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1.
用口蹄疫O型灭活疫苗和多肽疫苗分别免疫60日龄的仔猪,用所研制的猪O型FMDV抗体检测试纸条和商品ELISA试剂盒同步检测,分析免疫猪的抗体变化规律。结果显示,该试纸检测结果与对照ELISA试剂盒的检测结果一致,符合抗体产生规律,能够应用于O型FMDV疫苗免疫猪的抗体检测。 相似文献
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【目的】建立一种基于量子点(quantum dots, QDs)技术的猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)gB抗体免疫层析试纸,为PRV疫苗免疫效果评估提供一种快速、简便的检测技术。【方法】选用昆虫细胞表达系统表达的gB蛋白,采用羧基修饰的水溶性QDs,在偶联剂1-乙基-3[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)的作用下制备gB-QDs荧光标记物。将金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcus aureus protein A,SPA)和抗gB蛋白的单克隆抗体分别固定在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,将样品垫、标记垫、吸水垫、支撑底板按生产工艺组装成基于QDs的荧光免疫层析试纸。检测该试纸的特异性、敏感性及与商品化ELISA试剂盒的符合率。【结果】敏感性试验结果显示,该试纸的敏感性为1∶6 400。特异性试验结果显示,该试纸与猪瘟病毒(CSFV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清均无交叉反应,特异性为100%。通过检测田间猪血清样品,对比商品化ELISA检测试剂盒,结果显示,113... 相似文献
3.
猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸的研制 总被引：2，自引：0，他引：2
应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记PCV-2抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原和兔抗PCV-2抗体,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸.当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色.整个试验过程只需15 min.试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点. 相似文献
4.
《养殖与饲料．饲料世界》2015,(10)
胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体阳性检出率94.69%,ELISA法检测猪瘟抗体合格率95.58%,两者符合率为99.07%;胶体金免疫层析试纸条强阳性率为86.73%,ELISA检测猪瘟抗体阻断率≥60%为89.38%,检测线显色强度与抗体水平呈正相关。 相似文献
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牛奶中雌二醇胶体金试纸条快速检测技术研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了建立快速、敏感、特异的雌二醇（E2）残留免疫检测方法,本研究应用胶体金免疫层析技术,研究制备一种快速检测牛奶中E2的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,采用物理吸附法将E2兔多克隆抗体偶联至胶体金,经过优化抗原包被量和多克隆抗体标记量等反应条件组装成检测试纸条,测定检测试纸的灵敏度、特异性、重复性和加速保存等参数,并对E2类似物交叉反应和牛奶基质干扰反应进行了测定。结果表明,试纸条最优包被抗原浓度为2 mg/mL,抗体浓度为20 μg/mL。采用消线法判定结果,检测时间10 min,PBS缓冲液中E2检测限为10 μg/L,该方法与雌三醇的交叉反应率为40%,与戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、雌酮、己烯雌酚、炔雌醚、乙炔雌二醇、壬基酚等类似物均无可见交叉反应,牛奶样品经2倍稀释消除基质干扰直接用于检测,该方法在牛奶样品中的判定值为20 μg/L。本研究建立的E2胶体金试纸条使用简单方便,适合现场快速检测牛奶中E2残留。 相似文献
6.
将gD蛋白用胶体金标记并包被于结合垫作为检测探针,未标记的gD蛋白包被NC膜作为检测线,以金标记鼠IgG与羊抗鼠IgG作为独立质控系统,利用双抗原夹心法建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus, IBRV)抗体的胶体金免疫层析试纸,并对该试纸进行了性能评价。结果显示,该试纸在检测副结核分枝杆菌(MAP)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛支原体(M.bovis)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、口蹄疫病毒(FMDV)的标准阳性血清时均为阴性反应;该试纸在检测IBRV标准阳性血清时敏感性为1∶16;将该试纸与进口商品化ELISA试剂盒共同检测60份待检牛血清,两者的阳性符合率为93.3%,阴性符合率为100%,总符合率为96.7%。结果表明,本试验建立的胶体金免疫层析试纸可在10～15 min完成检测,具有快速、准确、简便等特点,为临床定性检测及现场诊断牛传染性鼻气管炎提供了有效工具。 相似文献
7.
