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1.
将强启动子Ps插入载体7S中构建成插入载体7SP，将鸡马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白B（gB)基因和禽流感病毒（AIV）血凝素H9A基因共同克隆到插入载体7SP中，获得重且转移质粒7SPGA，通过酶切鉴定获得Ps-gB与P7.5-HA同向的转移质粒，再将报告基因盒PL11-LacZ插入转移质粒7SPGA得7SPLGA，将质粒7SPLGA与禽痘病毒疫苗株共转染鸡成纤维细胞，通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒rFPV-Ps-gB-P7.5-HA，以间接免疫荧光法证实gB基因和HA基因同时得到表达。该研究为探索新型基因工程苗打下了良好的基础。 相似文献
2.
【目的】构建传染性喉气管炎病毒(ILTV)的真核表达载体。【方法】从传染性喉气管炎病毒河南株(ILTV-XY)感染的鸡胚绒毛尿囊膜中提取病毒DNA,进行PCR扩增,PCR产物进行T-A克隆与测序,获得了鸡IL-TV-XYgB全基因序列;对ILTV-XY株gB基因与GenBank中读取的5株ILTVgB基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行了比较分析;并将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,对构建的重组质粒pcDNA3.1/gB进行酶切、测序鉴定。【结果】序列测定表明,gB全基因核苷酸长度为2 629 bp,编码873个氨基酸,推导氨基酸序列有8个潜在的N-糖基化位点,有12个与二硫键形成有关的半胱氨酸。与GenBank中读取的澳大利亚SA2疫苗株、辽宁疫苗株、烟台株、美国632强毒株、英国Throne强毒株gB基因进行比较,核苷酸序列同源性为99%以上,与ILTV-SA2株gB基因比较发现,ILTV-XY株gB基因核苷酸序列在第89位均缺失1个碱基G,而在第102位又都插入1个碱基A,从而引起该毒株gB基因推导的氨基酸序列中第28~32位5个氨基酸的移码突变。构建的重组质粒pcD-NA3.1/gB经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。【结论】成功构建了ILTV的真核表达质粒pcDNA3.1/gB,为ILTV核酸疫苗的研究奠定了基础。 相似文献
3.
根据已发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因序列,设计并合成1对引物,以河南分离株(ILTV-HN)接种10日龄鸡胚,从含痘斑的绒毛尿囊膜中提取基因组DNA扩增gB基因,将扩增片段克隆入pGEM-T Easy载体后,经蓝白斑筛选,菌液PCR和酶切鉴定为阳性的重组菌进行测序,结果表明克隆到ILTV-HN株gB基因,全长为2 629 bp,包含一个完整的开放阅读框.然后将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1-gB,转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过RT-PCR检测,转染细胞中含gB基因的mRNA,间接免疫荧光检测,结果表明gB基因在CEF细胞中进行了瞬时表达. 相似文献
4.
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2017,(1)
以表达EGFP报告基因的重组I型马立克病毒疫苗株(CVI988/Rispens)rMDV-EGFP为母本病毒,通过同源重组的方法用表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB和gD基因的表达盒替换病毒rMDV-EGFP中的EGFP报告基因表达盒,分别获得了表达gB和gD基因的重组马立克病毒rMDV-ILTgB和rMDV-ILTgD。经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,证明重组病毒中插入的目的基因大小正确,且能够表达gB和gD目的蛋白。免疫效力试验结果表明:与弱毒疫苗相比,重组病毒rMDV-ILTgB和rMDV-ILTgD均可对ILTV强毒攻击提供更好的免疫保护。重组病毒免疫组试验鸡不仅在发病率、致死率和攻毒后体重增长等指标方面与攻毒对照组均存在显著差异,而且与常规弱毒疫苗免疫组在致死率和攻毒后体重增长指标方面也存在显著差异。 相似文献
5.
根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的核苷酸序列,设计、合成1对引物,应用PCR扩增鸡ILTV河南株(ILTV-CG)gB基因.将扩增片段克隆入pGEM-T Easy载体后,经蓝白斑筛选,菌液PCR和酶切鉴定为阳性的重组菌进行测序.结果表明克隆到ILTV-CG株gB基因,全长为2 629 bp,包含一个完整的开放阅读框,共编码873个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有8个潜在的N-糖基化位点,有12个与二硫键形成有关的半胱氨酸.序列分析表明,ILTV-CG株gB基因与GenBank中读取的澳大利亚SA2疫苗株、辽宁疫苗株、烟台株、美国632强毒株、英国Throne强毒株gB基因核苷酸序列同源性为99%以上,与ILTV-SA2株gB基因比较发现,ILTV-CG株gB基因核苷酸序列在第89位均缺失1个碱基G,而在第102位又插入1个碱基A,从而引起该毒株gB基因推导的氨基酸序列中第28～32位5个氨基酸的移码突变. 相似文献
6.
