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提高昆虫杆状病毒表达系统重组蛋白表达水平的技术 总被引：1，自引：0，他引：1
昆虫杆状病毒表达系统已广泛用于各种重组蛋白的生产。然而,由于各种因素重组蛋白的表达量远远达不到理想的水平。提高重组蛋白的表达水平成为提高昆虫杆状病毒表达系统效率的核心问题。根据目前的研究,提高外源基因表达水平的技术主要包括抑制目的蛋白降解、合理调控目的基因的转录、优化启动子类型以及利用活体昆虫而非培养细胞,如用家蚕幼虫或蛹进行表达等。这些技术也为家蚕成为更加高效的生物反应器奠定了基础。 相似文献
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干扰素-γ(IFN-γ)是免疫反应中重要的免疫调节因子,对多种免疫细胞具有激活作用.利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕中高效表达具有活性的人γ干扰素(hIFN-γ),首先根据家蚕密码子偏好性对hIFN-γ的编码基因进行优化合成,将优化合成后的序列克隆到杆状病毒转移载体pBR中,然后与orf1629基因缺失的失活拯救型杆状病毒BmBacmid共转染BmN细胞,获得重组病毒reBmBac-hIFN-γ,最后利用获得的重组病毒感染家蚕并收获表达产物.采用微量细胞病变抑制法,在Vero/VSV-GFP系统中检测到重组hIFN-γ 的效价达到(3.69±2.02)×106 IU/mL.此外,重组hIFN-γ可以抑制猪蓝耳病病毒(PRRSV)在Marc-145细胞中的增殖.上述结果为利用家蚕生物反应器高效生产具有活性的人γ干扰素奠定了试验基础. 相似文献
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《蚕业科学》2015,(4)
将优化合成的猫ω型干扰素基因Fe IFN-ω2和Fe IFN-ω9克隆到杆状病毒转移载体p VL1393的多角体蛋白基因启动子下游,与orf1629基因缺损的家蚕杆状病毒Bm-Bacmid DNA共转染Bm N细胞进行同源重组,将获得的重组病毒感染家蚕5龄幼虫,利用家蚕生物反应器表达猫ω型干扰素。采用微量细胞病变抑制法在CRFK细胞/VSV*GFP系统上检测家蚕幼虫血淋巴中表达的重组猫ω型干扰素具有抗病毒活性,其中表达产物重组Fe IFN-ω2的抗病毒活性可达6.3×105U/m L,而重组Fe IFN-ω9的抗病毒活性较低。研究结果为利用家蚕生物反应器生产重组猫ω型干扰素生物制剂奠定了一定的试验基础。 相似文献
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家蚕Polh+ Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的构建 总被引：5，自引：4，他引：1
为利用杆状病毒的强启动子——多角体启动子而构建的重组杆状病毒一般是多角体缺失型(polh-)病毒。为了解决家蚕生物反应器规模化生产中病毒必需经皮接种而效率低下的问题,在建立家蚕Bac-to-Bac快速表达系统的基础上,构建了能形成多角体的家蚕Polh+ Bac-to-Bac表达系统。通过该系统能够产生表达外源目的基因的重组病毒,获得的该重组病毒能在培养细胞内表达,也能通过经口添食感染表达。利用EGFP报告基因分析了该系统的表达效果,构建的重组病毒不仅有效表达了EGFP蛋白,还在细胞核中形成了大量多角体。该系统较好解决了重组病毒必需经皮接种感染的缺陷,提高了生产效率,拓宽了杆状病毒在生物杀虫剂、基因治疗等领域的应用前景。 相似文献
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动物乳腺生物反应器在现代生物制药中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
目的基因在乳腺中表达的转基因动物称为动物乳腺生物反应器(mammary gland bioreaetor),又称为动物个体乳腺表达系统.动物乳腺生物反应器出现于20世纪90年代初,它是一项利用转基因动物的乳房代替生物发酵,大规模生产供人类疾病治疗和保健用的生物活性物质或药用珍稀蛋白的现代生物技术,其核心内容是利用乳蛋白基因的乳腺特异性调控成分驱动外源基因在动物乳腺中高效表达,以期通过源源不断地回收乳汁来提取大量有重要药用价值的生物活性外源蛋白.因此,动物乳腺生物反应器在现代生物制药领域中具有广阔的开发前景. 相似文献
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本研究以重组病毒rSj14NPV为感染病毒,通过比较纯化蛋白的产量,对家蚕作为生物反应器生产基因工 程产品的适宜蚕品种与相关的重组病毒接种技术进行了比较研究。研究结果表明:871×872、秋风×白玉为表达 Sj14的适宜蚕品种;重组病毒接种量与蛋白表达量有关,适宜接种量为4～5μL/蚕;适宜接种时间以5龄2日龄为 优;以家蚕表达外源基因,最好将重组病毒以家蚕细胞复苏后再接种家蚕以保证获得较高的表达效果。 相似文献
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家蚕丝腺拥有较强合成丝蛋白的能力,通过利用这一能力,使其能够大量生产有价值的蛋白,人们开始引入转基因家蚕,使它能够在丝腺中合成重组蛋白并分泌到蚕茧中。获得的重组蛋白可在生物学、生物技术,和药学领域中得到广泛应用。我们通过控制合成蛋白在丝腺中的定位,在后部丝腺(PSG)中表达重组蛋白使其定位在不能溶解的丝素中,在中部丝腺(MSG)中表达则定位于亲水外层的丝胶层中。本文主要讨论将转基因家蚕丝腺生物反应器作为优良工具,应用于大量生产药用蛋白和在工业化水平生产相关重组蛋白的可能性,以及生产重组蛋白过程中所面临的挑战和未来的应用前景。 相似文献
