延边黄牛体细胞核移植的研究进展     

徐礼杰  孙武胜  胡德宝  方南洙  李钟淑  李福俊 《中国畜牧兽医》2015,42(10):2739-2744

牛体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一套极其复杂的技术体系,它包括卵母细胞的成熟、供核细胞的准备、卵母细胞的显微操作、细胞融合、卵母细胞激活和胚胎培养。因此,许多因素影响着核移植胚胎发育。虽然陆续有克隆牛出生的报道,但是克隆效率依然低下。本综述对延边黄牛体细胞核移植体系的6个方面进行简单综述,以期为探究延边黄牛体细胞克隆的最优化条件、建立最优化的培养体系、提高克隆效率提供参考。  相似文献   

亮甲酚蓝对猪卵母细胞体外成熟及核移植胚胎发育能力的影响     

徐国旗  华再东  许生成  郑新民 《中国畜牧兽医》2016,43(3):754-760

试验旨在研究亮甲酚蓝(brilliant cresyl blue,BCB)染色对卵母细胞体外成熟及后期胚胎发育潜力的影响。本研究利用13、26、39 、52 μmol/L BCB对成熟培养前的卵丘－卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complexes,COCs)染色90 min,比较各组卵母细胞的着色率、成熟率及孤雌激活胚胎和核移植胚胎的发育情况。结果表明,随着BCB浓度的增加,COCs着色率依次增加(20.00%、46.39%、51.66%和59.03%),但猪卵母细胞体外成熟率逐渐降低(74.03%、72.16%、70.53%和48.61%);不同浓度BCB染色后所得BCB⁺组卵的成熟率均明显高于BCB^-组。试验结果发现,BCB浓度在26 μmol/L时,经染色的COCs既有较高的着色率,且不影响其体外成熟的效率。基于此,研究选取26 μmol/L BCB作为最佳浓度对猪卵母细胞进行染色筛选,然后进行体外培养、孤雌激活及核移植试验。结果显示,筛选的BCB⁺组卵母细胞的孤雌胚和核移植胚的卵裂率和囊胚率均显著高于BCB^-组(P<0.05),而与对照组间无显著差异(P>0.05)。胚胎移植试验挑选BCB⁺组中发育较好的1-2细胞期重组胚对5头代孕母猪进行了移植,其中2头怀孕,1头顺利产下了6头健康胎儿。综合以上试验结果表明,利用BCB染色可作为一种有效的方法筛选体外成熟质量较高的猪卵母细胞,同时提高胚胎体外生产效率。  相似文献   

影响体细胞核移植效率的因素   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘亚  章孝荣 《动物医学进展》2003,24(6):35-38

哺乳动物体细胞核移植 (克隆 )是近年来迅速发展起来的一项新技术 ,对濒危动物保护、优良种畜快速扩群以及核质关系的研究、药物试验等诸多领域都具有重大意义。但体细胞核移植是一项程序繁杂的工作 ,每一步操作所采用的试剂、材料和方案等都会影响到核移植效率 ,因而其影响因素十分众多。文章根据目前已有资料 ,论述了卵母细胞来源、卵母细胞与供体细胞的胞质容量、卵母细胞的去核方案、体细胞供体动物的年龄、供体细胞的组织来源与传代次数及供体细胞的冷藏、冷冻和所处的细胞周期阶段对核移植效率的影响。另外 ,对重组胚的融合 -激活方案、核移植方案及重构胚的培养方案对核移植效率的影响也作了简要论述。  相似文献   

