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以5％绵羊血改良Minca琼脂筛选和克隆表达良好的K88^＋菌株，改良Minca琼脂培养获得K88菌液。用加热法及高速匀浆法使K88纤毛从菌体上脱下。饱和硫酸铵沉淀粗提，用Sepharose CL-4B凝胶过滤纯化K88抗原。提纯的抗原经SDS—PAGE电泳测定其分子量约为25000，且仅此一条蛋白带；与K88抗血清进行琼脂扩散试验只出现一条沉淀线。用提纯的抗原经多次免疫家兔制备了K88抗血清。抗血清在玻板凝集试验中只凝集K88菌株，不凝集K99，987P或F41菌株；在琼扩试验中，只与K88粗提抗原出现一条沉淀线，且效价为1：64，而不与K99，987P抗原出现沉淀线；在免疫电泳试验中，与无细胞K88纤毛液只出现一条沉淀线。鉴定结果表明，所制备的K88血清特异性强、效价高，可作为单因子血清用于凝集试验、琼扩试验等血清学试验，对K88菌株进行鉴定，对K88纤毛抗原进行定性和定量检测。 相似文献
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利用F1，单因子血清IgG致敏绵羊红细胞，建立了定量产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)F41黏附素的反向间接血凝试验。经致敏的绵羊红细胞能被F41单因子血清特异性地抑制，且不与ETEC—K88、ETEC—K99、ETEC-987P、致仔猪水肿病大肠埃希氏菌O138、鼠伤寒沙门菌和猪链球菌2型菌液出现交叉反应，其敏感性比甘露糖抵抗血凝反应(MRHA)至少高2^5倍。结果表明，该反向间接血凝试验具有很高的特异性和敏感性，可用于生物制品中黏附素含量的定量。 相似文献
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用参考菌株建立了大肠杆菌K88、K99和987P三种纤毛(3P)抗原的ELISA改良双夹心检测法。通过对分离菌株、仔猪粪便样品中三种抗原的检测,对已知阳、阴性菌株和部分腹泻病原、正常肠道菌的试验以及对抗原的定量测定,证明本方法具有较高的特异性和敏感性。 相似文献
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提出了制备供牛和羊边虫病血清学试验的高敏性和特异性抗原的方法。免疫酶测定、间接血凝反应和直接补体结合反应诊断价值比较试验的结果证实,前二者优越。免疫酶测定和间接血凝反应诊断价值评比证实,免疫酶测定比间接血凝反应特异性高。证实了羊、牛边虫抗原交叉活性,建议用羊边虫作诊断。 相似文献
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经碱变性酸酚法分离纯化的pMV99重组质粒,用SmaⅠ和BamⅢ消化,琼脂糖凝胶电泳分离,冻融法回收,得到4.2Kb的K99基因片段。该片通过DNA缺口翻译技术标记上α-32p,以此为探针,用菌落原位杂交对K99~+毒素源性大肠杆菌(ETEC)进行鉴定。探针与标准的K99~+ETEC杂交为阳性。从腹泻仔猪和犊牛离到ETEC。玻片凝集和反向间接血凝试验检测为K99抗原阳性。与探针杂交物均为阳性。K99基因探针与携带K88、987P,CFA/Ⅰ、CFA/Ⅱ菌毛的大肠杆菌杂交都呈阴性。以上试验表明,以DNA杂交技术测定K99菌毛抗原,结果可靠,特异性强,适于ETEC菌毛的鉴定。 相似文献
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利用扬州大学农学院畜禽病原微生物研究室提供的传染性法氏囊病单克隆抗体致敏红细胞。用反向间接血凝抑制试验检测传染性法氏囊病血清抗体。试验表明：反向间接血凝抑制试验具有很高的特异性，能被传染性法氏囊病抗原特异性地阻断，且不与鸡马立克氏病，白血病，传染性脑脊髓炎，减蛋综合征，新城疫等血清出现交叉反应。 相似文献
