/16细胞之后的发育率明显高于乙醇+6-DMAP(或CHX)。牛卵母细胞的去核在成熟培养20h或之前进行效果较好,此时有较高比率的卵母细胞中第一极体与染色体位置靠近。牛卵母细胞在不含细胞松弛素B的操作液中可进行去核,但所得核移植胚胎的卵裂率明显下降,而对8/16细胞胚之后的发育没有明显影响。牛卵母细胞的末期去核率显著高于中期,二者核移植胚胎的早期发育率基本相同。 相似文献
8.
为探索适宜的牛体外成熟卵母细胞孤雌激活方式,提高核移植效率及研究胚胎孤雌发育。研究比较了不同浓度的乙醇( EH)、离子霉素(ionomycin)、钙离子载体A23187与蛋白激酶抑制剂6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)、细胞松驰素(cytochalasin B, CCB)对牛卵母细胞激活发育的影响,并在相同条件下,比较了不同卵丘细胞层数对卵母细胞激活后胚胎发育能力的影响。结果表明: (1) 5 μmol·L-1 Ionomycin,10 μmol·L-1 A23187,7% EH分别联合2 mmol·L-1 6-DMAP,CCB均可以有效地激活牛孤雌胚,其中以Ionomycin＋6-DMAP+CCB组囊胚发育率极显著高于其他各组(P<0.01),并且激活液中CCB的存在对牛孤雌胚胎的发育有利;(2) 卵母细胞包被的卵丘细胞层数不同对卵母细胞成熟激活有显著的影响,卵丘细胞层数3～5层和多于6层的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)孤雌激活的分裂率和囊胚率分别为69.09%,31.58%和75.14%,38.85%,这2组之间差异不显著(P>0.05), 但其显著高于1～2层组与混合组(P< 0.05), 因此,这2组细胞是最佳的试验研究材料。 相似文献
9.
[目的]了解玻璃化冷冻一解冻及不同孤雌激活条件对水牛卵母细胞发育潜能的影响,为构建完善的水牛卵母细胞孤雌激活培养体系奠定基础.[方法]利用玻璃化冷冻法对水牛体外成熟卵母细胞进行冷冻保存1～2d,解冻复苏后进行孤雌激活,以新鲜的体外成熟卵母细胞为对照,探讨离子霉素浓度、6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)浓度和处理时间对玻璃化冷冻复苏后水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响.[结果]与新鲜的体外成熟卵母细胞相比,玻璃化冷冻—解冻复苏后水牛体外成熟卵母细胞孤雌激活的卵裂率、4-细胞率、8-细胞率和囊胚发育率均极显著降低(P＜0.01).水牛体外成熟卵母细胞经玻璃化冷冻—解冻复苏后,以3.5 μmol/L离子霉素激活5 min联合2mmol/L 6-DMAP培养2h的孤雌激活效果最佳,其卵裂率、4-细胞率、8-细胞率和囊胚发育率分别为60.6％、45.1％、33.7％和14.8％.[结论]水牛体外成熟卵母细胞经玻璃化冷冻—解冻复苏后,其激活阈值发生改变,因此不宜采用与新鲜体外成熟卵母细胞一致的激活程序进行孤雌激活. 相似文献
10.
为寻求适合于山羊卵母细胞孤雌激活的方法,本试验采用离子霉素对体外成熟山羊卵泡卵母细胞进行孤雌激活,同时比较了培养液中添加不同类型的血清对孤雌激活胚体外发育的影响。结果表明:用2.5、5.0和10.0μmol/L离子霉素处理卵母细胞,卵裂率分别为72.3%、75.6%和70.3%,囊胚率分别为40.8%、45.4%和39.4%,均无显著差异(P>0.05)。用5.0、10.0、15.0和20.0μmol/L钙离子载体Ca-A23187处理卵母细胞,卵裂率分别为50.5%、62.5%、60.4%和60.2%,其中5.0μmol/L Ca-A23187处理组的卵裂率极显著低于其他处理组(P<0.01),但各组的囊胚率无显著差异(P<0.05)。用30、70、110和150 mL/L乙醇处理卵母细胞,卵裂率分别为40.6%、63.7%、64.2%和65.3%,其中30 mL/L乙醇组的卵裂率极显著低于其他各组(P<0.01),30和150 mL/L乙醇组的囊胚率极显著低于70和110 mL/L乙醇组(P<0.01)。在培养液与颗粒细胞共同培养条件下,分别添加100 mL/L的发情牛血清(OCS)、胎牛血清(FCS)和... 相似文献
11.