体内、外卵母细胞对猪体细胞克隆胚胎发育潜力的影响     

华再东  郭帅  肖红卫  任红艳  张立苹  葛耀文 《中国畜牧兽医》2017,44(11):3143-3148

为探讨猪体内、外成熟卵母细胞对核移植重组胚胎发育能力的影响,试验通过激素促排获得体内成熟卵母细胞和收集废弃卵巢获取体外成熟的卵母细胞,分别构建核移植重组胚,比较其卵裂率、囊胚率及胚胎移植受孕情况。结果显示,PGC+PMSG+HCG组的平均排卵数（27.8枚/头）显著高于PGC+HCG （12.5枚/头）、PMSG+HCG （13.7枚/头）及自然发情组（11.5枚/头）（P<0.05）,体内收集到的卵母细胞,可用于构建核移植重组胚的可用卵率均达到90%以上,与其他处理组差异不显著（P>0.05）,说明通过激素处理可获得更多的可用卵母细胞,而且卵母细胞的质量没有显著差异;以体内和体外成熟卵母细胞作为核移植受体构建的克隆胚胎,二者的胚胎融合率（80.31%和79.29%）和卵裂率（90.40%和86.51%）差异均不显著（P>0.05）,但来自体内成熟卵母细胞克隆的胚胎发育至囊胚期的比例显著升高（P<0.05）;将体内、外成熟卵母细胞构建的核移植重组胚分别移植代孕母猪,头平均移植30或60枚时,体内成熟卵母构建的克隆胚胎移植出生仔猪10头,而体外培养卵母细胞构建的克隆胚胎均未着床受孕,表明通过激素促排获得的卵母细胞质量更好,能显著提高克隆胚胎的囊胚率,减少胚胎移植数量,提高代孕母猪的怀孕率。  相似文献   

奶牛卵母细胞化学激活与电激活比较研究   总被引：2，自引：1，他引：1  

马红 《中国草食动物》2009,29(3)

目前,体细胞核移植技术已在牛、羊、小鼠、猪等动物上获得成功, 然而该技术还存在许多问题,如核移植成功率普遍比较低、重构胚的发育率低、畸形胚的比率高等.影响这些问题的因素很多,其中就包括受体卵母细胞的体外培养成熟率和成熟质量[1]以及激活率[2]低下,本研究的目的就是探索出一套有效的牛卵母细胞体外成熟和激活的方法,为进一步的胚胎工程技术研究提供实验基础.  相似文献   

甘氨酸对猪卵母细胞体外成熟质量及卵丘细胞的影响     

王禹盟  齐佳佳  余思聪  郑鑫  李子跃  梁爽  李所 《中国畜牧杂志》2020,(2):88-92,96

本实验旨在研究甘氨酸对卵丘细胞及卵母细胞体外成熟质量的影响,优化猪卵母细胞体外成熟(IVM)培养体系。在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加6 mmol/L甘氨酸,体外培养至44 h后,通过倒置显微镜测量卵丘细胞扩散直径,结合流式细胞术与qPCR检测卵丘细胞凋亡情况;进一步检测成熟卵母细胞中谷胱甘肽(GSH)、细胞成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)水平及细胞成熟相关基因表达。结果表明:甘氨酸能显著提高卵丘细胞扩散直径,减少卵丘细胞的总凋亡率,并能显著提高卵丘细胞中Bcl-2的mRNA表达;甘氨酸能显著增加成熟卵母细胞中的GSH、MPF和MAPK水平以及成熟相关基因BMP15、GDF9、CyclinB1、CDK1、C-MOS的mRNA表达。综上可知,甘氨酸可提高猪卵母细胞体外成熟质量,降低卵丘细胞凋亡率。  相似文献   

不同供核细胞处理方法及激活时间对猪核移植重构胚发育的影响     

彭礼繁  罗光彬  李晟阳 《当代畜牧》2007,(8):30-32

利用屠宰场卵巢采集的卵母细胞经过去核、注核及激活等操作后,研究猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞,血清饥饿处理法及不同的激活时间等因素对猪核移植重构胚体外发育的影响。结果表明,猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞用作核供体与猪卵母细胞构建重构胚,在卵裂率上无显著性差异。作为供核细胞的猪成纤维细胞,经过血清饥饿与不经过血清饥饿培养,核移植重构胚的卵裂率无显著性差异(P>0.05)。在进行核注射后,使供核细胞与胞质受体作用适当的时间(1～6h)再进行激活,有利于重构胚的发育。  相似文献   

利用体内外成熟卵母细胞生产转TLR4基因抗病克隆绵羊的研究     

徐静  卓志勇  邓守龙  张运海  刘国世  连正兴  张金龙 《中国畜牧杂志》2013,49(7)

