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卵黄抗体分离、提取和纯化方法研究进展 总被引:9,自引:0,他引:9
卵黄抗体即卵黄免疫球蛋白(Egg Yolk Im-munoglobulin,IgY),目前研究较多的是鸡卵黄抗体。母鸡接受免疫后,在卵黄成熟期,血液中的免疫球蛋白IgG选择性地转移到卵黄中形成IgY。IgY是一种7 S免疫球蛋白,分子量180kD,由两条重链(分子量67~70 kD)和两条轻链(分子量22~30 kD)组成,等电点接近5.2。IgY的结构虽与IgG相似,但其Fc段氨基酸组成与IgG相差很大,不结合类风湿因子,不与蛋白A、G以及哺乳 相似文献
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吴华伟 《河南畜牧兽医(综合版)》2004,25(9):10-11
卵黄抗体是当今生物科学研究领域的一项重大发现。母鸡以特定抗原免疫后,能产生相对应的特异性抗体,并将其有效地储存在卵黄中。卵黄中的免疫球蛋白G(IgG)称卵黄抗体,又名lgY,自Williams等(1962)发现卵黄抗体以来,IgY以其取材方便,制作简单,价格便宜等优点,广泛应用于动物疾病的诊断、预防和治疗。1IgY的性质IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。正常鸡的IgY的分子量约为180KDa,由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成,分子量分别为60~70KDa和22~30KDa。其等电点约为5.2。IgY具有良好的耐热能力。在低于75℃条件下,IgY具有良好的热稳定性… 相似文献
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鸡鸭鹅免疫球蛋白的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
免疫球蛋白 (1g)指具有抗体活性或化学结构上与抗体相似的球蛋白。普遍存在于血液、组织液及外分泌物中 ,Ig由浆细胞产生 ,占血浆蛋白总量的 2 0 %。免疫应答有两个基本分工 :体液或抗体介导的反应和细胞介导的应激 ,它们密切协作消除感染微生物和进行肿瘤免疫检测 ,自身和非自身间的区别能力是所有免疫反应的基本功能。Ig属体内的多功能免疫球蛋白 ,也是再次免疫应答的主要抗体 ,其生物学活性是特异性结合抗原或通过重链C区介导一系列生物学效应 ,包括中和毒素作用、亲和细胞而导致吞噬调理作用、胞外杀伤及免疫炎症、介导抗体依赖性细胞… 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2017,(17)
为了研究新疆哈萨克绵羊主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子基因序列的多态性,采用PCR和测序的方法分别克隆新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链和轻链的c DNA全长,并进行生物信息学分析。结果表明:成功扩增出新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链、轻链,大小分别为1 107 bp、357 bp;通过生物信息学软件预测蛋白质分子质量分别为90 ku和29.694 ku;等电点(p I)分别为5.00,5.23;重链富含G、C碱基,有两段跨膜螺旋,最大疏水指数为3.622,最小疏水指数为-2.922,预测整条肽链表现为亲水性,在1~84位碱基之间存在信号肽;轻链四种碱基含量基本一致,也有两段跨膜螺旋,在1~63位碱基之间存在信号肽。新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因编码蛋白质的二级结构以无规则卷曲元件的含量最高,该蛋白质的三级结构由一条α链,另一条为β链通过非共价键组成,由α1、α2组成抗原结合槽;NCBI数据库中不同地区的哈萨克绵羊的MHCⅠ类分子基因的同源性在89.87%~99.91%之间,与数据库中牛的MHCⅠ类分子基因同源性达到了98.88%,轻链MHCⅠ类分子基因还与猪和人的同源性相对较高。 相似文献
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为了解羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)单克隆抗体2E4的抗体可变区的分子特征,选择其轻链和重链可变区基因分别进行体外扩增和测序,并通过IgBLAST程序分析(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/),确定了2E4抗体可变区的互补决定区(complementarity determining regions,CDRs)和骨架区(framework regions,FRs)氨基酸结构。继而,采用SWISS-MODEL同源建模方法,展示抗体分子轻、重链可变区的三维空间构型,并推测出可能的ORFV B细胞抗原表位多肽结合部位(pocket)。目的基因测序结果显示:2E4轻链可变区(VL)基因扩增全长为324bp,编码108个氨基酸;2E4重链可变区(VH)基因扩增全长为345bp,编码115个氨基酸。IgBLAST结果显示:轻链与GenBank公布的GHP53(GI:197494)单抗轻链可变区序列基因序列一致性达到97.6%;重链与VHSAF34(GI:215263227)单抗重链可变区基因序列一致性达到98.6%。并且,2E4轻链CDRs(CDR1-CDR3)分别位于25~34aa、52~54aa和91~98aa的序列位置;重链CDRs(CDR1-CDR3)分别位于25~32aa、50~57aa和96~104aa的序列位置。同源建模分析结果显示:这些CDRs区域共同形成的"pocket"极可能作为抗原表位多肽结合的位点。最终成功克隆2E4单抗可变区基因,分析了抗体轻、重链可变区CDRs构成形式,模拟了其空间构型,为进一步了解和验证"CDRs-表位"特异性结合的分子机制,并在Orf免疫保护中加以应用提供了可能。 相似文献
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卵黄免疫球蛋白IgY的提纯及应用研究进展 总被引:4,自引:0,他引:4