为了建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的方法,试验采用RT-PCR扩增ORF5基因,克隆至原核表达载体pET-28a上,诱导重组质粒转化菌表达,SDS-PAGE分析目的蛋白表达情况,Western-blot检测表达蛋白免疫活性,亲和层析纯化表达蛋白。用SPA标记胶体金,分别以纯化E融合蛋白和羊抗猪抗体为检测线和质控线制备胶体金试纸,用所研制的试纸检测猪血清样品40份,并与IDEXX ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果表明:成功表达E融合蛋白,表达蛋白具有良好的反应原性,纯度为90%;制备的胶体金试纸与IDEXX ELISA试剂盒检测符合率为92%。说明该种方法可检测PRRSV抗体。 相似文献
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应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,在玻璃纤维膜上包被胶体金标记PCV-2抗原(cap蛋白),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被PCV-2抗原(cap蛋白)和PCV-2单抗,制成猪圆环病毒2型抗体免疫金标检测试纸条。该试纸条与猪圆环2型抗体酶联免疫检测试剂盒对比,符合率为94.7%,整个实验过程只需15 min,与ELISA试剂盒比较,具有操作方便、快速、直观的优点。 相似文献
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利用多肽抗原建立同时检测 CSFV 和PRRSV 抗体的胶体金免疫层析方法 总被引：1，自引：0，他引：1
利用合成多肽作为抗原,建立一种同时检测猪瘟病毒（CSFV）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的胶体金免疫层析方法。用人工筛选合成的 CSFV 多肽和 PRRSV 多肽葡聚糖偶联物作为包被抗原,以多肽-Biotin-链霉亲和素作为胶体金标记物,羊抗猪 IgG 包被硝酸纤维膜作为质控带,建立了同时检测CSFV 和 PRRSV 抗体的胶体金免疫层析方法（GICA）。结果表明,多肽与葡聚糖和生物素的偶联效率较高,分别为84．65％和91．37％;链霉亲和素与胶体金结合最佳 pH 和最佳标记量分别为8．2μg／mL 和30μg／mL。试纸卡灵敏度试验表明,血清1∶80稀释仍可检出,与 Idexx ELISA 试剂盒检出结果基本一致,特异性良好,不与伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒和细小病毒的阳性血清发生交叉反应。与 Idexx ELISA 试剂盒平行检测结果表明,CSFV 抗体总体符合率为86．36％;PRRSV 抗体总体符合率为83．33％。说明利用偶联多肽制备的试纸卡灵敏度高,特异性好,能够同时检测两种病毒抗体,适于基层养殖场使用。 相似文献
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【目的】制备恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)新盐并考察其溶解性,旨在提高ENR的溶解度,丰富其晶体形式。【方法】采用混悬法制备ENR新盐,并通过溶剂挥发法培养其单晶。利用粉末X射线衍射(PXRD)、单晶X射线衍射(SXRD)、傅里叶红外光谱(FTIR)、差示扫描量热分析(DSC)、热失重分析(TGA)和扫描电子显微镜(SEM)对新盐进行一系列表征分析。通过粉末溶解速率试验考察ENR和新盐在37 ℃、pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶解速率。【结果】制备的ENR新盐为ENR-2,6-二羟基苯甲酸半水合物(ENR-2,6-DHBA·1/2H2O)。经单晶结构分析可知,ENR-2,6-DHBA·1/2H2O属于三斜晶系,P-1空间群,晶胞参数为:a=13.2495(7)Å;b=13.8266(11)Å;c=16.0672(8)Å;α=114.301°(6);β=90.322°(4);γ=114.438°(7)。不对称单元中包含2个ENR阳离子、2个2,6-DHBA阴离子和1个水分子。2,6-DHBA羧酸基团的质子转移到ENR哌嗪环的N原子上,形成N+-H…O-,证实形成的是盐,ENR与H2O通过O-H…O氢键连接。FTIR结果证实,2,6-DHBA上的C=O吸收峰由于质子的转移由1 680 cm-1移动到1 725 cm-1。新盐的熔点不同于ENR和2,6-DHBA,为253 ℃。新盐的外貌形态为光滑的棒状。粉末溶解速率曲线显示,ENR-2,6-DHBA·1/2H2O平衡时的表观溶解度为0.65 mg/mL,是ENR的1.86倍。【结论】试验成功制备了ENR-2,6二羟基苯甲酸半水合物盐,该盐提高了ENR的溶解度,为提高ENR的生物利用度、增强抗菌效应提供了参考依据。 相似文献
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【目的】探讨奶牛脂肪间充质干细胞（bovine adipose-derived mesenchymal stem cells,bAD-MSCs）对氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力的影响。【方法】使用0、5、25、50、100、200 μmol/L H2O2处理奶牛子宫内膜上皮细胞2、4、6、8、12 h后,通过MTT试验检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）水平来筛选H2O2诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的最佳条件。在细胞划痕试验中设立对照组、H2O2组、bAD-MSCs共培养组（1∶0.5）、bAD-MSCs共培养组（1∶1）、奶牛乳腺上皮细胞（MACT）共培养组（1∶0.5）和MACT共培养组（1∶1）共6组,分析奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力,并利用Western blotting检测细胞外蛋白调节激酶（Erk）和磷酸化细胞外蛋白调节激酶（pErk）蛋白的表达水平。