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1.
【目的】建立巨噬细胞免疫抑制模型,探究菊苣酸(cichoric acid, CA)对磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard, PM)诱导巨噬细胞免疫抑制的作用及调控机制,为将CA开发为临床防治免疫抑制性疾病的新型药物提供理论依据。【方法】以巨噬细胞源性外泌体为研究对象,采用ExoQuick免疫沉淀试剂盒提取外泌体,用透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)、纳米颗粒跟踪分析技术(nanoparticle tracking analysis, NTA)、Western blotting鉴定外泌体形态、粒径大小与浓度,以及表面标志蛋白CD63、HSP90的表达。同时,采用浓度为3μmol/L的PM诱导巨噬细胞24 h,建立免疫抑制模型后,给予低、中、高剂量CA(25、50、100μmol/L)进行干预,通过CCK-8测定细胞活力、中性红检测细胞吞噬能力及NTA测定外泌体粒径大小与浓度,研究CA介导外泌体增强免疫的作用机制。【结果】提取的巨噬细胞源性外泌体杯状形态完整,粒径在30～200 nm之间,标志蛋白表达清晰,具有良好的生物... 相似文献
2.
为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)中PDGF-BB m RNA及蛋白表达的影响,本研究采用热灭活的不同浓度的S.aureus菌液(0、105、106、108cfu/m L)作用于BMEC,分别在不同时间点(6 h、12 h、24 h、48 h)利用荧光定量PCR和western blot方法检测PDGF-BB m RNA及其蛋白的相对表达量。结果显示,不同浓度菌液处理组的PDGF-BB m RNA相对表达量随着作用时间延长表达量升高(p0.05)。6 h处理组随着菌液浓度的升高,PDGF-BB m RNA的相对表达量呈升高趋势;12 h处理组随着菌液浓度的升高,PDGF-BB m RNA的相对表达量呈降低趋势;24 h和48 h处理组105cfu/m L菌液处理组PDGF-BB m RNA相对表达量最高(p0.05)。同时,各时间点不同浓度菌液处理组PDGF-BB蛋白的相对表达量和m RNA表达基本一致。本研究表明,热灭活的S.aureus能够促进BMEC PDGF-BB m RNA和蛋白的表达。 相似文献
3.
为探讨猪脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)来源外泌体对脂肪源神经干细胞(neural stem cells, NSCs)诱导的调控作用，采用含20 ng/mL表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、20 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)和2%B27的无血清DMEM/F12培养基，将ADSCs诱导成细胞球，通过免疫荧光技术检测神经干细胞标记蛋白巢蛋白(Nestin)和神经干细胞RNA结合蛋白(Musashi1)的表达，提取ADSCs外泌体，通过纳米粒径跟踪分析(NTA)和透射电镜技术对外泌体进行检测，PKH67染色后荧光显微镜观察ADSCs对外泌体的摄取情况，外泌体与ADSCs共培养作为试验组，不加外泌体作为对照组，qPCR检测外泌体对Nestin和Musashi1基因表达的影响。结果显示：ADSCs经诱导培养获得细胞球，免疫荧光检测显示所获得的细胞球Nestin和Musashi1抗体阳性，表明为诱导形成了神经干细胞；提取的AD... 相似文献
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溶血毒素是一种胞外毒素,是金葡菌主要毒力因子之一.金葡菌人源菌株多数产α-溶血素,而从动物分离的菌株多产β-溶血素,但是引起奶牛乳腺炎的金葡菌中α、β型未见相关报道.试验根据GenBank公布的α和β溶血素序列,设计双重PCR引物,对在山东省内20多个规模化奶牛场乳腺炎病例中分离得到的金葡菌提取模板,检测奶牛乳腺炎金葡菌溶血素基因型,为研制奶牛乳腺炎金葡菌基因工程疫苗提供科学的依据.试验建立了双重PCR快速检测金葡菌溶血毒素分型的方法,此法特异性好,准确性高,检测快速,证实应用此法对奶牛乳腺炎金葡菌溶血毒素进行分型是可行的. 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(8):1307-1311
为研究金黄葡萄球菌(S.aureus)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)E-cadherin表达的影响,分别采用金黄葡萄球菌及热灭活的金黄葡萄球菌菌液作用于BMEC。金黄葡萄球菌以MOI 100∶1分别感染细胞0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0h,热灭活的金黄葡萄球菌菌液以不同浓度(0,104,105,106,107,108 CFU/mL)刺激细胞,之后利用实时荧光定量PCR方法和Western blot方法检测E-cadherin mRNA及其蛋白的相对表达量。结果显示:金黄葡萄球菌在感染细胞2h之后,E-cadherin mRNA及其蛋白的表达量较未感染组显著降低(P0.05);不同浓度的热灭活的金黄葡萄球菌菌液处理细胞的E-cadherin mRNA及其蛋白的表达量较对照组显著降低(P0.05)。本研究表明,金黄葡萄球菌及热灭活的金黄葡萄球菌菌液均能够降低奶牛乳腺上皮细胞E-cadherin mRNA及其蛋白的表达。 相似文献
6.