The effects of ionomycin, electrical pulses, dithiothreitol (DTT), 6-DMAP and thimersal,used either alone or in combinations, on the activation rate, pronuclear type and cleavage of porcine oocyte were studied in this paper. The results are as follows: (1) The activation rates of oocytes treated with ionomycin (88.9%) or pulsed (80.0%) alone did not differ significantly from each other and from those in oocytes treated in combination with 6-DMAP (84.3 and 79.1%, respectively). While 6-DMAP improved electrical activation (increased the proportion of oocyteswith 1 PN), it had no effect on oocyte activation by ionomycin;(2) Post-treatment with DTT significantly enhanced the thimersal activation of porcine oocytes with activation rates increased from 4.6 to 82.6%; (3) When pulsed, the activation rates of oocytes with crimped (85.4%)or fragmented first polar bodies (86. 2%) were significantly higher than those of oocytes with intact polar bodies (58.8%); the ratio of 1 PN activated oocytes (78.8%) was significantly higher, but that of 2 PN oocytes (18.2%) was significantly lower in oocytes with intact polar bodies; (4) The cleavage rate of oocytes activated by electrical stimulus (52.4 %) was significantly higher than that in oocytes activated by ionomycin (23.0%) when combined with 6-DMAP, but it was not significantly different from that in oocytes activated by electrical stimulus alone (46.1%). 相似文献
12.
TIAN Jian-hui CAI Yuan LIU Guo-shi ZENG Sen-ming CHENG Wen-min ZHU Shi-en LIU Huan-ying WU Chang-xin 《中国农业科学(英文版)》2005,4(10):788-792
The objective of this study was to determine the effects of ionomycin combined with cytochalasin B (CB), cycloheximide (CHX), or 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) on the activation of porcine oocytes. In Experiment 1, in vitro matured oocytes were activated with 15,20,25 or 30 mmol L-1 ionomycin separately. Activation rates of 20,25 mmol L-1 and 30 mmol L-1 treatments were higher (P<0.05) than that of 15 mmol L-1 treatment. In Experiment 2, in vitro matured oocytes were activated with 20 mmol L-1 ionomycin for 10,20,30,40 or 50 min and then incubated with 2 mmol L-1 6-DMAP for 6 h.Cleavage and blastocyst rates [(72.40±13.02)％, (25.37±11.43)％] after treatments for 40 min were higher (P>0.05) thanthose of the other treatments. In Experiment 3, matured oocytes were activated with ionomycin and then incubated with 7.5 mgmL-1 CB, 10 mg mL-1 CHX, 2 mmol L-16-DMAP, 7.5 mg mL-1 CB + 10 mg mL-1 CHX or 7.5 mg mL-1 CB + 2 mmol L-1 6-DMAP for6 h. The rates of activation, cleavage and blastocyst of 2 mmol L-1 6-DMAP treatment [(86.05±4.29)％, (61.77±8.10)％ and(21.62±3.31)％] were higher (P<0.05) than those of 7.5 mg mL-1 CB treatment. In Experiment 4, matured oocytes wereactivated with ionomycin and then incubated with 2 mmol L-1 6-DMAP for 3.5, 5.5 or 7.5 h. Cleavage rates and blastocyst rates of 5.5 h treatment [(66.59±14.36)％ and (25.40±10.16)％] were higher (P>0.05) than those of other treatments. In conclusion, activation of porcine oocytes appears to be most successful using the combination of ionomycin (20 mmol L-1,40 min) followed by 6-DMAP (2 mmol L-1, 5.5 h). 相似文献
13.
