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研究了金属离子与血清蛋白形成配合物的条件,探讨了用金属离子-蛋白质配合物消除毛细管区带电泳中管壁吸附作用的方法,并将之成功应用于人血清中药物成分的分离。试验证明,血清蛋白与多种金属离子能不同程度地形成配合物,除Mg2+外,所选金属离子与血清蛋白形成配合物的优先顺序为Zn2+>Cu2+>Cd2+>Co2+>Fe3+>Cr3+>Mn2+>Ca2+>Ni2+;配合物的稳定性取决于介质的pH、温度和金属离子的浓度,其适宜范围分别为pH=6～8,温度40～50℃,金属离子浓度10～30mg/L;金属离子与蛋白质的作用有效地解决了管壁吸附问题,铜和锌离子-蛋白质配合物既不影响药物成分的分离,也不降低毛细管分离效能;分离血清中药物成分的图谱基线稳定,各成分的迁移时间在连续3周的多次实验中重复性好,相对标准偏差在0.14%～0.36%。 相似文献
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建立了有效分析浅玫瑰色链霉菌菌体全蛋白质的方法,使用分离范围为p H 4~7的IPG胶条、2D clean-up试剂盒法纯化方法、80μg蛋白质上样量和银染的双向电泳技术,获得了低背景、高分辨率和重复率、无明显条纹的浅玫瑰色链霉菌全蛋白质双向电泳图谱。通过Image Master2D Platinum7.0软件对壳聚糖诱导条件下浅玫瑰色链霉菌菌体总蛋白质的电泳图谱进行匹配分析,在诱导菌株图谱上有723±14个清晰可见的蛋白质点可供差异分析。与未诱导菌株的双向电泳图谱对比结果显示:18个蛋白质点在诱导菌株中差异表达,其中14个蛋白质点的表达量上调,4个蛋白质点的表达量下调,选取10个差异表达量在5倍以上的蛋白质点进行质谱鉴定,结果显示,延长因子Tu、RNA聚合酶、分子伴侣等蛋白在壳聚糖诱导下表达量增加,表明它们在浅玫瑰色链霉菌代谢壳聚糖的过程中起重要作用。 相似文献
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本文探索了利用超声波细胞破碎仪提取柑橘果肉中水溶性蛋白质的方法,并对流动相及波长等色谱条件进行优化,建立了反相高效液相色谱分离柑橘果肉水溶性蛋白质的技术。优化后的色谱条件为:流动相A为0.05%三氟乙酸甲醇溶液,B为0.05%三氟乙酸水溶液,A液100%～72%,梯度洗脱45 min,再用A液平衡10min,流速为1.0 mL/min,进样量为20μL,检测波长为270 nm。从7个柑橘品种的果肉中共分离出20个不同的蛋白质峰,图谱中各品种的特有蛋白质反映了不同品种不同表型性状的重要信息。 相似文献
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比较了4类色谱柱分离枣果中熊果酸、齐墩果酸的效果.结果表明,BDS型色谱柱分离枣果中熊果酸、齐墩果酸的效果优于ODS型色谱柱,C18型液相色谱柱分离枣果中熊果酸、齐墩果酸的效果优于CN型液相色谱柱.4种色谱柱中,分离效果最好的是反相柱填料为Hydersir BDS C18(250 mm ×4.6 mm,5μm)的色谱柱;最佳分离条件为:柱温18℃,压强2 MPa,流速0.6 mL/min,流动相甲醇与水的体积比为93:7,磷酸含量300 mg/kg,进样量5μL.该条件下,金丝小枣样品中齐墩果酸和熊果酸可得到良好分离. 相似文献
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《沈阳农业大学学报》2015,(5)
为开展山定子(Malus baccata Borkh.)根系蛋白质组学研究,以当年生15片真叶的山定子实生苗白色幼嫩根系为试材,采用TCA-丙酮沉淀法、酚抽提法和Trizol抽提法3种方法提取其总蛋白质,并对样品上样量、IPG胶条的p H值范围和等电聚焦参数进行优化,建立适用于山定子根系的双向电泳技术体系。结果表明:采用Trizol抽提法提取的蛋白质产率最高,可达3.15mg·g-1FW,且其SDS-PAGE图谱明显优于其他两种方法 ;选用800μg的上样量,17 cm p H值4~7的IPG胶条和改进后的等电聚焦程序所得到的二维电泳图谱蛋白点最多,最清晰,分辨率最高。 相似文献
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采用毛细管区带电泳法建立喀什树莓酒的HPCE指纹图谱,电泳条件为：石英毛细管柱（50 cm×75μm）,运行电压17 kV,运行缓冲液为50 mmol/L硼砂,其中含10%甲醇,检测波长260 nm,室温。在此条件下,建立了10批树莓酒的指纹图谱。结果表明,10个批次的样品之间有9个共有指纹峰,这9个成分得到了较好的分离,相似度评价结果良好;因此,HPCE指纹图谱分析法可作为喀什树莓酒的质量控制方法。 相似文献
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培养液体积对猪孤雌胚早期发育的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
为了探讨培养液体积对猪早期孤雌胚发育的影响,旨在优化猪早期胚胎培养体系。试验一、二、三、四分别把30、20、15、10个枚孤雌激活胚放入60,45,30,15,10,5μL(10个胚胎)的培养滴,第48小时观察分裂率,第168小时观察囊胚形成率。结果表明:试验一:30~60μL组囊胚率略高于10~15μL组;试验二:60μL组的囊胚率略高;试验三:各组分裂率和囊胚率差异不显著(P>0.05),但45~60μL组分裂率和囊胚率比其他组略高;试验四:15μL组分裂率高于45μL组(P<0.05),15μL组囊胚率显著高于5μL组(P<0.05),其余各组差异不显著。由此表明:30枚猪孤雌胚时,胚胎数∶培养滴体积=1∶(1~2)较好;15~20枚猪孤雌胚时,胚胎数∶培养滴体积=1∶3较好;10枚猪孤雌胚时,胚胎数∶培养滴体积=1∶1.5较好。 相似文献