《畜牧兽医学报》2016,(10)
旨在获得耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)诱导牛乳腺上皮细胞炎症反应的关键分子标志物。本研究以牛乳腺上皮细胞系Mac-T为试验材料,利用MRSA进行体外感染,通过与普通金葡菌感染组及未感染组进行比较,检测隐性乳房炎候选基因TRAPPC9、JAK2及炎症指示因子IL-6基因在MRSA感染不同时间点的基因表达量。结果显示,与未感染的对照组相比,MRSA菌株体外感染Mac-T细胞6h时,TRAPPC9基因表达量显著降低(P0.05);感染8h时,JAK2基因表达量显著降低(P0.05);金葡菌菌株感染Mac-T细胞6h时,TRAPPC9与JAK2基因表达量均显著降低(P0.05)。与普通金葡菌相比,经MRSA处理6和10h时,Mac-T细胞的TRAPPC9、JAK2及IL-6基因表达量均较高,且感染6h时,MRSA处理组TRAPPC9基因表达量显著高于金葡菌处理组(P0.05)。结果表明,MRSA及金葡菌感染Mac-T细胞后,3个基因表达变化规律基本相似,MRSA菌株感染更不易引起宿主细胞JAK2基因表达量的变化,而TRAPPC9基因则可作为MRSA金葡菌及普通金葡菌感染的首选分子标志物。 相似文献
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为分析囊型包虫原头蚴(PSC)分泌的外泌体(Exosome)对树突状细胞(DCs)活化和分泌细胞因子的影响,本研究采用高速离心法结合外泌体提取试剂盒分离原头蚴分泌的外泌体(PE),收集的PE沉淀中加入去离子水低渗裂解离心,提取超滤后的蛋白浓缩液即为原头蚴外泌体超滤裂解物(PEL)。利用免疫磁珠从健康ICR小鼠脾脏中分选DCs,分别加入PE、LPS、PEL、PBS进行刺激培养,24 h后收集培养细胞及培养上清,利用流式细胞术检测DCs表面活化分子的表达水平及细胞因子分泌情况。结果显示:4组DCs表面表达CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的比例相比,PEL组结果明显高于PE组,这两组较PBS组均显著升高(p<0.05),但3组均低于LPS组。PE、PEL组DCs培养上清中IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α均显著高于PBS组,且PEL组IL-12、TNF-α高于PE组,IL-6、IL-10水平低于PE组。以上结果初步证实PE能刺激DCs活化和释放细胞因子,低渗裂解超滤提纯外泌体蛋白并去除miRNA成分的PEL能够更有效激活DCs活化和促进细胞因子释放,表明外泌体蛋白可诱导抗感染免疫应答,exosomal miRNA成分可能参与虫体免疫逃逸。本研究为后续进一步探索包虫感染及抗感染免疫应答机理提供实验依据。 相似文献
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为研究重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA及蛋白表达的影响,本研究采用组织块法体外培养和纯化出BMEC。以不同浓度(0、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL)重组人TNF-α作用BMEC,分别于不同时间(12 h、24 h、48 h、72 h)采用实时荧光定量RT-PCR和western blot方法检测α-SMA mRNA相对表达量及其蛋白表达。结果显示,α-SMA mRNA相对表达量12 h TNF-α处理的各组及24 h,10 ng/mL处理组与对照组相比差异显著(p<0.05);随着TNF-α浓度的升高,α-SMA mRNA的相对表达量呈升高趋势;48 h和72 h处理组与对照组相比差异不显著。表明TNF-α对BMECα-SMA mRNA的表达有一定促进作用。然而,α-SMA的蛋白表达量却很低,只有24 h 10 ng/mL处理组检测到目的蛋白的表达。研究表明,外源性TNF-α能够促进BMECα-SMA mRNA和蛋白的表达。 相似文献
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旨在探究金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，简称金葡菌）对小胶质细胞α干扰素（interferon α，IFN-α）生成的影响，本研究先用金葡菌感染BV2细胞，检测IFN-α的mRNA表达、分泌到细胞培养液上清的量以及TBK1/IRF3通路的激活情况，再分别用TBK1抑制剂BX-795和amlexanox、NF-κB抑制剂IMD-0354处理细胞，检测TBK1/IRF3的激活以及IFN-α水平。结果表明，BV2感染金葡菌后，IFN-α转录水平在3~12 h升高，6~12 h释放量增加，呈剂量依赖性，TBK1和IRF3的转录水平和蛋白水平未发生变化，但在1~12 h其磷酸化水平升高，表明金葡菌激活BV2细胞TBK1/IRF3通路，BX-795、amlexanox和IMD-0354处理细胞后，IRF3磷酸化水平降低，IFN-α生成减少，表明TBK1和NF-κB参与金葡菌促进BV2细胞生成IFN-α。综上所述，金葡菌感染BV2后促进IFN-α生成，且该过程依赖于TBK1和NF-κB，本结果为临床防治中枢神经系统感染金葡菌提供了可能靶点和理论基础。 相似文献
