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1.
为观察致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05株生物被膜（BF）的形成能力并检测致羔羊脑炎粪肠球菌BF形成相关基因的携带情况,本研究以XJ05为研究对象,运用96孔板建立不同时间BF模型,染色后酶标仪测定D595 nm值,并用倒置显微镜观察BF形态。同时检测11株菌中与BF形成相关基因（gelE、esp、ace、asa1、asa373、efaA、ef0591、ef3314、ahrc、eep）的携带情况,并对相关基因片段做同源性分析。结果显示,在不同时间段XJ05株BF的生成量与空白对照组相比差异显著（P<0.05）,24 h时D595 nm值最高且与其他各个时间段相比均差异显著（P<0.05）。显微镜下观察6 h时BF初具规模,可见散落的网状结构,12~24 h矩阵网格结构明显,24 h时形成高度有序的网格结构,24 h后网状结构逐渐脱落,BF开始降解。11株菌中10种相关基因的携带情况不同,有6株携带8种基因,1株携带7种基因,1株携带6种基因,1株携带2种基因,有2株未检测到10种基因的任何一种。检出的基因片段同源性均在93.3%~100.0%之间。结果表明,XJ05株能形成完整的BF,11株分离的致羔羊脑炎粪肠球菌中有9株携带部分与BF形成相关的基因。 相似文献
2.
《动物医学进展》2016,(7)
为了检测绵羊脑炎李斯特菌生物膜形成情况并确定生物膜形成相关基因在该菌中的分布情况,采用结晶紫染色结合测定OD值的方法观察羊脑炎李斯特菌生物膜在不同时间段形成情况,并应用分子生物学方法检测生物膜形成相关基因(flaA、recA、relA、prfA、yneA、agrA、luxS、degU、motB、sigB、hpt)在该菌中的分布情况。结果表明,在37℃,绵羊脑炎李斯特菌生物膜在2h~8h的OD值与0h和对照组对比差异显著(P0.05),9h~48hOD值呈平稳趋势,与对照组比较差异显著(P0.05)。2h开始生物膜初具形态,呈现散落的网格结构,2h~6h矩阵网格结构明显,6h~8h形成高度有序的网格结构,9h~48h依然具备生物膜网状结构特征,但个别网状结构脱落。11种生物膜相关基因在绵羊脑炎李斯特菌中的检测结果为阳性,测序结果与GenBank公布的相应序列同源性为87.22%~99.29%。结果表明2h~6h生物膜进入黏附期和生长期,6h~8h进入成熟稳定阶段,9h~48h逐渐进入播散期;LM90携带11种与生物膜形成相关的基因。 相似文献
3.
禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素 总被引：2，自引：0，他引：2
为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(E.coli)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性E.coli其宿主体外BF最适形成条件是培养时间为48h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8h时开始起始粘附、24h形成若干微菌落、36h微菌落粘连、48h形成完整的BF、72h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究表明禽致病性E.coliBF的形成周期,并为抑制其形成提供了实验依据。 相似文献
4.
《黑龙江畜牧兽医》2020,(2)
为了研究cyaA基因缺失对XJ10的生化特性、生物被膜(BF)形成以及致病力的影响,试验将复苏后的XJ10和XJ10-ΔcyaA涂布于LB培养基,37℃培养过夜后观察菌落形态;通过生化鉴定仪对XJ10和XJ10-ΔcyaA的单菌落进行生化鉴定;采用96孔聚苯乙烯微孔板培养XJ10和XJ10-ΔcyaA,观察不同时间段BF形态;对昆明系小鼠进行腹腔注射,通过观察小鼠精神状态及死亡数来研究XJ10与XJ10-ΔcyaA的毒力。结果表明:与XJ10相比,XJ10-ΔcyaA的菌落形态未发生明显改变,但是生长缓慢,且直径明显小于XJ10的菌落; XJ10-ΔcyaA对蔗糖、侧金盏花醇、D-麦芽糖、β-半乳糖苷酶、D-甘露醇、D-海藻糖、D-山梨醇反应均为阴性,失去了对它们的利用能力;XJ10可以形成完整的BF,但XJ10-ΔcyaA未形成BF;小鼠毒力检测发现XJ10-ΔcyaA的致病性降低。说明cyaA基因可以影响XJ10对部分碳源的利用,缺失cyaA基因的XJ10的BF形成能力以及致病力都明显下降。 相似文献
5.