研究旨在提高羊的抗病性能、生产培育高抗病力的转基因羊。本实验分别利用绵羊超数排卵获得的体内卵母细胞和体外成熟培养的卵母细胞作为核受体进行转基因克隆羊的生产。体内超排共获卵2 431枚,其中可用卵77.29%(1 879/2 431);体外成熟培养共获卵3 292枚,其中可用卵70.90%(2 334/3 292)。体内外核移植实验分别获得体内重构胚1 879枚、体外重构胚1 786枚。结果表明:体内核移植重构胚融合率(81.12%)显著性高于体外核移植重构胚(68.88%)(P<0.05);将部分体内、外重构胚以手术法分别移植于89只及72只受体,体内重构胚移植妊娠率为10.11%,显著高于体外重构胚移植妊娠率(2.78%)。体内、外重构胚移植后各产羔1只,PCR检测均为转TLR4阳性。本实验初步建立了一套较有效的体内外核移植生产转基因克隆羊的方法,并比较了不同来源卵母细胞对核移植效率的影响,发现体内超数排卵所获取的成熟卵母细胞数量、质量均优于体外成熟培养获卵。  相似文献   

利用手工克隆技术培育体细胞克隆莱芜猪   总被引：1，自引：0，他引：1  

周荣  周秀  罗绿花  曾海玉  麦然标  余婉娴  贺晓燕  石俊松  吴珍芳 《广东畜牧兽医科技》2013,38(2):26-29

为探讨手工克隆技术在克隆中国地方猪种的可行性,本研究组利用手工克隆技术平台,以中国地方猪品种莱芜猪的耳皮肤细胞作为核移植的供体细胞,以体外成熟的猪卵母细胞为受体细胞,进行体细胞克隆猪培养,成功培育了25头克隆莱芜猪。表明手工克隆技术可应用于莱芜猪体细胞克隆,为莱芜猪的保种及育种提供了新的途径。  相似文献   

卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响     

岑文  华再东  郑新民  肖红卫  张立苹  吴民耀 《中国畜牧兽医》2015,42(3):638-643

为探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)的添加浓度及脱卵丘细胞时间对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响.试验通过在体外成熟液中添加不同浓度(0、10、15、20、30、40 ng/mL)的EGF来研究其对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响;在培养开始后的不同时间(18、24、38、44 h)进行脱卵丘细胞处理来研究不同时间脱卵丘处理对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响.结果表明,成熟培养基中添加10 ng/mL EGF能显著提高卵母细胞的卵裂率和囊胚率(P <0.05).共培组和独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞成熟率均低于44 h,但差异不显著(P >0.05);共培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率和囊胚率显著高于培养44 h(P <0.05);独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率与44 h无显著差异(P >0.05),但囊胚率显著高于培养44 h后脱卵丘细胞(P <0.05).添加10 ng/mL EGF对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育较好;卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞可提高孤雌胚胎早期发育能力.  相似文献   

小鼠-猪种间体细胞克隆试验     

王利勤  郭慧利  芮荣 《动物医学进展》2010,31(1):27-30

用3代~5代小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)作核供体细胞,体外成熟培养44 h~46 h、排出第1极体(PbI)的猪卵母细胞去核后,进行小鼠-猪种间核移植操作。Hoechst 33342染色检查去核效果,去核率为84.2%(27/32)。共培养68枚小鼠-猪种间核移植重构胚,其中48枚发生卵裂,卵裂率为70.6%,13枚胚胎发育至8-细胞,发育率达27.1%(13/48)。  相似文献   

猪卵巢卵母细胞体外成熟体系研究进展     

王自恒  林峰  陈玉霞 《畜牧兽医杂志》2004,23(6):14-18

猪卵母细胞体外成熟培养中存在的问题是如何进一步提高卵母细胞的采集效率、急待解决的问题是成熟率不高和成熟质量差的问题。综合论述了猪体外受精技术所包含的猪卵母细胞体外成熟(IVM)培养和受精卵的体外培养两项密切相关的技术与方法，以及完善现有的成熟体系及成熟过程。  相似文献   

成年体细胞核移植克隆猪     

张质莹  范衡宇 《中国畜牧兽医》2001,28(5):33-35

自 1 995年首次报道了通过分化的体细胞进行核移植来培育哺乳动物以来 ,人类已通过利用各种体细胞作为核供体成功地获得了绵羊、牛、小鼠、山羊。对猪而言 ,核移植的成功率明显低于其他动物。曾有报道说 ,将一个 4-细胞期卵裂球的核移入一个去核的卵母细胞中 ,获得了 1只小猪。但还没有利用二倍体或有丝分裂时期胎儿的成纤维细胞作为核供体而获得可成活后代的报道。现介绍一种通过培养成年动物体细胞来克隆猪的新的核移植方法。根据以前的结果 ,用发育至分娩的卵母细胞数来衡量体细胞核移植的有效率仅为 1 %～ 2 %。各种因素都在影响效率的…  相似文献   