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Differentially expressed genes associated with Staphylococcus aureus mastitis of Canadian Holstein cows 总被引：1，自引：0，他引：1
To study pathway specific gene expression within the immune-endocrine axis of dairy cows with Staphylococcus aureus mastitis, mRNA was collected from blood mononuclear cells (BMCs) and milk somatic cells (MSCs) of cows (n = 7) identified as culture positive for S. aureus and their matched negative control cows (n = 7) with no evidence of S. aureus mastitis. Labeled cDNA probes derived from BMCs and MSCs of infected and healthy cows were applied to a bovine immune-endocrine cDNA array containing 167 genes. Genes with a log2 ratio ≥ 0.5 were considered to be up-regulated and genes with a log2 ratio ≤ −0.5 to be down-regulated. In total, 22 genes were differentially displayed in BMCs and 16 genes in MSCs of case versus controls. Expression of selected genes in BMCs and MSCs were confirmed by real-time PCR. The RT-PCR results were highly correlated with microarray measurements. Some of these genes, such as interleukin (IL)-8 have been previously implicated in other bacterial diseases, and are known to regulate immune responses; whereas, others may reflect novel pathways or genes involved in progressive mammary gland disease. For example, IL-18 was up-regulated in BMCs but not MSCs of mastitic quarters, while IL-17 was more highly expressed in MSCs compared to BMCs. This study identified a number of differentially expressed genes associated with bovine S. aureus mastitis and demonstrates the intricacy of the patterns of gene expression that influence host response to a complex pathogen of significant relevance to both human and veterinary medicine. 相似文献
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【目的】 为开发噬菌体"鸡尾酒"制剂防治奶牛乳腺炎提供生物学材料。【方法】 以实验室分离的奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌82为宿主菌,通过点滴法和双层平板法在奶牛场的污水、弃奶和粪便混合物中分离并纯化其噬菌体,通过噬菌斑及透射电子显微镜对该株噬菌体的形态特征进行观察。利用核酸酶处理分析该噬菌体核酸类型,并对其裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性、pH稳定性进行研究。【结果】 分离筛选出金黄色葡萄球菌82的裂解性噬菌体P82,电镜下观察其头部为二十面体,大小约为120 nm×83 nm,有一条带可伸缩尾鞘的长尾,长约126 nm,属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科。通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其核酸类型为双链DNA （dsDNA）。噬菌体P82的最佳感染复数为0.001,对奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌裂解率为36.51%（23/63）,宿主谱较广;其生长潜伏期约为25 min,爆发期约为45 min,裂解量约为74 PFU/cell;在pH 4.0~12.0时活性稳定,在pH 2.0和13.0时则完全失去活性。噬菌体P82热稳定性较高,在70 ℃作用60 min后仍有裂解能力,在80 ℃作用40 min时则失去裂解能力。【结论】 本研究分离的噬菌体P82效价较高、裂解能力强、增殖速度快、噬菌谱广,对不同温度和pH均有较好的耐受度,能作为专一性裂解奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌的噬菌体候选株,可与其他噬菌体混合制成噬菌体"鸡尾酒"制剂用于防治奶牛乳腺炎,为奶牛乳腺炎的噬菌体疗法提供材料。 相似文献
