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雏鹅新型病毒性肠炎病毒的提纯和核酸链型及结构蛋白分析 总被引：6，自引：0，他引：6
本文报道雏鹅新型病毒性肠炎病毒（NGVEV）的提纯方法、核酸类型及结构蛋白分析的研究结果。采用氯仿处理－饱和硫酸铵沉淀－透析清除NH4^ 、SO4^2-柱层析分离的技术程序可获得纯将的NGVEV病毒粒子。于电镜下可观察到NGVEV具有典型的腺病毒特征。经吖啶橙染色和S1核酸酶消化鉴定NEVEV的核酸类型为双链DNA。经SDS－PAGE分析，病毒结构蛋白由15种多肽组成，即VP1（116KD）、VP2（104KD）、VP3（88KD）、VP4（68KD）、VP5（60.7KD）、VP6（54KD）、VP7（40.1KD）、VP8（36KD）、VP9（34.5KD）、VP10（24.2KD）、VP11（22KD）、VP12（20KD）、VP13（18KD）、VP14（14.2KD）和VP15（13.4KD)。其中VP4、VP7、VP8、VP9、VP14为主要结构多肽，占蛋白总量的90.2622%。 相似文献
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鸭病毒性肠炎病毒的提纯及其结构蛋白SDS-PAGE分析 总被引：3，自引：0，他引：3
将鸭病毒性肠炎病毒（DEV）分离株SC-1经鸭胚成纤维细胞培养增殖后，采用差速离心结合蔗糖不连续密度梯度离心法进行提纯，获得多量、纯净的完整病毒粒子。病毒粒子主要位于40％～50％蔗糖层交界处，电镜下可观察到DEV具有典型的疱疹病毒特征，完整病毒粒子由囊膜、衣壳和核芯3个部分组成，直径为170～190nm。将纯化的DEV粒子经SDS—PAGE分析，发现其结构蛋白由11种多肽组成，即VP1（190000）、VP2（136000）、VP3（106000）、VP4（88000）、VP5（75000）、VP6（68000）、VP7（56000）、VP8（48000）、VP9（42000）、VP10（38000）和VP11（32000）．其中VP1、VP2、VP3、VP6、VP8和VP9等6条蛋白区带的相对百分含量较高，约占病毒结构蛋白总量的89．04％，为DEV的主要结构多肽。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病毒IBDV属于双股双节RNA病毒科(Birnaviridae),禽RNA病毒属。IBDV有4种成熟的结构蛋白:VP1,VP2,VP3和VP4,相对分子量分别为90kD,41kD,32kD,28KD。其中VP2和VP3是病毒的主要结构蛋白,分别占病毒总蛋白的51％和40％,VP1和VP4含量较少,分别占3％和6％是病毒的次要蛋白。1995年,Mundt等从IBDV感染细胞中鉴定出新的蛋白质命名为VP5,其相对分子量为 21kD。 相似文献
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不同传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2表达差异性分析 总被引：2，自引：0，他引：2
将在不同时间、地域从传染性法氏囊病（IBD）发病鸡群中获得的15个IBDV株分别用SPF鸡、鸡胚和鸡胚成纤维细胞增殖，经氯仿处理后，采用聚乙二醇沉淀、超速离心和不边疆蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒，检测表明，病毒主要分布于40%蔗糖层，对纯化病毒进行SDS-PAGE分析，结果显示，病毒结构蛋白VP2在不同毒株表达量有较大差异。本实验为IB-DV主要保护性抗原VP2高表达疫苗的研究奠定了基础。 相似文献
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马庆菊 《畜牧兽医科技信息》2010,(8):121-122
犬细小病毒（Canine parvovirus；CPV）是细小病毒科、细小病毒属成员，具有细小病毒属病毒典型形态和结构。病毒粒子细小，直径20～22nm，呈20面体对称，无囊膜，在氯化铯中的浮密度1．438／cm3。基因组为单股DNA，大小5233bp病毒粒子有VP1、VP2和VP3三种多肽，其中VP2为衣壳蛋白主要成分，有血凝活性。 相似文献
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番鸭细小病毒和鹅细小病毒生化及基因组特性的比较 总被引：12，自引：0，他引：12
番鸭细小病毒莆田株（MPV-P）和鹅细小病毒莆田株（GPV-P）分别感染的番鸭胚尿囊液经氯仿处理、PEG沉淀和Sepharose4B柱纯化。纯化样品在电镜下观察，均见到实心和空心2种病毒粒子。病毒粒子呈圆形，立体对称，无囊膜，直径为20-24nm。经SDS-PAGE分析，MPV和GPV均呈现3条结构蛋白带。MPV结构蛋白的相对分子质量约为VP1 89000、VP2 78000和VP3 61000，其中VP3为主要结构蛋白。GPV要相对分子质量与MPV有微小差别。MPV和GPV核酸均为单链DNA，长度约为51000bp。分别以MPV核酸和GPV核酸为模板，加到无引物的DNA聚合酶Ⅰ大片段合成体系中，合成产物经1%琼脂糖凝胶电泳，均可见长度约为5600bp的双链DNA带，证明MPV和GPV核酸的3'末端具有发夹结构。对这2种病毒核酸及经Klenow合成的双链核酸进行限制性内切酶分析，两者的酶切结果明显不同，表明MPV和GPV核酸在一级结构上存在明显差异。以上结果证明，MPV和GPV不但在致病性上有显著养异，而且在核酸结构上也有明显差异。 相似文献