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利用扬州大学农学院畜禽病原微生物研究室提供的传染性法氏囊病单克隆抗体致敏红细胞，用反向间接血凝抑制试验检测传染性法氏囊病血清抗体。试验表明：反向间接血凝抑制试验具有很高的特异性，能被传染性法氏囊病抗原特异性地阻断，且不与鸡马立克氏病、白血病、传染性脑脊髓炎、减蛋综合征、新城疫等血清出现交叉反应。该法敏感性比琼脂扩散试验高２８倍，检出率高约６０％。与琼脂扩散试验的相关系数为０．９４００。用此法测定雏鸡母源抗体，测得雏鸡于１３～１５日龄时母源抗体降至免疫临界线 相似文献
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应用细菌质粒转化技术,将大肠杆菌K_(?)与LT(A~-B~ )抗原基因重组质粒转入猪霍乱沙门氏菌弱毒菌苗株中.对获得的其中8个转化子进行鉴定的结果表明,转化的细菌仍保持沙门氏菌的形态、生化及抗原特性,同时可稳定地表达K(?)和LT-B两种抗原.用微量间接血凝试验、抗甘露糖豚鼠红细胞凝集试验(MRHA)、ELISA等对转化菌表达的K(?)抗原进行了测定,用间接免疫溶血试验对其表达的LT-B抗原进行了测定.结果,这两种抗原在转化的细菌中均可高效表达.电镜下观察,转化的细菌在其表面形成菌毛样结构.这种转化细菌表现出猪霍乱沙门氏菌与产肠毒素性大肠杆菌的两种抗原特性,为这种双价工程菌苗的研制提供了有价值的候选菌株.本研究结果还表明,猪霍乱沙门氏菌弱毒菌苗株可作为基因转化的有效受体菌. 相似文献
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采用加热法和盐析法对大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原进行了提取、纯化,并通过SDS—PAGE凝胶电泳对提纯效果进行了检验。将纯化的纤毛抗原免疫家兔,制备了K88、K99、987P纤毛抗原抗血清,用琼脂扩散试验检测了抗血清的效价。结果表明,纯化的K88、K99、987P纤毛为高纯度的纤毛抗原,其分子量分别约为26、18、20kD。K88、K99、987P抗血清的琼扩效价依次为1：32、1：32、1：128,且特异性高。本研究为K88、K99、987P纤毛抗原定量检测及产纤毛大肠杆菌菌株的鉴定奠定了基础。 相似文献
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作者曾研究了用对豚鼠红细胞的m.r.e血凝反应来筛选仔猪黄痢病原性大肠菌的特异性,并用仔猪肠结扎试验和肠上皮细胞吸着试验证明m.r.e~ 大肠菌株确系黄痢致病菌株。而且还进一步证明,从这些菌株提取的m.r.e~ 血凝素在一系列理化和生物学特性上均与国外报道的K88抗原相一致。 相似文献
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正向间接血凝试验是用已知血凝抗原检测未知血清中抗体的试验。抗原与其对应的抗体相遇,在一定条件下形成抗原抗体复合物,但这种复合物的分子团很小,肉眼看不见。将抗原吸附在经过特殊处理的红细胞表面,只需少餐抗原就能大大提高抗原和抗体的反应灵敏性,这种经过口蹄疫纯化抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇,红细胞便出现清晰可见的凝集现象。 相似文献
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《中国兽医学报》2019,(7):1310-1314
为建立埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)抗原快速检测方法,本研究利用纯化后的埃博拉病毒样颗粒(EBOV-VLPs)免疫马匹制备阳性血清,采用饱和硫酸铵沉淀法初纯血清中的IgG,后经过Protien G柱亲和层析法精纯IgG,利用精纯后的IgG致敏醛化的绵羊红细胞,建立反向间接血凝抗原检测方法,并对该方法进行最佳反应条件的优化。将该方法用于不同批次制得的已知病毒滴度埃博拉假病毒血凝效价检测,检测结果显示:病毒滴度的高低与血凝效价检测结果呈现良好的相关性。本研究成功建立埃博拉病毒抗原反向间接血凝检测方法,该方法简单、方便、快捷,无需特殊的仪器设备,1 h内便可报告检测结果,在普通实验室中便可进行操作。此外,该方法也适用于埃博拉病毒感染及疫病暴发后临床样品的定性分析。 相似文献