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【目的】 了解西南边境地区牛感染中山病病毒（Chuzan virus,CHUV）的情况。【方法】 应用BHK21细胞对云南景洪、江城采集的312份健康黄牛血液样品盲传分离病毒,对出现细胞病变的毒株进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定,对分离到的病毒进行S7、S2基因序列测定和比对分析。【结果】 4份血液样品可致BHK21细胞病变,电镜观察病毒颗粒呈球形,直径约50 nm;琼脂糖凝胶电泳发现,4株分离毒株基因组为10节段,带型为"3-3-4",与2012年云南师宗分离的CHUV SZ187毒株相似;4株病毒S7、S2基因核苷酸序列相似性分别为98.7%~99.7%和97.9%~99.1%;S2基因片段核苷酸和氨基酸序列与中国本土分离的SZ187、GHN-GS-16等毒株相似性最高;S7基因片段核苷酸和氨基酸序列与日本分离的ON-1/E/18、ON-3/E/17及中国本土的SZ187、GHN-GS-16等毒株的相似性最高。S7、S2基因遗传进化分析结果显示,4株新分离毒株亲缘关系最近;4株毒株的S7基因序列与中国本土和日本分离的已知帕利亚姆血清群病毒（Palyam serogroup virus,PALV）毒株位于同一分支,提示4株毒株为PALV,且形成一簇,有一定的地域性;4株毒株S2基因片段核苷酸序列与中国本土分离的CHUV位于同一分支,亲缘关系较近,进一步证实这4株毒株为CHUV。【结论】 本研究首次报告了从云南边境地区牛群中分离到CHUV毒株,为CHUV在中国的流行病学和边境地区疫病风险防控提供了重要参考及有力依据。 相似文献
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【目的】探明新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌流行情况及耐药性,为该地区生乳中金黄色葡萄球菌的监测及保障生乳质量安全提供理论依据。【方法】试验随机从南北疆规模化奶牛场采集110份生乳样品。采用增菌培养、分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定及PCR法对奶样中金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并利用微量肉汤稀释法及PCR方法对金黄色葡萄球菌进行16种抗菌药物的耐药表型及耐药基因分析。【结果】从110份奶样中分离出18株金黄色葡萄球菌,分离株呈浅黄色、光滑凸起的圆形菌落,革兰氏染色镜检呈紫色、短链状排列的革兰氏阳性菌,生化试验结果符合金黄色葡萄球菌生化特点,经16S rDNA及nuc基因PCR扩增鉴定为金黄色葡萄球菌,分离率为16.36%(18/110)。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌分离株对氨苄西林、青霉素及磺胺异噁唑具有较高的耐药性,耐药率分别为100%、83.33%和77.78%,而对万古霉素、复方新诺明、苯唑西林、头孢噻吩、头孢噻呋、利福昔明及环丙沙星7种抗菌药物高度敏感,敏感率分别为100%、100%、94.44%、94.44%、94.44%、94.44%和94.44%。其中有14株金黄色葡萄球菌为多重耐药菌,多重耐药率为77.78%。耐药基因检测结果显示,大环内酯类耐药基因ermB检出率最高,为50.00%,其次为β-内酰胺类耐药基因mecA,检出率为27.28%,磺胺类耐药基因Sul1的检出率为22.22%。【结论】新疆奶牛场生乳中分离的金黄色葡萄球菌的流行及耐药情况仍较严重,且存在多重耐药现象,因此,对生乳中金黄色葡萄球菌耐药性的监测有重要意义。 相似文献
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【目的】 分离鉴定武汉市患皮肤病犬猫细菌性病原,并探索其对传统抗菌药物与天然活性产物藤黄酸(GA)和6-溴靛玉红-3’-肟(BIO)的敏感性。【方法】 对患皮肤病犬猫采样并分离病原,通过生长特性观察、革兰氏染色镜检、PCR等方法鉴定并利用SPF小鼠验证致病性;通过药敏纸片验证其对传统药物的耐药性,并测定天然产物对其最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。【结果】 分离得到2株金黄色葡萄球菌、3株伪中间型葡萄球菌、2株猫葡萄球菌、1株犬链球菌及1株奇异变形杆菌。SPF小鼠皮肤创伤感染验证分离菌株均有致病性。犬链球菌及奇异变形杆菌对各自受试药物均敏感;葡萄球菌对复方新诺明、青霉素、红霉素、四环素、左氧氟沙星、苯唑西林、庆大霉素、克林霉素及氯霉素存在不同程度耐药。天然活性产物GA和BIO对上述9株菌均具有良好抑菌效果,且除分离菌株F5外GA对分离菌株的MIC值均小于BIO。【结论】 本研究共分离得到5种、9株犬猫皮肤细菌。犬链球菌、奇异变形杆菌对传统抗菌药物均敏感,部分葡萄球菌存在耐药。GA和BIO对犬猫皮肤病原菌均有明显抑菌活性,显示其可作为防控犬猫细菌性皮肤病的候选药物。 相似文献