1IgY的性质鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)是鸡卵黄中存在的主要免疫球蛋白,当用某种抗原免疫母鸡时,母鸡产生免疫反应,在卵黄成熟期,血液中的免疫球蛋白IgG选择性的转移到卵黄中,称卵黄免疫球蛋白IgY,IgY在子鸡孵育过程中和孵育后对子鸡起保护作用。IgY的性质与哺乳动物的IgG类似,其分子量约180kDa,由两条轻链和两条重链组成(2H+2L),其中轻链(L)分子量约22000Da,重链分子量约67000Da,等电点接近5.2。含氮量为14.8%。IgY的氨基酸组成与鸡血清IgG和牛IgG不同(如表1)。持良好。根据MakotoSh… 相似文献
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为了探究重链抗体在骆驼免疫保护中的生物学作用,本研究利用Protein G和Protein A亲和层析纯化新疆双峰驼血清中总IgG和重链抗体IgG2,并免疫昆明小白鼠制备抗双峰驼总IgG和抗双峰驼重链抗体IgG2的多抗血清;通过ELISA检测双峰驼在体液免疫应答过程中针对spaA-N、溶菌酶和蒜氨酸酶3种抗原的重链抗体的滴度变化。结果从新疆双峰驼血清中亲和层析纯化出天然重链抗体IgG2,蛋白质分子质量约为46 ku;免疫昆明小白鼠后获得抗双峰驼总IgG多抗血清的效价为1∶204800,抗双峰驼重链抗体IgG2多抗血清的效价为1∶6400。在spaA-N免疫骆驼诱导的体液免疫应答过程中,重链抗体IgG2出现延迟反应。3种蛋白均能诱导抗原特异的IgG2亚类重链抗体的产生。 相似文献
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抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单链抗体的构建及初步鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
为了构建鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核蛋白(N)单链抗体(scFv),本研究通过提取杂交瘤细胞株6H3的总mRNA,采用RT-PCR法扩增出抗IBV N蛋白抗体的重链和轻链可变区基因,利用重叠延伸PCR将其重链和轻链通过一条寡核苷酸链连接起来扩增了单链抗体基因,并将其克隆于原核表达载体pET-30a,构建重组质粒,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达.对表达产物进行纯化复性后,用夹心ELISA和western blot检测表明scFv可与传染性支气管炎病毒核蛋白发生特异性结合. 相似文献
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目前,对于家畜的抗病育种工作正由传统育种转向分子育种领域,但对于家畜分子免疫领域,尤其是在免疫系统中起着重要决定性作用的免疫球蛋白基因的结构、类型和表达多样的分子机制相关研究报道较少,本文综述了常见家畜的免疫球蛋白表达谱研究进展。概括来说牛、羊和猪免疫球蛋白重链恒定区均含有编码五种免疫球蛋白的基因,但在猪和羊基因座上的排布情况还未确定。可变区的V、D和J片段数目相对于人和小鼠来说比较有限,其中羊的D片段未知。λ和κ两种轻链在三种动物中的使用状况有所不同:牛和羊偏好使用λ轻链,猪λ∶κ表达比率接近1∶1。 相似文献
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当用某种特定抗原免疫产蛋母鸡时,蛋黄中便会积聚起相应的抗体,我们就可由蛋黄中将其分离出来,每个蛋黄可含多达100毫克被称作IgY的一种免疫球蛋白,据认为IgY与哺乳动物的IgG十分相似。蛋白中仅发现较少量的IgM和IgA,IgY重链具有4个稳定区,而哺乳动物IgG的重链含有3个稳定区,并且IgY不具有铰链区。 强有力的替代品 在鸡蛋中生产IgY抗体是一种好方法,可代替由免疫小鼠、豚鼠、兔或山羊血液中制备抗体的常规方法。法国斯特拉斯堡分子生物学与细胞生物学研究所M.H.V.Van.Regemnortel博士去年十月份在都尔召开的有关蛋… 相似文献
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经硫酸铰盐析、柱色谱分离得到纯化的鸡胆汁免疫球蛋白A(IgA)。然后用木瓜蛋白酶水解IgA,再经DEAE_(52)—纤维素柱色谱纯化得到IgAFc重链。用IgAFc重链免疫家兔制得兔抗鸡IgAFc重链抗血清。 相似文献
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单链抗体及其在肿瘤诊断和治疗中应用研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
单链抗体(ScFv)是将抗体重链可变区和轻链可变区通过一段连接肽连接而成的重组蛋白,也是目前报道最多的基因工程抗体。ScFv具有分子质量小,免疫原性低,无Fc端,不易与具有Fc受体的靶细胞结合,对肿瘤组织的穿透力强,可以与其他效应分子连接成抗肿瘤融合蛋白等特点,是保持抗体亲和性和特异性的最小功能性抗体片段,广泛应用于医学和生物技术研究领域。文章介绍了ScFv的特点、基因来源、构建、表达及其在肿瘤的诊断和治疗中的应用研究进展。 相似文献
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为了构建重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库,试验用重组蛋白AD41抗原免疫接种Balb/c小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以总RNA为模板经RT-PCR合成cDNA,再以cDNA为模板,用小鼠免疫球蛋白重链和轻链设计引物,分别扩增重链和轻链可变区基因,利用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成单链抗体(ScFv)片段,将其克隆入质粒表达载体pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库。结果表明:从30个噬菌体克隆中筛选到25个阳性克隆。说明成功地构建了抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库。 相似文献