牛传染性鼻气管炎（Infectious bovine rhinotracheitis,IBR）是牛的重要传染病，临床以呼吸道症状为主，伴有结膜炎、乳腺炎、流产等症状。其病原是牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV），又称牛疱疹病毒1型（Bovine herpesvirus 1,BHV-1），共编码30～40种结构蛋白，其中11种为囊膜糖蛋白。糖蛋白在病毒吸附、侵入宿主细胞的过程中发挥重要作用。糖蛋白gB对病毒侵入宿主细胞、在细胞间扩散及复制至关重要；糖蛋白gD在病毒复制、传播和感染机制方面作用重大，具有良好的免疫原性，是诱导产生中和抗体的主要糖蛋白。对gB、gD的研究不仅可从蛋白层面解析病毒侵染机制，还能够为牛传染性鼻气管炎的临床诊断和预防提供理论依据。本文针对牛传染性鼻气管炎病毒的主要糖蛋白gB、gD的研究结果进行综述，分析其生物学功能以及在疫苗和诊断方面的应用，以期为牛传染性鼻气管炎侵染机制和防控提供参考。 相似文献
7.
表达马立克氏病病毒gI基因的重组鸡痘病毒的构建 总被引：2，自引：1，他引：2
以马立克氏病病毒 (MDV) 648株基因组DNA为模板 ,用PCR方法扩增 gI基因 ,将其插入到鸡痘病毒转移载体pFG1 1 75 1 ,通过脂质体方法转染鸡痘病毒 (FPV)感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用蓝斑筛选方法纯化 4次 ,得到重组FPV ,用PCR方法证实 gI已插入到FPV基因组中 ,以间接免疫荧光试验鉴定重组FPV在CEF中表达了 gI基因 ,重组FPV命名为rFPVMDV648gI。 相似文献
8.
对鸡传染性喉气管炎疫苗的选择进行免疫分析。将分别含有鸡传染性喉气管炎病毒基因的空载体制例和重组真核表达质粒分别肌注到雏鸡内,与攻毒后对免疫保护的效果进行观察。攻毒后,免疫应答被重组质粒所诱导,免疫保护率为1.25%,此基因疫苗可作为预防鸡传染性喉气管炎的一个方向。在鸡传染性喉气管炎疫苗的免疫分析中,重组质粒在免疫效果上有着良好的作用,值得更加深入的分析和应用。 相似文献
9.
【目的】获得表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的HA基因,插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/HA。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA的重组禽痘病毒rFPV-HA。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒进行多次蚀斑克隆,并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中HA的表达产物进行鉴定。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因特异引物进行PCR,扩增出1条约1.7 kb左右的带。以间接免疫荧光法证实重组禽痘病毒能表达HA。【结论】成功构建了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒,且构建的重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA。 相似文献
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表达禽流感病毒核蛋白基因重组禽痘病毒的构建及其免疫保护性研究 总被引：5，自引：0，他引：5
从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1)核蛋白 (NP)基因的质粒pUCNP中切下NP基因片段 ,将其亚克隆到pSY5 38质粒 ,再将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因也平端克隆到pSY5 38质粒 ,然后切下同时含有NP及LacZ基因的片段 ,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY6 81,从而构建出表达核蛋白基因的重组禽痘病毒转移载体pSY(NP +LacZ)。应用脂质体介导的方法将转移载体转染已感染禽痘病毒S FPV 0 17的鸡胚成纤维细胞 ,在X gal存在的条件下 ,利用蓝白斑筛选、数轮蚀斑纯化以及PCR、Western blot鉴定 ,结果证明 ,获得了能高效表达AIVNP蛋白的重组禽痘病毒rFPV NP。SPF鸡体内的免疫保护试验结果表明 ,它能够诱导机体产生较高水平的NP特异性抗体 ,并对H5N1和H7N1这 2种亚型高致病力禽流感病毒的攻击提供一定的保护。 相似文献
11.
糖蛋白生物活性研究综述 总被引：1，自引：0，他引：1
糖蛋白是生物体内重要的生物大分子之一，它广泛存在于动物、植物和某些微生物中，甚至还存在于单细胞有机体和病毒中糖蛋白可分别以可溶性和不溶性形式存在干细胞外液和细胞间质中几乎所有合成蛋白质的细胞都会合成糖蛋白，随着糖生物学研究的迅速发展，使长期被忽视的糖蛋白已成为生物化学研究的中心，它吸引着许多学科，包括化学、生物学、生物化学、兔疫学、细胞生物学、医药学以及食品科学的工作者从事这一领域的研究。 相似文献
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超声波法提取河蚬糖蛋白 总被引：3，自引：0，他引：3
研究了超声波辅助法提取河蚬糖蛋白的工艺,以超声功率、提取时间、料液比、NaCl溶液浓度为考察因素,并采用正交实验设计L16(45)对河蚬糖蛋白的提取工艺进行优化设计。结果表明,超声波法提取河蚬糖蛋白的最佳条件:NaCl的浓度为0.2 mol/L,料液比为1∶20,超声时间25 min,超声功率1 200 W,河蚬糖蛋白的提取率为0.446 7%。NaCl溶液浓度和料液比对提取河蚬糖蛋白的影响分别为差异极显著和差异显著。超声波辅助提取河蚬糖蛋白可以降低能耗,缩短提取时间,糖蛋白提取率较高,因此可以作为提取河蚬糖蛋白的方法。 相似文献
13.