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旨在探讨金黄色葡萄球菌（S.aureus）型和大肠杆菌（E.coli）型乳腺炎奶牛乳腺组织的炎症相关因子基因的mRNA转录水平。将105 CFU·mL-1的S.aureus和E.coli经乳导管分别注入奶牛乳房,在感染第7天采用活体无菌手术法采集乳腺组织,并采用组织HE染色和免疫荧光法进行乳腺炎模型的鉴定;利用qPCR分别检测了2个诱导组和对照组奶牛乳腺组织的趋化因子家族（CCL2、CCL8、CXCR1、CXCL2和CXCL13）、补体因子（CFI和CFB）、自噬调节因子DEPP1和白细胞介素受体IL21R共9个基因的mRNA转录水平。结果显示：与对照组相比,TLR4/NF-κB炎症相关信号通路中的关键分子（TLR4、NF-κB和TNFα）在2个诱导组乳腺组织中的蛋白表达水平均极显著上调（P<0.01）;结合HE染色结果,表明本试验成功构建了2种类型的奶牛乳腺炎活体模型。mRNA转录水平的检测结果表明,与对照组相比,7个基因（CCL2、CCL8、CXCR1、CXCL2、CFI、CFB和IL21R）在2个诱导组乳腺组织中的mRNA转录水平均极显著上调（P<0.001）,CXCL13的mRNA转录水平仅在S.aurues诱导组乳腺组织中极显著上调（P<0.01）;DEPP1的mRNA转录水平在2个诱导组中均极显著下调（P<0.01）。此外,CCL2、CCL8、CXCR1、CFI和IL21R共5个基因在E.coli诱导组中的mRNA转录水平均极显著高于S.aureus组（P<0.01）。S.aureus和E.coli感染均可导致奶牛产生严重的临床乳腺炎症状,并促使上述炎症相关基因的mRNA转录水平在乳腺组织中发生变化,以应对乳腺炎症的发生与发展过程;趋化因子CCL2等5个基因在E.coli诱导组中的mRNA转录水平显著高于S.aureus诱导组,解释了E.coli常常能引起急性乳腺炎,而S.aureus可引起慢性乳腺炎的原因。上述结果可为深入研究不同类型乳腺炎的分子调控机制提供参考。 相似文献
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ZHANG Hang LI Xinpu WU Xiaohu DING Xuezhi YAN Zuoting WANG Shengyi LI Hongsheng 《畜牧兽医学报》1956,51(11):2903-2910
The objective of the present study was to investigate the biofilm formation, antimicrobial resistance, virulence genes, and agr genotypes of Staphylococcus aureus (S. aureus) isolated from bovine mastitis cases, and to analyze the correlations between agr genotypes and virulence genes. Biofilm formation, antimicrobial resistance, and virulence genes for 336 strains of S. aureus were detected by microtiter plate method, disk diffusion method, and PCR respectively, and the agr typing of tested strains was determined by multiplex PCR. The results showed that all 336 strains of S. aureus from bovine mastitis were biofilm producers, among which 52.1% and 47.9% of isolates tested were moderate (++) and strong (+++) biofilm producers, respectively. Antimicrobial susceptibility testing demonstrated that S. aureus strains were highly resistant to penicillin, with a resistance rate of 91.7%, followed by erythromycin (89.6%), kanamycin (72.9%), clindamycin (66.7%) and gentamicin (60.4%). However, all isolates were sensitive to nitrofurantoin and linezolid. PCR results showed that the prevalence of fnbA gene was the highest (99.7%), followed by icaD (98.2%), icaA (89.6%), clfA (86.0%), cna (56.0%), and bap (14.6%) genes. Moreover, the sea, seb, sec and tst genes were found in 26.5%, 8.3%, 6.8% and 8.3% of the isolates, respectively. The agr typing results showed that S. aureus strains