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用淋巴细胞杂交瘤技术得到了株抗E.coli K88抗原的特异单克隆抗体(MCA):JLZK-7,-10和-178。小鼠腹水中MCA的免疫荧光滴度达10~(-5)～10~(-6),直接凝集滴度为 1:500～1:5000,比用常规方法生产的因子血清高100～1000倍。JLZK-7为IgG_1亚类,JLZK-10为IgG_(26)亚类,JLZK-178为IgG_3亚类。这3株MCA与K88阴性大肠杆菌和肠杆菌科中的其他细菌无交叉反应。对K88阳性菌株的反应性测定表明,JLZK-7是对K88ab、K88ac和K88ad菌株都起反应的群特异MCA,JLZK-10和-178是分别仅与部分K88ab菌株和部分K88ac菌株反应的型特异MCA。试验结果表明,这3株MCA可用于初生仔猪下痢病的诊断和大肠杆菌K88血清型鉴定。 相似文献
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畜禽类人乙型肝炎病毒感染的血清流行病学调查 总被引：2，自引：0，他引：2
用反向间接血凝(RPHA)和ELISA检测了乳牛、黄牛、水牛、牦牛、绵羊、猪和鸡等7种畜禽血清中的人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和人乙肝e抗原(HBeAg;并用反向间接血凝抑制试验(RPHI)确证RPHA的特异性。结果表明,在上述畜禽血清中HBsAg和HBeAg的自然携带率都很高,二者均为阳性的双阳性率也很高,表明在畜禽中可能存在一种与人乙肝病毒(HBV)抗原密切相关的类HBV,进一步阐明其本质,在HBV流行病学和防制上具有重大意义。 相似文献
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山羊痘血清学诊断技术研究 总被引：8，自引：1，他引：8
本实验研制了山羊痘的五种血清学检测方法并进行了比较分析，结果表明：琼脂凝胶扩散试验（AGP）适于基层兽医开展山羊痘病例的诊断，对流免疫电泳技术（CIE）能提高对抗原或抗体的分辨能力，荧光抗体技术（FAT）能对感染细胞进行山羊痘病毒定位检测，反向间接血凝试验（RPHA）主要用于临床痘疹痂皮和感染细胞中山羊痘抗原的定量测定，而正向间接血凝试验（IHA）不失为一种山羊痘抗体的最佳监测方法。 相似文献
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本文报告了应用酶联免疫吸附实验(ELISA)和酶联葡萄球菌A蛋白(PPA)的ELISA方法检测肠毒性大肠杆菌K88ac抗原和抗体的方法。用PPA直接法、双抗体夹心抑制法(简称抑制法)测母猪乳清中的抗体,并与琼脂双扩散试验作了比较。试验结果表明,PPA直接法,测猪抗体的方法最灵敏、简便。抑制法灵敏度低于PPA直接法,但可利用一种动物的抗血清及其酶结合物检查任何动物中的抗体。用双抗体夹心法测疫苗(无细胞纤毛抗原粗提液)中的纤毛抗原的含量,其灵敏度可测至毫微克水平。而且未发现非特异性反应。用双抗体夹心法从肠毒性大肠杆菌培养物中鉴别K88阳性菌株,方法灵敏准确,可作为筛选菌株的重要手段之一。 相似文献
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本报告用因子血清玻板凝集反应首次从国内分离的54株犊牛腹泻大肠杆菌中检出5株新表面抗原菌株,并用电子显微镜技术证实这种表面抗原为纤毛抗原。用玻板凝集反应、免疫扩散和免疫电源试验及电子显微镜技术对菌株进行分析鉴定的结果表明:5个菌株产生二种纤毛形态相同,但抗原性完全相别的纤毛抗原。其中2个菌株产生242菌株型纤毛抗原,暂标记为F242纤毛抗原;3个菌株产生293菌株型纤毛抗原,暂标记为F293纤毛抗原。二种新纤毛抗原菌株产耐热肠毒素(ST)性和部分动物红细胞的甘露糖抗性血凝特性测定表明:3株F293抗原菌产生ST,对豚鼠和兔红细胞具有甘露糖抗性血凝特性,而对绵羊红细胞不具有该特性;2株F242抗原菌对不产生ST,对豚鼠、兔和绵羊红细胞均具有甘露糖抗性血凝特性。 相似文献