为评价鱿鱼M UCIN型糖蛋白的抗疲劳作用,分别以不同剂量的鱿鱼M UCIN型糖蛋白经口给予昆明小鼠连续灌胃4周,研究鱿鱼MUCIN型糖蛋白对小鼠负重力竭游泳时间,肝糖原（LC）、血糖（GLU）、血乳酸（LD）含量和血乳酸脱氢酶（LDH）活性等反映疲劳的生化指标的影响。结果表明,与对照组相比,中、高剂量组能明显延长小鼠力竭游泳时间;增加运动后小鼠LC的储备量和GLU含量,增强LDH的活性,降低LD的含量,减少乳酸在肌肉及血液中的堆积,延缓疲劳的发生。说明鱿鱼M UCIN型糖蛋白对小鼠具有较好的抗疲劳作用。 相似文献
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Cloning and Sequence of Glycoprotein H Gene of Duck Plague Virus 总被引：9，自引：0，他引：9
HAN Xian-jie WANG Jun-wei MA Bo 《中国农业科学(英文版)》2006,5(5):397-402
The glycoprotein H （gH） gene homologue of duck plague virus （DPV） was cloned by degenerate polymerase chain reaction （PCR） and sequenced. It was located immediately downstream from the thymidine kinase gene （TK）. In addition, the 3＇-end of the gene homologue to herpesvirus UL21 was located downstream from the gH gene. DPV gH gene open reading frame （ORF） was 2 505 bp in length and its primary translation product was a polypeptide of 834 amino acids long. It possessed several characteristics of membrane glycoproteins, including an N-terminal hydrophobic signal sequence, an external domain containing eight putative N-linked glycosylation sites, a C-terminal transmembrane domain, and a charged cytoplasmic tail. Comparison with other herpesvirus revealed identities of 20.2, 25.1, 23.0, 23.0, 26.5 and 26.0% with the gH counterparts of the human herpesvirus virus 1 （HSV1）, equine herpesvirus 4 （EHV4）, bovine herpesvirus 1 （BHV1）, pseudorabies virus （PRV）, gallid herpesvirus 2 （GHV2） and gallid herpesvirus 3 （GHV3）, respectively. 相似文献
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为比较不同狂犬病病毒株糖蛋白信号肽序列的差异,测定了2株固定毒(CVS、3aG株)及2株街毒(Sx、PB3)的糖蛋白核苷酸序列,并推导了氨基酸序列.DNAstar软件分析表明:2株街毒糖蛋白信号肽同源性为100％,2株固定毒株同源性为84.2％,街毒株与CVS、3aG的同源性分别为78.9％和73.7％;2株街毒的信号肽序列与NCBI收录的我国近年来分离的街毒株的序列完全相同;街毒株与常用疫苗株间的同源性介于68.4％ ～ 84.2％,疫苗株PV与SRV9、PV与ERA、PV与SAG同源性均为100％.对糖蛋白信号肽疏水区(-15位到-4位)的二级结构预测和疏水值计算显示,街毒株信号肽的二级结构和疏水值均与常用疫苗株和固定株存在明显差异;在N2A细胞上效价测定显示,2株街毒的效价明显低于2株固定毒. 相似文献
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狂犬病病毒糖/核融合基因原核表达克隆质粒的构建与分析 总被引：1，自引：1，他引：0
试验将编码狂犬病病毒的糖蛋白和核蛋白基因经PCR扩增后,通过限制性核酸内切酶风PstⅠ的酶切并以T4 DNA连接酶进行连接。将所获得的基因片断与pMD-18T载体连接。经转化到大肠杆菌JM109和质粒大量制备后,进行酶切和测序鉴定。结果表明：PCR扩增片段与文献报道的狂犬病糖蛋白和核蛋白核酸序列没有差异,所构建的克隆质粒正确,新构建的融合基因没有出现新的抗原位点。 相似文献
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利用RT-PCR方法从SRV9株细胞毒基因组RNA扩增G蛋白基因,然后将其克隆到p MD18-T载体上,将得到的重组克隆质粒SRV9G-p MD18T进行PCR和测序鉴定。结果表明:克隆的基因全长为1 609 bp,阅读框正确;将此SRV9株G基因亚克隆到供体质粒p Fast Bac Dual后获得了重组供体质粒SRV9G-p Fast Bac Dual;进而将重组供体质粒转化DH10Bac感受态细胞,经2次抗性、蓝白斑筛选及PCR分析后,获得重组穿梭质粒SRV9G-Bacmid;将其转染Sf9细胞48 h后,通过细胞形态学和重组杆状病毒负染电镜观察显示,杆状病毒转染成功;通过Western blot检测显示,Sf9细胞成功表达了SRV9 G蛋白。随后,利用Ex PASy服务器上的在线分析工具和生物信息学分析软件DNAStar对G蛋白的基本性质进行了分析。试验采用昆虫细胞Bac-toBac杆状病毒表达系统,成功表达出G蛋白,并对其进行了生物信息学分析,为蛋白纯化及狂犬病诊断试剂盒的进一步研制奠定了基础。 相似文献