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中国农科院的科学家日前研制出饲料用基因工程酵母。中国农科院饲料研究所和生物技术研究中心 ,从 1996年开始合作进行利用生物反应器大规模、低成本生产饲料添加剂植酸酶的研究、从黑曲酶中克隆了适合在饲料中使用的植酸酶基因。我国饲料资源缺乏 ,饲料添加剂品种少 ,该项研究成果可用来大规模廉价生产新型饲料添加剂———植酸酶。植酸酶是一种能将饲料中植酸水解成无机磷和肌醇的新型单胃动物饲料添加剂。这种饲料添加剂可提高动物对磷的利用率 ,使畜禽粪便中磷的排出量减少 40 %～ 75 % ,能减轻江河等环境的磷污染 ,减少饲料用磷消耗。… 相似文献
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本文就家蚕核型多角体病毒BmNPV的生物学特性及其作为表达载体的优点、家蚕生物反应器的原理、生产程序、特点、优化表达策略以及在基因工程疫苗生产中的应用作了较为详细的阐述。 相似文献
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《江西畜牧兽医杂志》1999,(6)
中国农科院的科学家日前研制出饲料用基因工程酵母。中国农科院饲料研究所和生物技术研究中心，从１９９６年开始合作进行利用生物反应器大规模、低成本的生产饲料添加剂植酸酶的研究，从黑曲酶中克隆了适合在饲料中使用的植酸酶基因。我国饲料资源缺乏，饲料添加剂品种少，该项研究成果可用来大规模廉价生产新型饲料添加剂———植酸酶。植酸酶是一种能将饲料中的植酸水解成无机磷和肌醇的新型动物饲料添加剂。这种饲料添加剂可提高动物对磷的利用率，使畜禽粪便中磷的排出量减少４０％～７５％，能减轻江河等环境的磷污染，减少饲料用磷消… 相似文献
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家蚕杆状病毒(BmNPV)生物反应器规模化生产技术 总被引：1，自引：0，他引：1
将现有成熟的栽桑养蚕技术与尖端的生物工程技术嫁接、融合一体的"家蚕生物反应器"是新兴的高科技生物产业,为古老的养蚕业注入了新的活力.饲育生物反应器蚕的附加值远远高于丝茧育.经过2002年较大规模的生产实践,提出有关饲育家蚕杆状病毒生物反应器生产技术的初步意见. 相似文献
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家蚕(Bombyx mori)是重要的经济昆虫,也是生物学研究的模式生物之一,中国在2004年率先发布家蚕基因组框架图,为中国在家蚕分子生物学领域占领了一个制高点。继框架图之后,进行转基因家蚕研究具有重要的理论意义和实用价值,这不仅可以帮助我们了解家蚕基因的结构、功能及表达调控的机制,同时也为研究家蚕生物反应器生产目的蛋白,培育家蚕抗病性新品种,改善蚕丝质量等提供了新的技术途径。本文将重点从家蚕功能基因组的研究、家蚕丝腺生物反应器的应用研究及转基因技术培育家蚕新品种三个方面对家蚕转基因技术的应用进行介绍。随着家蚕转基因技术的深入研究,转基因家蚕技术及产物将会在未来有着更广阔的应用前景。 相似文献
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半胱氨酸蛋白酶基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达 总被引：2，自引：0，他引：2
为了探讨杆状病毒的致病机理、改善杆状病毒表达系统的表达效率 ,将来源于家蚕核型多角体病毒ZJ8株的半胱氨酸蛋白酶 (cystenineprotease,CP)基因克隆到转移载体pVL 1393上 ,获得重组转移载体pVL cp ,与线性化的Bm BacPAK6病毒DNA共转染家蚕Bm 5贴壁细胞。通过蓝白斑筛选、纯化后得到的重组病毒经PCR鉴定证明 ,cp基因已被正确导入 ,注射感染家蚕 5龄幼虫 12 0h后表达产物活性达到最高。对表达产物进行SDS PAGE及酶活力分析 ,检测到半胱氨酸蛋白酶在家蚕生物反应器中的表达 ,其表达量约为 16 0 0U/mL。 相似文献
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《蚕业科学》2017,(5)
正1 MA S Y,XIA X J,LI Y F,SUN L,LIU Y,LIU Y Y,WANG X G,SHI R,CHANG J S,ZHAO P,XIA Q Y.Increasing the yield of middle silk gland expression system through transgenic knock-down of endogenous sericin-1.Mol Genet Genomics,2017,292(4):823-831题目利用转基因技术下调丝胶蛋白sericin-1的表达提高家蚕丝腺表达系统中外源蛋白质的产量摘要迄今为止已建立了多种转基因生物反应器来满足日益增长的外源重组蛋白表达需求。家蚕丝腺是一种潜在的可商业化应用,大规模、低成本生产重组蛋白的高效生物反应器。但是,由于用现有家蚕丝腺表 相似文献