《中国预防兽医学报》2015,(9)
为体外构建水霉菌生物膜(BF)并对其形成过程与结构特征进行分析,本研究利用寄生水霉(Saprolegnia parasitica)ATCC200013在玻片和聚乙烯网片上构建水霉菌BF,筛选适宜水霉菌粘附的基质材料,并在BF形成过程中,采用CCK-8法(Cell Counting Kit-8)定量检测BF的活力变化,利用Calcofluor White M2R染色后,荧光显微镜观察细胞外基质;扫描电镜观察水霉菌BF的形态结构;SYTO 9/PI染色后,激光共聚焦显微镜观察水霉菌BF的活力及结构特征。结果显示,水霉菌能够在聚乙烯网片上形成较好的BF,并且BF能够与聚乙烯网片紧密粘附,完全覆盖聚乙烯网片,而与盖玻片粘附不紧密。水霉菌BF OD450nm值在培养前24 h升高较快,48 h后趋于稳定。水霉菌在第6 h即开始有散在的孢子黏附于聚乙烯网片上;12 h~24 h形成单细胞层;36 h~60 h为中间形成阶段,至72 h菌丝缠绕形成多层的、弥散着大量细胞外基质的立体结构,同时死亡菌随着培养时间延长而增多。本研究体外构建了水霉菌BF并了解其结构特征,为水霉菌BF的进一步研究奠定了基础。 相似文献
6.
采用体外定量法检测20株鸭源鸡杆菌的被膜形成能力,并对被膜形成能力较强的1株鸭源鸡杆菌在不同环境（培养时间、培养基质、营养条件）下产生生物被膜（BF）的差异进行了研究。结果显示,大部分鸭源鸡杆菌均具有不同程度形成被膜的能力,其中3株被膜形成能力中等,2株形成能力较强;鸭源鸡杆菌在银染法、试管法和微量板定量检测法中形成BF的最佳培养时间分别是24、60、24h。其生长周期为8h开始起始黏附、20h大量黏附阶段、24h时形成了完整的生物被膜、32h生物被膜老化散播,之后起始新一轮的被膜周期。葡萄糖、蔗糖及NaCl的加入均在一定程度上抑制了被膜的形成,且随着加入量增加NaCl对被膜形成抑制更显著,而低质量浓度的MgSO4在一定程度上促进BF的形成。扫描电镜观察发现,生物被膜内鸭源鸡杆菌聚集成团状、相互黏连形成致密的三维立体结构。 相似文献
7.
《现代畜牧兽医》2021,(9)
试验以55株乳源金黄色葡萄球菌为研究对象,通过结晶紫染色法分析其生物被膜形成能力,应用PCR技术检测乳源金黄色葡萄球菌的所携带的耐药基因和生物被膜形成相关基因。结果表明,55株金黄色葡萄球菌中34株生物被膜形成能力较强,17株生物被膜形成能力较弱,4株无生物被膜形成能力;55株细菌中17株(31%)携带mec A耐药基因,17株金黄色葡萄球菌分为9个ST型,均属于已发现的ST型,其中ST97和ST398为优势株。上述来源相近的金黄色葡萄球菌分型后,基本位于ST97和ST98两个大簇,说明该地区引起奶牛乳房炎的细菌型别相对较集中。生物被膜相关基因Ica A、Ica D、Ica R、Eno、Atl、aap、Bap和sig B基因的检出率分别为44%、36%、27%、89%、60%、42%、18%和25%。研究表明,乳源金黄色葡萄球菌的生物被膜形成能力较强,生物被膜形成能力较强的菌株均携带多个生物被膜形成相关基因,说明生物被膜的形成过程可能是受多个基因共同调节。 相似文献
8.