【结果】MTT试验结果显示,4~12 h内50 μmol/L H2O2组细胞存活率为50%~80%,适用于构建氧化应激模型。流式细胞术结果显示,用50 μmol/L H2O2刺激奶牛子宫内膜上皮细胞2 h时,ROS水平显著高于对照组与4、6、8、12 h组（P<0.05）。划痕试验结果显示,与对照组相比,H2O2组奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移能力显著降低（P＜0.05）;与H2O2组相比,bAD-MSCs共培养组奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移能力均显著增加（P＜0.05）,MACT共培养组细胞迁移能力均显著降低（P＜0.05）。Western blotting结果显示,与对照组相比,H2O2组奶牛子宫内膜上皮细胞中pErk蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与H2O2组相比,bAD-MSCs共培养组奶牛子宫内膜上皮细胞中pErk蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,MACT共培养组细胞中pErk蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。【结论】50 μmol/L H2O2处理2 h可成功构建奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型,bAD-MSCs可促进氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移并参与调控Erk蛋白的表达。 相似文献
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【目的】 研发犬轮状病毒（Canine ratavirus,CRV）免疫学诊断试剂,制备并鉴定CRV特异性单克隆抗体,建立可用于检测CRV的胶体金免疫层析法。【方法】 以CRV临床分离株SL006株为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,用杂交瘤细胞法进行细胞融合,通过间接免疫荧光法（IFA）筛选可稳定分泌CRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备腹水,亲和层析法进行纯化获得单克隆抗体。对获得的单克隆抗体进行鉴定,经条件优化建立胶体金试纸条检测方法,对试纸条的灵敏度、特异性、重复性和应用情况进行评价。【结果】 获得了4株杂交瘤细胞,分别命名为2C12、4A5、1H3、5F3,IFA效价分别为1：6 400、1：12 800、1：1 600和1：3 200;重链亚类分别为IgG2b、IgG2a、IgG1和IgG2a,轻链亚类均为kappa;制备的胶体金试纸条检测线包被单克隆抗体4A5,对照线包被羊抗鼠IgG,金标垫包被胶体金标记的单克隆抗体2C12,对CRV病毒液的检测灵敏度为104.2 TCID50/mL,检测犬源其他病毒犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）、犬副流感病毒（Canine parainfluenza virus,CPIV）、犬腺病毒Ⅰ型（Canine adenovirus-Ⅰ,CAV-Ⅰ）、CAV-Ⅱ、犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）病毒液及CRV阴性肛拭子和阴性粪便均为阴性;批内和批间重复性良好;利用制备的胶体金试纸条和RT-PCR方法对47份样品进行检测比较,两者符合率为93.6%。【结论】 本研究建立的CRV胶体金试纸条检测方法具有良好的敏感性、特异性、重复性,与RT-PCR方法符合率较高,可为CRV的临床快速诊断提供有效的检测方法。 相似文献
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【目的】 研究硒化大蒜多糖（sGPS）对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响,以期为硒化大蒜多糖的作用挖掘和临床应用提供依据。【方法】 依次通过分离、纯化得到大蒜多糖（GPS）,并经硝酸-亚硒酸钠硒化修饰得到sGPS3、GPS5和sGPS6。以小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,用6.25、12.5、25、50、100 μg/mL sGPS3、GPS5、sGPS6及10 μg/mL脂多糖（LPS组）处理小鼠腹腔巨噬细胞48 h,同时设置不加药物的细胞为对照组,用中性红法测定其吞噬功能,CCK-8法测定其増殖能力,筛选出活性最好的硒化大蒜多糖;然后用ELISA法检测活性最好的硒化大蒜多糖对巨噬细胞上清液中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、白介素-12（IL-12）含量的影响;再通过小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验测定空白对照组（生理盐水）及高（2 mg/mL）、中（1 mg/mL）、低（0.5 mg/mL）剂量活性最好的硒化大蒜多糖的吞噬指数与吞噬百分率。【结果】 除6.25 μg/mL sGPS3外,6.25、12.5、25、50和100 μg/mL sGPS3、sGPS5、sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞的A490 nm值均显著高于对照组（P<0.05）,其中,50和100 μg/mL sGPS6组的A490 nm值显著高于LPS组（P<0.05）,因此选用sGPS6进行后续试验;12.5、25、50和100 μg/mL sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞上清中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著高于对照组,25、50和100 μg/mL sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞上清中IFN-γ、IL-12显著高于对照组（P<0.05）,其中100 μg/mL sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞上清中NO、TNF-α、IL-12显著高于LPS组（P<0.05）。