猪体外成熟卵母细胞孤雌激活和胚胎培养的研究     

刘瑜琨  董振国  刘晓宁  张丽欣 《吉林畜牧兽医》2010,31(1):8-9,13

以猪体外成熟卵母细胞为实验材料,研究了不同激活方法、激活时间以及是否添加滋养层细胞的条件对猪成熟卵母细胞体外培养的影响。结果表明,Ionomycin+6-DAMP+CB法卵裂率高,且差异显著;使用6-DMAP激活3h的卵裂率要低于4h和5h组,且差异显著;在卵裂率、8细胞率和囊胚率上,添加滋养层细胞组与未添加滋养层细胞组之间无显著差异,但添加vero细胞后效果略好。  相似文献   

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响     

罗光彬  张晓华  李东全  朱增娟  袁水桥 《黑龙江畜牧兽医》2007,(7):41-42

促卵泡素(FSH)与促黄体素(LH)是参与卵母细胞成熟的最重要的蛋白质激素,在猪卵母细胞体外成熟培养中使用较多。大部分研究已经证实了促性腺激素(FSH、LH)在猪卵母细胞体外成熟培养中的重要作用。为进一步探讨FSH与LH对猪卵母细胞体外成熟的影响,确定其对猪卵母细胞体外成熟的作  相似文献   

Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响     

付博  马红  任亮  赵金凤  房庆昌  郭镇华  李忠秋  刘娣 《畜牧兽医学报》2010,41(8)

本研究旨在探讨Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响。收集屠宰场废弃卵巢,抽取卵母细胞。采用电激活联合化学激活的方法得到孤雌胚胎,同时用所得的卵母细胞与卵丘细胞构建猪体细胞核移植重构胚;并将所得的孤雌胚、核移植重构胚移入NCSU-23(培养液)中与Vero细胞共培养。结果,Vero细胞共培养组的囊胚率显著高于对照组(P0.05),各组囊胚细胞数无显著差异(P0.05)。结果表明,Vero细胞作为共培养体系中的滋养层细胞有利于猪胚胎的早期发育。  相似文献   

构筑山羊卵母细胞体外成熟体系的研究     

《中国草食动物科学》2017,(2)

在细胞核移植过程中,体细胞必须在卵母细胞内进行重编程以恢复其全能性,卵母细胞成熟度直接影响体细胞重编程,故卵母细胞体外成熟培养是体细胞核移植极其重要的环节,而卵母细胞又受环境、培养液浓度、培养温度等影响。文章通过探讨不同浓度的FSH和LH及HMG影响山羊卵母细胞体外成熟因素的研究,建立了山羊卵母细胞体外成熟体系,为山羊核移植及以后的优良育种奠定基础。  相似文献   

聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白对牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

毛晶  李钟淑  蔡文莲  胡艳明  祖晶  王士勇  方南洙 《黑龙江畜牧兽医》2008,(10)

为了比较不同浓度的聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、牛血清白蛋白(BSA)对牛卵母细胞体外成熟率、重组胚卵裂率和发育率的影响,试验采用抽吸法回收卵母细胞,用不同的无血清成熟液进行卵母细胞的体外成熟培养,然后对成熟卵母细胞进行核移植、融合、激活以及胚胎的体外培养.结果表明,适合延边黄牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的PVA、PVP和BSA的最佳浓度分别是1.0 mg/mL,0.3%和0.4%.  相似文献   

激活方法和共培养系统对牛核移植胚胎体外发育的影响     

《黑龙江畜牧兽医》2010,(13)

<正>影响体细胞核移植(SCNT)的因素很多,其中重组胚的激活和体外培养是影响核移植的重要因素。卵母细胞的充分激活是提高核移植效率的关键因素之一[1],只有在去核卵母细胞充分激活的基础上,去核卵才可以指导移入的核发生发育程序重编而开始  相似文献   

猪卵母细胞体外成熟培养的研究进展     

周荣  石俊松  王青来  蔡更元  吴珍芳 《广东畜牧兽医科技》2017,42(2)

猪卵母细胞体外成熟作为一种很重要的胚胎生物技术,具有重要的理论和实际意义。本文综述了猪卵母细胞体外成熟培养的发展历程、体外培养影响因素以及优化策略,为猪卵母细胞成熟培养提供参考依据。  相似文献