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1.
2.
以pcDNA3.1-pIL-18为模板,采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18(IL-18)的成熟蛋白基因,通过KpnⅠ+SacⅠ双酶切及连接反应,构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中的基因片段连接正确。之后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、1.0mmol/L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS—PAGE分析,在分子质量约为33ku处出现了预期的目的蛋白。用8mol/L脲对表达产物变性,经Ni^2+NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。Western—blot分析证实,纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。 相似文献
3.
猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18。将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。SDS-PAGE及W estern-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经N i-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。 相似文献
4.
从英国中心兽医实验室(CVL)引进禽流感病毒14种血凝素亚型(H1~H14)的标准毒株,经9~11日龄的SPF鸡胚增殖、传代后收取感染鸡胚的羊水及尿囊液,经1000xg离心15分钟后,收取上清作为免疫原。取8只12周龄SPF鸡分成A、B两组,进行人工感染鸡的抗体消长规律试验。选用H3毒株制备的免疫原,按1ml/只的剂量翅静脉接种A、B两组的8只SPF鸡,1周后B组的4只鸡复免一次,分别用HI和AGP试验测定2种方法免疫鸡的抗体水平.监测结果表明:经1次免疫的鸡(A组)于免疫后15天HI抗体升至最高,以后抗体逐渐下降,且产生的抗体个体差异不大,AGP试验结果只有于免疫后20~55天内全部为阴性;经重复免疫的鸡(B组),于初免后15~45天内HI抗体都维持较高水平,且产生的抗体个体差异不大,AGP试验结果在初免疫后1575天内全部为阳性。据此,我们根据禽流感病毒株毒力的强弱(参照其EID50,用纯化后的鸡胚尿囊液制备的免疫原,按05~25ml/只的剂量分别免疫12周龄SPF鸡,1周后加强免疫一次于二免后10~15天放血,制备出禽流感病毒14个血凝素亚型的分型血清,并有霍乱滤液(RDE)法对血清进行了处理。 相似文献
5.
禽流行性感冒 (简称禽流感, Avian Influenza,AI)被国际兽疫局定为 A类传染病,同时被列入国际生物武器公约动物类传染病名单,是由 A型流感病毒引起的禽类的烈性传染病,可表现为亚临诊到轻度的呼吸系统疾病、产蛋下降到急性致死性疾病等多种形式。在禽流感发现后的一百多年中,世界各地都有特定毒株引起的禽流感暴发和流行,造成了巨大经济损失。禽流感在我国鸡群出现的时间虽短,但已经并正在给我国养禽业造成巨大经济损失,很可能成为下个世纪威胁我国养禽业的头号大敌。禽流感历来被认为是人流感病毒发生变异的新基因来源, 1997年… 相似文献
6.
应用琼扩试验检查鸡病毒性关节炎 总被引:12,自引:0,他引:12
用禽呼肠孤病毒 U.Conn.S.1133株进行的人工感染试验表明,该毒株可侵犯鸡的关节滑膜和腱鞘、跖关节和跗关节,在炎症的局部渗出有少量黄色或带血色的渗出物,少数病鸡出现脓性渗出物。用该毒株感染的鸡胚的尿液或尿囊膜成功地试制出了琼扩试验抗原,用于检查人工感染鸡有明显的特异性,感染鸡抗体的持续期也较长,人工感染后3个月内100%呈阳性反应。用琼扩试验对少数地区的一些鸡场进行血清学调查,证明在我国的某些鸡场中存在病毒性关节炎,污染场的阳性率为6~16%. 相似文献
7.
用鸡胚致死孤儿病毒感染的鸡胚尿液研制了琼扩试验抗原,用于检查人工感染鸡,表现明显的特异性反应,感染鸡抗体的持续期较长,人工感染后3个半月100%呈阳性反应。抗体的最高滴度可达64倍。用琼扩试验证明,在一些地区的鸡场中有腺病毒感染,污染群的阳性率为8~46%。 相似文献
8.
随着信息技术的飞速发展,社会对大学生的信息技术应用能力提出了更高的要求.作为农业院校的机械类专业,在学生信息技术应用能力培养方面与重点高校,或是理工院校相比都存在着明显的差距.本文是在分析了农业院校机械类专业学生信息技术应用能力培养现状的基础上,从改革教学内容、创新教学手段、转变教育理念等三个方面,分别提出八点具体的建议和措施,并在教学活动中进行实践.通过实践,学生的信息化意识和能力有了显著提高,也证明了这些建议和措施是可行的. 相似文献
9.
10.
用接种新城疫病毒克隆30株、鸡传染性支气管炎病毒F株(或M株)和病毒性关节炎病毒S-1133株的含毒鸡胚尿液制成三联油乳剂灭活疫苗。本苗接种于3~4周龄鸡和成鸡后10天产生免疫力。保护率达90~100%。免疫期达5个月以上。自1983~1991年,用本苗在黑龙江、广东、辽宁、山东、广西、浙江、河北、吉林等16个省免疫接种26万余只鸡。获得满意结果。 相似文献