2和1 mg/mL sGPS6组的吞噬指数和吞噬率均显著高于空白对照组（P<0.05）。【结论】 硒化大蒜多糖能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和増殖能力,促进细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌。 相似文献
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【目的】 探究硫化氢（H2S）对顺铂诱导的犬急性肾损伤（AKI）的影响。【方法】 将18只健康成年比格犬随机分为对照组（C）、顺铂组（cis）和硫化氢+顺铂组（H+cis）,每组6只。对照组犬经头静脉注射生理盐水,cis组犬经头静脉注射5 mg/kg顺铂,H+cis组犬在注射顺铂前30 min经头静脉注射1 mg/kg NaHS溶液,每隔24 h注射1次,一共3次。注射顺铂72 h后对犬进行麻醉,静脉采血用于检测血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）,HE染色观察各组肾脏病理变化,生化试剂盒检测犬肾脏中谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢（H2O2）和一氧化氮（NO）含量,实时荧光定量PCR和Western blotting法检测犬肾脏中白介素-1β（IL-1β）、IL-10、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子-κB （NF-κB）、环氧合酶2（COX2）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、IL-6、IL-4的相对表达量。【结果】 cis组Scr和BUN水平极显著高于对照组（P<0.01）,H+cis组Scr和Bun水平极显著低于cis组（P<0.01）。病理检测结果显示,cis组犬肾脏组织发生明显病理学变化,而H+cis组犬肾脏组织病理变化有所减轻。生化检测结果表明,与C组相比,cis组肾脏中GSH含量极显著下降（P<0.01）,H2O2和NO含量极显著增加（P<0.01）;与cis组相比,H+cis组犬肾脏中GSH含量极显著上升（P<0.01）,而H2O2和NO含量极显著下降（P<0.01）。实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果表明,与C组相比,cis组促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB和COX2的mRNA和蛋白相对表达量均显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）,而抗炎因子IL-4和IL-10的mRNA和蛋白相对表达量均极显著下降（P<0.01）;与cis组相比,H+cis组犬肾脏中抗炎因子IL-4和IL-10的mRNA及蛋白表达量极显著升高（P<0.01）,而促炎因子IL-β、IL-6、TNF-α、NF-κB和COX2的mRNA及蛋白相对表达量均极显著下降（P<0.01）。【结论】 H2S通过提高肾脏抗氧化能力,抑制炎症因子表达来改善顺铂诱导的犬AKI。 相似文献
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本研究旨在调查活性氧过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）对猪卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）过程中蛋白质类泛素SUMO-1表达及精-卵结合能力的影响。试验分为0（control）、10、50、75和100 μg/mL H2O2处理组。利用Western blotting、流式细胞术、实时荧光定量PCR、Hoechst染色等方法检测猪卵母细胞体外成熟、蛋白质类泛素SUMO-1含量、细胞活力、凋亡基因mRNA表达、透明带（zona pellucid,ZP）溶解度和精子-卵母细胞结合的表达。结果表明,75 μg/mL H2O2组与对照组、10和50 μg/mL H2O2组比较卵母细胞体外成熟率及细胞活力显著降低;75 μg/mL H2O2组与其他H2O2组相比ZP溶解时间显著延长,并减少了精子黏附在成熟卵母细胞透明带上的数量（P<0.05）。在77和18 ku处出现SUMO-1蛋白标记,75 μg/mL H2O2组与对照组、10和50 μg/mL H2O2组比较SUMO-1蛋白含量显著降低（P<0.05）。75 μg/mL H2O2与对照组、10和50 μg/mL H2O2组比较显著下调了Bcl-2基因,而Caspase-3基因表达与对照组和10 μg/mL H2O2组比较显著升高（P<0.05）,50 μg/mL H2O2与对照组和10 μg/mL H2O2组相比显著上调了Bax基因水平（P<0.05）。综上所述,H2O2能调控猪卵母细胞体外成熟过程中类泛素化水平以及精-卵结合能力。 相似文献
