河南部分地区犊黄牛轮状病毒的分离培养及其血凝特性的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

何孔旺  林继煌 《畜牧与兽医》1989,21(2):64-65

<正> 轮状病毒(RV)是河南省部分地区犊黄牛腹泻的主要病原之一,但迄今的报道多限于粪便中RV抗原的检出和病毒颗粒的电镜观察。有关病毒的分离培养未见报道。1987年10月在河南省白马兽医站采集腹泻犊牛粪样10份,对其中RV阳性的4份粪样进行了病毒分离培养,获得了一株能致MA—104细胞病变、特性稳定的犊黄牛RV。鉴定了它的血凝谱并初步探讨了它与牛国际参考毒株NCDV及其它两个毒株的抗原相关性。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒南京株纤突S蛋白基因的克隆与序列分析     

张素芳  何孔旺  贾云  倪艳秀  华荣虹  赵玉军 《动物医学进展》2003,24(3):93-97

参考 Genbank收录的 TGEV- Miller株的基因序列 ,自行设计合成 1对引物 (TGEVP5 /P6 ) ,对不同代次的 TGEV疫苗弱毒 STC3及种毒 、种毒 进行了 RT- PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,均出现 1条大约 12 6 2 bp的目的条带 ,经 Eco R 酶切 ,都产生了 871bp和391bp左右的两个片段 ,与预期大小相符。将种毒 RT- PCR扩增目的条带回收纯化后克隆入PMD18- T载体中 ,转化宿主菌 DH5 α,挑选阳性克隆 (命名为 PTs) ,提取重组质粒 ,用 Hpa 、Eco R 对重组质粒进行酶切鉴定以及 PCR扩增 ,然后进行序列测定 ,并进行了序列分析 ,证实与国外标准毒株 Miller、Fs772 / 70、Purdue、TO14等有较高的同源性  相似文献   

检测猪流行性腹泻病毒的R-PCR方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

倪艳秀  何孔旺  俞正玉  郭蓉利  吕立新  陈兆霞 《畜牧与兽医》2004,36(1):10-12

根据猪流行性腹泻病毒 (PEDV)的N基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 641bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测的猪流行性腹泻病毒的RT PCR方法。对猪轮状病毒 (PRV)、猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)的RT PCR检测结果均呈阴性。对PEDV JS株的RT PCR产物的序列分析表明 ,与CV777株的同源性为 97 3 %。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒 TaqMan 荧光定量 PCR 方法的建立与应用简     

李 彬 刘浩飞 孙 冰茅爱华  杜露平何孔旺郭容利  温立斌张雪寒倪艳秀  周俊明吕立新俞正玉  王小敏胡屹屹  祝昊丹于 洋 《江苏农业学报》2014,(1):125-129

  相似文献   

棉花落叶型黄萎病菌的检测技术     

傅正擎  吴蔼民  顾本康  何孔旺  顾春燕 《植物保护学报》2001,28(1):28-32

采用Nit硝酸还原酶缺陷型突变体技术，共得到棉花黄萎病菌Nit突变体301个，其中A型155个，B型97个，C型29个。共检测到落叶型棉花黄萎病菌11株，除以前报道的6株外，发现了5个新菌株。针刺接种后，在棉株上均引起典型的落叶型症状。通过聚丙烯酰受凝胶电泳比较落叶型和非落叶型的8个代表菌株的蛋白质电泳图谱的差异，发现在浓度为7.5%的凝胶中，落叶型菌株有两条特异性的蛋白，其迁移率分别为Rf5=0.135,Rf9=0.405。用非落叶型菌株DF4、落叶型菌株SY12菌体的可溶性蛋白制备获得两个抗血清。用间接ELISA法检测，即能区分棉花黄萎病菌的立枯、枯萎、炭疽病菌，落叶型和非落叶型黄萎病菌均呈阳性反应，但落叶型黄萎病菌的OD值高于非落叶型黄萎病菌。  相似文献   

猪IL-1β与IL-18SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  吕立新  周俊明  张雪寒  李彬  汪伟  温立斌  王小敏  范红结  茅爱华  郭容利 《江苏农业学报》2011,(6):1289-1294

IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用.为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PC...  相似文献   