belonging to agr Ⅰ was predominant in our study, accounting for 77.1% of the isolates, and the frequencies of agr Ⅱ, agr Ⅲ and agr Ⅳ genotypes were 14.0%, 4.8% and 2.1%, respectively. Statistical analysis indicated that the strains of S. aureus belonging to agr Ⅰ genotype have the potential to carry more virulence genes, while no toxin genes could be found in any of the strains belonging to agr Ⅳ. The results revealed high antimicrobial resistance to common antimicrobial agents in S. aureus isolated from bovine mastitis milk samples. Moreover, agr Ⅰ was the predominant genotype with diverse toxin genes in S. aureus from bovine mastitis, and the potential hazard should be of concern. 相似文献
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【目的】 探索猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV） S蛋白的结构和功能,为建立PEDV感染的诊断方法和疫苗开发提供理论依据。【方法】 以PEDV经典CV777株为模板,通过PCR扩增获得S、S1基因片段;PCR扩增产物分别克隆pET-30a （+）原核表达载体和pFLAG-CMV-3真核表达载体,构建原核表达质粒pET-30a-PEDV-S和真核表达质粒pFLAG-CMV-3-PEDV-S1;将pET-30a-PEDV-S转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达PEDV-S重组蛋白,通过变性、复性、浓缩纯化重组蛋白并进行Western blotting检测;将PEDV-S重组蛋白免疫C57BL小鼠制备多克隆抗体,获得的多克隆抗体经间接免疫荧光试验（IFA）检测特异性,通过间接ELISA法检测多克隆抗体效价;将pFLAG-CMV-3-PEDV-S1转染至HEK293T细胞,以制备的多克隆抗体为一抗,经IFA测定PEDV-S1蛋白的抗原性和多克隆抗体的反应性。【结果】 成功克隆出PEDV S和S1基因,构建了可表达PEDV-S重组蛋白的原核表达质粒和在HEK293T细胞中高效表达S1蛋白的真核表达质粒;PEDV-S重组蛋白在IPTG为0.5 mmol/L、16 ℃诱导8 h条件下可获得最高表达量,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,PEDV-S重组蛋白成功表达;ELISA检测结果显示,制备的多克隆抗体效价达1：3 280 500;IFA结果显示,多克隆抗体有良好的特异性,可特异性识别PEDV-S和PEDV-S1蛋白。【结论】 本研究获得了PEDV-S重组蛋白,并成功表达S1蛋白,制备出PEDV-S蛋白多克隆抗体,为研究S蛋白的结构和功能提供了条件,为揭示PEDV致病机制奠定了基础。 相似文献
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旨在对牛源金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）的生物被膜、耐药性、毒素基因和agr基因型进行研究，并分析agr基因型与毒素基因之间的相关性。分别用微量滴定板法、药敏纸片法和PCR对S.aureus的生物被膜、耐药性和毒素基因进行检测，用多重PCR对S.aureus进行agr分型。结果表明，336株牛源S.aureus均能形成生物被膜，其中，形成中等（++）和强（+++）生物被膜的S.aureus分别占52.1%和47.9%。药敏试验结果显示，S.aureus对青霉素耐药最为严重，耐药率达91.7%，其次是红霉素、卡那霉素、克林霉素和庆大霉素，耐药率分别为89.6%、72.9%、66.7%和60.4%，而所有S.aureus对呋喃妥因和利奈唑胺均表现为敏感。PCR检测结果显示，黏附素基因fnbA检出率最高，达99.7%，其次是icaD、icaA、clfA和cna，检出率分别为98.2%、89.6%、86.0%和56.0%，bap基因检出率最低，为14.6%。肠毒素基因sea的检出率为26.5%，其次是seb（8.3%）和sec（6.8%），毒素基因tst的检出率占8.3%。分型结果显示，agr Ⅰ型S.aureus是主要的流行菌株，占77.1%，agr Ⅱ、agr Ⅲ和agr Ⅳ型S.aureus流行率分别为14.0%、4.8%和2.1%。统计分析结果表明，agr Ⅰ型S.aureus更具有携带多种毒素基因的潜力，而agr Ⅳ型S.aureus无毒素基因携带潜力。综上表明，牛乳腺炎性S.aureus对常见的抗菌药物耐药严重，毒素基因分布多样，agr Ⅰ型是奶牛乳腺炎性S.aureus主要的基因型，且具有携带多种毒素基因的能力，其潜在威胁应引起重视。 相似文献