为研究cyaA基因编码的腺苷酸环化酶(AC)在绵羊肺源大肠杆菌XJ10感染小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)中的作用，本研究以绵羊肺源大肠杆菌XJ10野毒株(XJ10WT)为对照，通过荧光定量PCR检测XJ10 cyaA基因缺失株(XJ10ΔcyaA)在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平，结果显示，与XJ10WT相比，XJ10ΔcyaA在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平在感染后0和6 h时均极显著降低(P<0.001),crl和pap基因的m RNA转录水平分别在2 h和12 h时均极显著上调(P<0.001)。进一步通过吉姆萨染色观察XJ10WT和XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞情况，采用细胞和细菌共培养方式分析XJ10ΔcyaA对MH-S细胞的黏附及侵袭能力，并通过CCK-8法分析细菌对MH-S细胞增殖的抑制情况。结果显示，XJ10ΔcyaA和XJ10WT在感染后3 h黏附MH-S细胞的活菌数量达峰值并持续至5 h，随后逐渐下降，在感染后1 h～5 ... 相似文献
9.
为探究桂皮醛对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物被膜(BF)的形成及其相关基因转录水平的影响，本研究利用牛津杯法分别检测桂皮醛对3株BF强阳性(E-39、E-40、E-41)和3株中等阳性(E-27、E-30、E-42) APEC的抑菌圈，分析桂皮醛对APEC的抑菌活性；采用二倍稀释法测定桂皮醛对上述6株APEC的最小抑菌浓度(MIC)；根据该结果，进一步采用96孔板结晶紫染色法测定MIC、1/2 MIC和1/4 MIC桂皮醛对6株APEC BF形成能力的抑制作用；采用q PCR法分别检测1/2 MIC和1/4 MIC桂皮醛对6株APEC BF形成相关基因转录水平的影响。结果显示：桂皮醛对6株APEC的抑菌圈直径为16.12±0.13 mm～23.80±0.23 mm；桂皮醛对BF强阳性和中等阳性APEC菌株的MIC均为256μg/m L;BF形成能力的检测结果显示，与未用桂皮醛处理的APEC相比，MIC、1/2 MIC和1/4 MIC的桂皮醛均极显著抑制上述6株APEC BF的形成(P<0.01)，且该抑制作用与桂皮醛的浓度呈正相关；经1/2 MIC和1/4 MIC桂皮醛处理3 ... 相似文献
10.
[目的]了解新疆维吾尔自治区阿克苏地区屠宰场羊源大肠杆菌的流行情况以及耐药性和毒力基因分布特征。[方法]从阿克苏地区某屠宰场采集健康羊的淋巴结、胴体拭子、粪便样本共30份,使用选择性培养基分离大肠杆菌,然后采用大肠杆菌特异性phoA基因对其进行分子生物学鉴定;利用PCR扩增及测序技术对大肠杆菌分离株进行多位点序列分型（multilocus sequence typing,MLST）;采用K-B纸片扩散法开展分离菌株对抗菌药物的敏感性试验;应用PCR技术检测分离菌株的耐药基因和毒力基因携带情况;使用96孔板微量肉汤法测定分离菌株的生物被膜形成能力。[结果]从30份样本中分离得到14株大肠杆菌,分离率为46.67%;14株分离株分属于10个MLST型别;对复方新诺明（100%）、青霉素（85.71%）和四环素（50.00%）耐药率较高,9株菌具有多重耐药表型（64.29%）;在14株大肠杆菌中检测到blaTEM(85.71%)、aph(3′)（71.43%）、tetA(64.29%)、sul1(57.14%)和sul2(57.14%)等12种耐药基因,并且8株菌携带Ⅰ型整合子int-Ⅰ基因... 相似文献
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《畜牧与兽医》2020,(7)
为了解近年来石河子某规模化牛场死于脑炎的犊牛大脑中分离的大肠杆菌生物被膜形成及影响因素,试验以犊牛脑炎源大肠杆菌为研究对象,采用96孔板培养细菌结合结晶紫染色,分析该菌产生生物被膜(bacterial biofilm, BF)的能力及形成的最佳时间;定性和定量分析不同培养条件对该菌BF形成能力的影响。结果表明:犊牛脑炎源大肠杆菌BF形成能力较弱,从6 h开始形成,48 h时BF的形态趋于完整直至顶峰,之后BF网状结构逐渐解离,72 h时BF的结构消失;当在LB培养基中分别添加3%的葡萄糖、1%的蔗糖和0.5%的NaCl时BF的结构最完整;LB、BHI、TSB三种培养基比较,LB培养基中形成BF的形态最佳。致犊牛脑炎大肠杆菌形成BF能力较弱,培养至48 h时BF形态较为完整,在LB培养基中适当添加葡萄糖、蔗糖、NaCl可提高其形成BF的能力。 相似文献
13.