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In order to develop a sensitive and specific method for the detection of estradiol residues (E2) in milk, a colloidal gold immunochromatographic method was established. Colloidal gold particles were prepared by trisodium citrate reduction method and labeled with rabbit polyclonal antibodies (PcAb) by physical adsorption method. After optimization of reaction conditions such as the amount of coating antigen and labeled antibody to assemble test strip, the sensitivity, specificity, repeatability and accelerated preservation of the test strip were determined. The estrogen analogue cross reaction and milk matrix interference reaction were also measured. The results showed that the optimized concentration of E2-OVA antigen was 2 mg/mL and the optimized antibody concentration was 20 μg/mL, visual detection limits of E2 was 10 μg/L in PBS within 10 min. The cross reaction rate of this method with estriol was 40%, there were no negligible cross-reactivities with other estrogen compounds including estradiol valerate, estradiol benzoate, estrone, diethylstilbestrol, quinestrol, ethinyloestradiol and nonylphenol. Milk samples only needed two times diluted before analysis, and the results could judge by naked eye after 10 min with cut-off of 20 μg/L. The results demonstrated that the developed method was suitable for rapid on-site screening of E2 residues in milk samples. 相似文献
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利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。 相似文献
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【目的】 建立基于绵羊肺炎支原体表面脂蛋白P60的间接ELISA方法。【方法】 利用生物信息学软件对P60蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性最佳的区域,扩增目的基因后构建重组表达载体并进行基因测序,将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导抗原性最佳蛋白表达并进行诱导时间优化;利用SDS-PAGE分析该蛋白分子质量大小及其表达形式。以重组蛋白作为抗原,绵羊肺炎支原体阳性血清作为抗体,通过Western blotting方法分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立抗原性最佳蛋白的间接ELISA抗体检测方法,用该方法对20份阴性血清进行检测,计算阴阳临界值;检测该方法的特异性、敏感性和重复性,并用建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份绵羊临床血清样本进行检测。【结果】 经DNAStar分析,P60蛋白第58－928位氨基酸区域的平均抗原指数在0.8~1.7之间,亲水指数为0~2.0,证明该区域(P6058aa-928aa)抗原性和亲水性较强;通过PCR扩增得到P6058aa-928aa基因,并构建重组表达载体,通过基因测序证明该重组表达载体与预期结果一致。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导浓度为1 mmol/L,诱导10 h时蛋白表达量较高,蛋白分子质量为42 ku,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达;Western blotting结果表明,构建的重组蛋白具有良好的反应原性。对ELISA各条件进行优化结果显示:抗原包被浓度为0.5 μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶100,最佳孵育时间为1.5 h,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4 000,判定阴阳性血清的临界值为0.36。对口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、牛支原体(Mb)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)的标准阳性血清的检测均为阴性,证明该方法特异性较强;敏感性试验结果表明,血清稀释度为1∶2 048时仍为阳性;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均<10%,证明该方法具有较好的重复性。利用所建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份羊血清检测结果表明,二者的阳性符合率为81.6%,阴性符合率为92.6%,总符合率为88.0%。【结论】 本研究建立的间接ELISA方法可用于临床样本的检测,为绵羊肺炎支原体的疫苗免疫效果评价和疾病诊断提供了较为可靠的方法。 相似文献