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珙桐基因组DNA的提取及ISSR-PCR体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
采用改良的CTAB法提取珙桐基因组DNA,并采用正交试验设计方法优化其ISSR-PCR反应体系。结果表明：改良CTAB法提取基因组DNA的质量符合ISSR-PCR扩增反应的要求。最佳反应体系为：20μL反应液中含有2.0μL10×buffer、2.75 mmol/L Mg^2＋、0.125 mmol/L dNTPs、0.7μmol/L引物、0.75 UTaq酶和40 ng模板;PCR反应参数为：94℃5 min;94℃30 s,53.2℃45 s,72℃1 min,共40个循环;72℃7 min。 相似文献
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[目的]建立大体积进样堆积-毛细管电泳（LVSS-CE）法,富集并测定独一味全草中槲皮素、木犀草素、芹菜素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的含量。[方法]分离条件为：背景电解质为30 mmol/L硼酸盐溶液（pH 9.0）,含8%（V/V）乙腈,分离电压20 kV,检测波长为210nm。进样堆积过程为：流体动力进样5 000 Pa×250 s,施加-25 kV至基质完全排出,20 kV进行分离。[结果]木犀草素-7-O-葡萄糖苷、芹菜素、木犀草素和槲皮素的堆积因子分别达到33、31、50和51,最低检测限分别为10.0、4.5、2.5、2.5μg/L。与常规电泳流体动力进样5 000 Pa×3 s相比,该法提高检测灵敏度300~800倍。[结论]该法简单易行,结果准确度高,精密度好,可用于检测药物中低含量的黄酮类化合物。 相似文献
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椰子基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以椰子叶片为实验材料,探索了椰子基因组DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了椰子的优化反应体系和程序。试验最终建立的椰子RAPD反应总体积为20μL,各有关成分的最佳浓度分别为Mg2＋2.5 mmol/L,Taq DNA0.75 U,dNTP 0.2 mmol/L,Primer 1μmol/μL,模板DNA2.5 ng/μL。PCR循环程序为：94℃预变性1.5min;94℃变性20 s,36℃退火20 s,72℃延伸45 s,35个循环;最后72℃延伸3 min。 相似文献
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【目的】探索适合宁夏枸杞果实细胞壁蛋白提取方法,为后续进行宁夏枸杞蛋白质组学研究提供技术支持。【方法】以宁夏枸杞果实为试验材料,采用六步洗脱法去除胞浆蛋白,然后通过定量和电泳比较氯化钙提取法、氯化锂提取法、氯化钙加氯化锂结合提取法和苯酚提取法对细胞壁蛋白的提取效果,通过双向电泳与液相色谱对所得细胞壁蛋白进行验证。【结果】六步洗脱法可较好地除去胞浆蛋白与其他干扰物质,4种方法对宁夏枸杞果实细胞壁蛋白的提取效果排序为:氯化钙提取法（272μg/g）>苯酚提取法（261μg/g）>氯化钙加氯化锂结合提取法（217μg/g）>氯化锂提取法（176μg/g）。裂解液I[7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、30 g/L 3-[3-（胆酰胺丙基）二甲氨基]丙磺酸内盐（CHAPS）、50 g/L二硫苏糖醇（DTT）]溶解蛋白质效果更优,蛋白质定量浓度更高、电泳条带更多、更清晰。氯化钙提取所得蛋白质样品双向电泳结果较好,蛋白质点数较多、清晰度和分辨率较高;通过液相色谱可看出氯化钙提取的细胞壁蛋白肽段种类多,且大部分相对丰度较高,并含有低丰度蛋白质。所测蛋白质分类中有细胞壁定位的蛋白质。【结论】氯化钙单独提取蛋白质样品的方法是宁夏枸杞果实细胞壁蛋白提取最优方法,所得蛋白质样品已达到进行蛋白质组学研究的标准。 相似文献
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沙棘属植物RAPD最佳反应体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
文章以大果沙棘品种"楚伊"为试材,对沙棘属植物RAPD分析的最佳反应条件进行优化。结果表明,沙棘属植物RAPD分析的最适反应体系为:体系总体积25·μL,DNA 30 ng,Taq DNA聚合酶1.0 U,dNTPs 1.0·μL(原液浓度2.0 mmol·L-1),Mg2+2.0·L(原液浓度25 mmol·L-1),引物3.0·μL(原液浓度为5 pmol.(3·L)-1),10×buffer 2.5·μL,不足的体积用超纯水补足。在最佳反应条件下,RAPD分析具有良好的稳定性和可重复性。 相似文献
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以分蘖洋葱幼嫩叶片DNA为试材,采用单因素试验,对ISSR-PCR扩增体系中的退火温度、模板DNA量、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量以及引物浓度等各因素进行优化.结果表明,在反应体系为25μL反应液中,包含DNA模板40 ng(2μL),10×PCR Buffer 3μL,Mg2+(2.5 mmol·L-1)2μL,dNTPs(2.5 mmol·L-1)3μL,引物(5 mmol·L-1)3μL,Taq酶(5 U·μL-1)0.4μL,退火温度为56℃时,分蘖洋葱ISSR-PCR扩增获得最佳效果,初步建立分蘖洋葱叶片最佳ISSR-PCR扩增体系,为ISSR分子标记技术应用于分蘖洋葱种群遗传多样性分析、遗传图谱构建、核心种质资源保存利用等奠定分子生物学的理论基础和技术支撑. 相似文献