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鸡贫血病毒是鸡传染性贫血病的病原体，它广泛存在于世界各地，成为危害养禽业的主要病原之一。鸡贫血病毒基因组含有3个开放阅读框架，分别编码分子量为51.6kDa（VP1）、24kDa（VP2）和13．6kDa（VP3）的3种蛋白质。本文将克隆化VP2基因亚克隆到PET-32a（＋）载体上并进行原核表达，用PET-32a（＋）表达的VP2融合蛋白免疫Balb/c小鼠，经过杂交瘤细胞的建立、融合细胞的筛选和克隆化培养，获得一株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为3C5。腹水单克隆抗体的ELISA效价为1：409600，经Western—blotting证明单抗3C5为针对VP2融合蛋白的单抗。为VP2融合蛋白的纯化和鸡贫血病毒的检测、鉴定和奠定了基础。 相似文献
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猪嵴病毒（porcine kobuvirus,PKV）是近年来在健康猪和腹泻猪粪便中新检测到的小核糖核酸病毒科嵴病毒属成员,可能引起猪的腹泻,对养猪业造成重大经济损失。研究发现,PKV广泛分布在猪中,在腹泻和临床健康猪中均已被检测到,阳性率从3.9%~100.0%各不相同。一个典型的PKV病毒粒子直径为30 nm,基因组全长为8 120 bp,包括1个含2 488个氨基酸的开放性阅读框（ORF）;PKV是典型的小RNA病毒科的基因组结构：1个5'非编码区,1个L蛋白,结构蛋白P1（VP0、VP3和VP1）,非结构蛋白P2（2A、2B和2C）和P3（3A、3B、3C和3D）,1个3'非编码区和1个Poly（A）尾巴。PKV的2B编码区存在30个氨基酸的缺失,VP1蛋白是小RNA病毒科变异最频繁的结构蛋白,其含有主要的抗原表位,可促进机体产生中和抗体。检测PKV的方法有反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR和逆转录环介导扩增（RT-LAMP）方法。作者对PKV的分类学、流行概况、基因组结构、遗传特性及检测技术等研究现状做一简要概述,以期为进一步研究及了解PKV提供参考。 相似文献
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将鸭甲肝病毒鸡胚化弱毒MY株Vp1基因原核表达工程菌(pET32a+Vp1,BL21(DE3)PlysS)对基因Yp1进行大量表达和纯化,得到鸭甲肝弱毒MY株Vp1重组蛋白作为抗原制备亚单位疫苗,免疫雏鸭,用间接ELISA检测方法对免疫后抗体生成水平进行监测,并通过动物攻毒试验评价免疫保护效果.结果显示:Vp1重组蛋白免疫家兔后血清检测琼扩效价≥1∶64,细胞中和试验效价为1/45;雏鸭免疫后抗体生成水平呈明显上升趋势,对攻毒起到了保护作用.首次揭示了DHAV-1结构蛋白Vp1刺激机体产生抗体使雏鸭获得保护的能力. 相似文献
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从鸭体、禽胚和细胞 3个方面探讨了雏半番鸭呼肠孤病毒 FZ2 株的致病性。经试验表明 ,在实验室条件下 ,该株病毒可导致雏番鸭、雏半番鸭发病、死亡 ,对雏番鸭的致死率为 14 .3%～ 4 1.7% ,对雏半番鸭的致死率高达 38.5 % ,且死亡鸭表现出与自然感染呼肠孤病毒病死的雏番鸭、雏半番鸭相同的病变 ;人工感染幸存鸭大多生长发育明显受阻。该株病毒经尿囊腔途径接种 ,对番鸭胚、半番鸭胚、北京鸭胚、SPF鸡胚的致死率分别为 10 0 %、96 %、2 8%和 0 ,致死鸭胚的肝脏、脾脏表面见白色坏死点。经蛋传试验表明 ,该株病毒有可能经胚蛋垂直传染。以该株病毒在番鸭胚成纤维细胞 (MDEF)上连续传接 10代 ,结果细胞病变 (CPE)仍不明显 ,表明其不易适应 MDEF。由此可见 ,该株雏半番鸭源呼肠孤病毒具有较强的致病力 相似文献
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为了解新型鸭肝炎病毒(N-DHV)的变异情况,本实验从广西、河南、山东临床发病鸭体内分离到3株病毒.通过RT-PCR检测为N-DHV.将分离株进行鸭胚传代培养,并测定鸭胚毒的ELD50为10-3.29/0.2 mL～10-465/0.2 mL.以1型和N-DHV阳性血清分别与分离株进行血清交叉中和试验,结果表明,Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)阳性血清对分离株无保护性.动物回归试验表明,分离株致死雏鸭的临床症状和病变与DHV-1相同,分离株的致死率为30％～70％.将分离株接种鸡胚,不产生任何病变,在鸡胚成纤维细胞中连续传5代后,细胞产生明显、规律的病变.扩增3株分离株的VP1基因,并进行氨基酸序列比对,结果表明3个分离株与DHV-C的同源性最高,与DHV-A的同源性最低,并存在氨基酸的插入和缺失.本实验表明3个分离株与韩国N-DHV属于同一血清型. 相似文献
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鸭病毒性肝炎是一种传播迅速并对雏鸭具有高度致死性病毒病,以肝炎为其主要特征。本文报道重庆地区雏鹅暴发鸭病毒性肝炎病例。疾病发生于3～14日龄雏鹅,发病率20%～30%,死亡率20%～25%,临死前出现角弓反张及病死鹅肝脏出血。利用RT-PCR能从肝组织中检测到鸭肝炎病毒A型(DHV-A)和C型(DHV-C)的VP1基因。利用鸭胚从肝组织中分离出A型病毒CQ1株和C型病毒CQ2株,二者人工接种能引起6～7日龄雏鹅出现典型临床症状与病变。这是首次报道A型和C型鸭肝炎病毒混合感染导致雏鹅发病死亡。 相似文献