为研究谷氨酸转运蛋白GltS编码基因对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物学特性的影响，本研究利用λ-Red同源重组方法构建APEC CE129(WT)株gltS基因缺失株CE129ΔgltS(KO)和基因回补株CE129ΔgltS/gltS (RS)，并均经PCR及测序鉴定，结果显示，gltS基因缺失株及回补株均正确构建。通过连续10 h测定各菌株OD600nm值绘制WT、KO、RS菌株的生长曲线，利用梅里埃自动生化鉴定系统测定3株菌的生化特性；利用K-B纸片法检测3株菌对8类16种药物的敏感性；利用半固体培养基检测3株菌的运动能力。结果显示，3株菌的生长特性、生化特性、药敏特性和运动能力均无明显差异。利用细菌平板计数法计算检测WT与KO菌株的体外竞争指数(CI)，分析KO菌株是否致弱。利用结晶紫染色法测定3株菌的生物被膜(BF)的形成能力，并利用刚果红琼脂板及含荧光增白剂的琼脂板分别检测菌株BF中curli菌毛及纤维素的形成情况。结果显示，WT与KO菌株的体外CI为0.32，表明KO菌株轻度致弱。BF形成能力检测结果显示，相对于WT、RS菌株，KO菌株BF的形成能力极显著降低(P<... 相似文献
14.
采用微量肉汤稀释法测定3种喹诺酮类药物对21株嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),体外建立其生物被膜(BF),采用结晶紫法和扫描电镜的方法研究生物被膜的形成和结构,并观察喹诺酮类药物对生物被膜形成能力的影响。结果表明:喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌有较强的抑制作用,诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的抑菌率分别为90.5%,95.25%和85.7%,其中环丙沙星的抑菌作用最强,对21株菌的最小抑菌浓度均在0.7813μg/mL以下。21株嗜水气单胞菌均可在24～48 h内体外形成较为稳定的BF,但不同菌株之间形成BF的能力有所不同。嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物较为敏感,环丙沙星浓度在1倍MIC以上即可抑制嗜水气单胞菌生物被膜的早期形成,但细菌形成成熟的生物被膜后,较高浓度药物对生物被膜的影响不明显。 相似文献
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为了探究flaA基因对单核细胞增生李斯特菌LM90SB_2黏附和侵袭MBMEC、RAW264.7能力、生物被膜(BF)形成能力的影响,本研究分别进行了flaA基因缺失株LM90SB_2-ΔflaA与野毒株LM90SB2对细胞黏附和侵袭试验,定性定量分析了他们生物被膜形成能力以及小鼠不同脏器中载菌量差异。结果显示:LM90SB_2-ΔflaA对MBMEC的黏附菌数较野毒株LM90SB_2低,且两者差异性显著(P<0.05),两者对MBMEC的侵袭数差异性不显著(P>0.05),而LM90SB_2-ΔflaA对RAW264.7的黏附和侵袭数均显著低于野毒株LM90SB_2(P<0.05);LM90SB_2-ΔflaA与LM90SB_2的BF形成规律基本相同,但缺失株形成的BF总量显著低于野毒株的(P<0.05),且与野毒株相比,缺失株的BF结构中核酸与多糖的分布均松散、稀疏、散点状分布。本研究结果表明,flaA基因对LM90SB_2的细胞黏附和侵袭能力均有影响,在其BF形成过程中发挥着重要的作用。 相似文献
16.