14.
化学激活对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响 总被引：4，自引：0，他引：4
探索了离子霉素结合细胞松驰素B（cytochalasin B, CB）、放线菌酮（cycloheximide, CHX）以及6-二甲基嘌呤（6-dimethylaminopurine, 6-DMAP）等化学物质，对猪卵母细胞激活后发育的影响。试验1，体外成熟卵母细胞分别用15、20、25、30 mol·L-1的离子霉素处理40 min或电激活（1.3 kV·cm-1，80 s,1次脉冲），结果表明，20 mol·L-1组的激活率（69.93±5.80）%显著高于15 mol·L-1组（P <0.05），但与其它各组差异不显著（P >0.05）。试验2，卵母细胞采用20 mol·L-1离子霉素分别激活10、20、30、40、50 min，再用2 mmol·L-1 6-DMAP处理6 h，其中，40 min组的卵裂率、囊胚率[（72.40±13.02）%、（25.37±11.43）%]较高，但与其它各组差异不显著（P >0.05）。试验3，卵母细胞经离子霉素（20 mol·L-1、40 min）激活后，分别用7.5 g·ml-1 CB、10 g·ml-1 CHX、2 mmol·L-1 6-DMAP、7.5 g·ml-1 CB +10 g·ml-1 CHX和7.5 g·ml-1 CB +2 mmol·L-1 6-DMAP处理6 h，2 mmol·L-16-DMAP组的激活率、卵裂率和囊胚率[（86.05±4.29）%、（61.77±8.10）%和（21.62±3.31）%] 显著高于7.5 g·ml-1 CB组（P <0.05）与另外几组差异不显著（P >0.05）。试验4，卵母细胞由离子霉素（20 mol·L-1、40 min）激活后，用2 mmol·L-1 6-DMAP分别处理3.5、5.5、7.5 h，5.5 h组的卵裂率和囊胚率[(66.59±14.36)%和(25.40±10.16)%]高于另外两组，但差异不显著（P >0.05）。结果表明，离子霉素（20 mol·L-1、40 min）+6-DMAP（2 mmol·L-1 、5.5 h）为最佳激活方案。离子霉素激活卵母细胞后，CB与CHX、6-DMAP的互作对卵子的发育有抑制作用。 相似文献
15.
探讨了电融合前对重构卵继续孵育及激活剂6-DMAP不同作用时间对山羊核移植胚胎体外发育的影响。结果显示,重构卵在成熟液中继续培养后,9~10 h组的融合后卵子死亡率(27.42%)显著低于30 min和90 min组(49.26%和56.3%)(P0.05),胚胎卵裂率(68.15%)则显著高于30 min和90 min组(55.6%和54.24%)(P0.05);重构卵用离子霉素激活后,再用6-DMAP激活0 h、2 h、3 h、4 h、5 h及8~10 h,各组间的胚胎卵裂率均无显著差异(P0.05),但均显著高于未用6-DMAP组的卵裂率(P0.05)。本试验结果表明,电融合前,继续成熟培养重构卵有利于降低电融合时的卵子死亡率,提高卵子利用率;联合使用离子霉素和6-DMAP有利于提高激活效果,而6-DMAP的作用时间(2~10 h)不影响核移植胚胎的卵裂。 相似文献
16.
牛体外成熟卵母细胞孤雌激活的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
比较 3种化学激活方法和 4种电化学激活方法对牛体外成熟卵母细胞进行孤雌激活的效果。结果显示 ,单独用离子霉素和用离子霉素 + 6 DMAP +CB或 +CHX +CB激活牛卵母细胞 ,两者之间差异极显著 (P <0 0 1) ;用不同强度电脉冲 + 6 DMAP +CB激活牛卵母细胞 ,各组间卵裂率差异均不显著 (P >0 0 5 )。结果表明 ,虽然电化学激活方法最高可获得 82 9%的卵裂率 ,比化学激活方法中最好的高 4 8% ,但后者不需电融合仪 ,操作相对简便。 相似文献