牛轮状病毒性腹泻的研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

何孔旺  林继煌 《中国兽医学报》1998,18(3):224-227

从安徽、河南两地黄牛犊腹泻粪样中分离出了３株能在ＭＡ－１０４细胞上稳定繁殖、继代的轮状病毒（标号为ＢＲＶ００７、ＢＲＶ０１４及ＨＮ－７）。中和试验表明，该３株黄牛分离毒与北京奶牛毒ＢＲＶ６５５５及国外参考毒株ＮＣＤＶ之间抗原性无差异，同属轮状病毒血清６型（或牛轮状病毒血清１型），在亚组抗原特异性上均为第Ⅰ亚组。用ＢＲＶ０１４高代次（５０代以上）细胞培养物（ＴＣＩＤ５０＝１０－６．５）于孕母牛产前３个月和１个月经肌肉免疫注射２次，可明显提高母牛初乳中的轮状病毒抗体，在产后２０ｄ，抗体滴度仍能维持在１∶６４；临床观察，免疫母牛所产犊牛的腹泻发生率较对照组降低８３．８％。  相似文献   

类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白二级结构与B细胞表位预测   总被引：2，自引：0，他引：2  

温立斌  何孔旺  杨汉春  王玉然 《华北农学报》2009,24(5)

旨为预测类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白的B细胞表位.采用生物信息软件和互联网服务器,预测VP2的二级结构,分析VP2表面特性(亲水性、可塑性、可及性和抗原性),综合预测VP2的B细胞抗原表位.结果表明,P1 VP2蛋白肽链的6-18和80-92区段为预测的B细胞表位优势区.多参数方案综合预测P1 VP2蛋白的B细胞抗原表位,为进一步鉴定表位及设计疫苗奠定了基础.  相似文献   

猪流行性腹泻病毒灭活疫苗的制备及攻毒保护研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

徐宏军  杨鹏程  任丽  胡来根  何孔旺  刘文倩  代洪波 《动物医学进展》2015,(1):35-39

为研究现用猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777疫苗毒株对流行毒株的免疫保护效果,以RTPCR进行PEDV CV777疫苗株、JS12流行株S基因克隆测序,进行PEDV S基因核酸序列分析与氨基酸序列分析。分别以转瓶工艺与细胞悬浮培养工艺培养Vero E6细胞,制备PEDV CV777株转瓶灭活苗与悬浮灭活苗。分别以PEDV转瓶灭活苗、悬浮灭活苗、PEDV流行株组织灭活苗(JS12株)产前30d免疫经产母猪;母猪产仔后14d进行仔猪攻毒保护试验。核酸序列分析显示,PEDV CV777株S基因与流行毒株的相似性在96.4%~99.7%之间,氨基酸序列相似性在96.7%~99.5%之间。转瓶工艺制备PEDV抗原效价为107.0 TCID50/mL,悬浮培养制备PEDV抗原效价为108.5 TCID50/mL。攻毒保护试验显示,悬浮灭活苗免疫母猪后,仔猪有2/10发病,保护率为8/10,转瓶灭活苗组发病率为8/10,保护率仅为2/10;组织灭活苗组9/10发病;对照组10头全部发病。该试验证明,提高PEDV CV777株的抗原含量,能够有效提高疫苗对PEDV流行毒株的保护效果。  相似文献   

次氯酸消毒液对猪源病原体的消杀效果     

肖琦  赵霞玲  钱雯娴  朱家平  张冯禧  尹力鸿  温立斌  何孔旺 《江苏农业科学》2021,49(21):170-174

为评价次氯酸消毒液(以下简称消毒液)对猪源病原体的消杀作用,以猪场常见的5种病原菌和5种病毒为研究对象,测试消毒液在不同浓度和不同作用时间下的消杀效果.悬液定量杀菌试验结果表明,消毒液原液(次氯酸含量为210 mg/L)和1:2倍稀释消毒液(次氯酸含量为105 mg/L),作用30 s即可杀灭猪链球菌2型(SS2)、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)、副猪嗜血杆菌(HPS)、猪丹毒杆菌(ER)和猪大肠杆菌(ETEC);1:4倍稀释消毒液(次氯酸含量为52.5 mg/L)作用1 min能杀灭HPS、ER和ETEC,作用5 min能杀灭SS2和APP,杀灭对数值均>7.00,杀灭率均为100％.病毒灭活试验结果表明,消毒液原液作用1 min对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪细小病毒(PPV)的平均灭活对数值均≥5.00,杀灭率均≥99.999％;1:2倍稀释消毒液作用1 min对PEDV的平均灭活对数值为4.00、杀灭率为99.990％;消毒液原液作用5 min和10 min,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的杀灭率为99.899％,对猪伪狂犬病病毒(PRV)的杀灭率为92.921％,对猪圆环病毒2型(PCV2)的杀灭率为90.00％.表明次氯酸消毒液在推荐浓度下对猪场常见病原菌有快速高效的消杀效果,对PEDV和PPV等病毒亦有良好的消杀作用.  相似文献