试验旨在研究蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞（IM-9）毒性作用及对相关基因表达的影响。将提取的蓖麻蛋白按不同浓度添加到培养基培养6、12 h,研究剂量－时间效应,确定半数抑制浓度,然后以半数抑制浓度培养细胞2、6、10、12 h,在每个时间段检测免疫相关基因CD40、IL-1β、TNF-α和凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况。结果表明,蓖麻蛋白对IM-9细胞的毒性作用随浓度和时间的增加而增强。取接近半数抑制浓度20 ng/mL作用IM-9细胞2、6、10、12 h,免疫相关基因中,TNF-α和CD40基因在6 h试验组表达量与对照组相比显著升高（P<0.05）,10、12 h达到极显著水平（P<0.01）;IL-1β基因表达量试验组、对照组间差异不显著（P>0.05）。凋亡基因中,与对照比相比,试验组Bax基因表达量10 h极显著降低（P<0.01）,12 h显著降低（P<0.05）;Bcl-2基因表达量4个时间段均达到显著水平（P<0.05）,2、12 h达到极显著水平（P<0.01）;Caspase-3基因除6 h表达量降低外,其他时间段表达量均显著升高（P<0.05）,2 h为极显著水平（P<0.01）。表明蓖麻蛋白能显著影响IM-9细胞的基因表达,TNF-α和CD40基因是两个潜在用IM-9细胞评价蛋白毒性的检测基因。 相似文献
17.
为研究双组份系统cpxR基因缺失对大肠杆菌临床分离野生株E41生物学特性的影响、培养条件与其生物被膜(BF)形成能力的关系及黄芩苷对BF的清除作用，本研究以野生株E41、缺失株E41ΔcpxR、回补株E41ΔcpxR/pcpxR为对象进行试验。比较3株菌的生长特性，结果显示三者生长曲线无显著性差异。比较3株菌的运动性，结果显示E41ΔcpxR的游泳运动和群集运动能力弱于野生株及回补株。采用平板计数检测3株菌的抗鸡血清杀菌能力，结果显示E41ΔcpxR株抗鸡血清杀菌能力弱于野生株及回补株。采用微量肉汤稀释法检测菌株的药物敏感性，结果显示与野生株和回补株相比，卡那霉素、阿米卡星和环丙沙星对缺失株的MIC降低1/2，但氟苯尼考对其MIC升高了2倍。采用结晶紫染色法检测不同成膜载体和培养温度对BF形成的影响，结果显示3株菌均在硅胶载体上的BF形成能力最强，但25℃条件下适于E41和E41ΔcpxR/pcpxR株BF的形成，37℃条件下则更适于E41ΔcpxR株BF的形成。采用平板计数法检测黄芩苷对BF的清除作用，结果显示，不加黄芩苷的空白对照组，E41和E41ΔcpxR/pcpxR株在试验起始... 相似文献
18.
TNF-α对培养大鼠脂肪细胞凋亡的影响 总被引：4，自引：1，他引：4
以5、10、15ng／mL 3种剂量TNF—α作用体外培养的大鼠脂肪细胞0、12、24、36h和48h，采用荧光染色计数、流式细胞仪检测脂肪细胞凋亡率；透射电镜观察脂肪细胞超微结构变化；琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂情况。结果表明，TNF—α对脂肪细胞具有诱导凋亡作用，凋亡率在一定范围内具有剂量和时间依赖性，以10ng／mL TNF—α作用36h为最佳；电镜下观察可见脂肪细胞形态改变，出现染色质凝聚、边集和凋亡小体形成等特征性变化；DNA电泳检测可见处理24h以后出现“梯状”条带，作用0h和12h未见“梯状”条带。 相似文献
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《中国兽医杂志》2020,(1)
为分析包头地区仔猪源致泻性大肠杆菌进化分群情况、生物被膜形成能力(BF)及耐药性情况。试验采用PCR法、结晶紫微孔板法和K-B药敏纸片法对48株仔猪源致泻性大肠杆菌进行进化分群、生物被膜形成能力及耐药性检测。结果显示,48株仔猪源致泻性大肠杆菌中以B2群和D群流行为主,分别占分离菌株的35.4%和25.0%;48株仔猪源致泻性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等7种药物耐药率在58.3%以上,对其他药物的耐药率在11.9%～31.3%;48株仔猪源致泻性大肠杆菌中强形成膜能力菌株有20株、中形成膜能力菌株有16株、弱形成膜能力菌株有7株、不形成BF菌株的有5株,分别占分离菌株的41.7%、33.3%、14.6%、10.4%。经分析,48株仔猪源致泻性大肠杆菌的BF形成能力与多黏菌素、新霉素、磺胺间甲氧嘧啶、氟苯尼考、恩诺沙星、氨苄西林、阿莫西林7种药物耐药性存在一定的相关性。本试验为临床中合理用药及该病的防控提供科学依据。 相似文献