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Duck hepatitis virus types 1 (DHV-1) JX strain was isolated from infected ducklings with clinical symptoms from Hubei province of China. These isolated strains showed high pathogenicity to both duck embryo and duckling in Duck embryo neutralization assay and animal infection experiment. The complete genome of JX strain was sequenced. Comparative genome analysis with other available strains in GenBank indicated that JX strain shared 94-99% similarity at the nucleotide level and 95-99% at amino acid level with other DHV-1 strains. Sequence results showed that mutations of nucleotide and amino acid were mainly distributed in VP1 genes. Our result implied that the VP1 probably was the major virulent determinant of DHV-1. In addition, 13 DHV-1 strains from different area were analyzed in phylogeny and they can be grouped into four distinct lineages. The new-identified JX strain was grouped into one lineage with A66 and C80 strains, which were also isolated from China. 相似文献
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《Research in veterinary science》2009,86(3):595-598
Duck hepatitis virus types 1 (DHV-1) JX strain was isolated from infected ducklings with clinical symptoms from Hubei province of China. These isolated strains showed high pathogenicity to both duck embryo and duckling in Duck embryo neutralization assay and animal infection experiment. The complete genome of JX strain was sequenced. Comparative genome analysis with other available strains in GenBank indicated that JX strain shared 94–99% similarity at the nucleotide level and 95–99% at amino acid level with other DHV-1 strains. Sequence results showed that mutations of nucleotide and amino acid were mainly distributed in VP1 genes. Our result implied that the VP1 probably was the major virulent determinant of DHV-1. In addition, 13 DHV-1 strains from different area were analyzed in phylogeny and they can be grouped into four distinct lineages. The new-identified JX strain was grouped into one lineage with A66 and C80 strains, which were also isolated from China. 相似文献
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V ronique Marius-Jestin Martine Cherbonnel J. P. Picault G. Bennejean 《Comparative immunology, microbiology and infectious diseases》1987,10(3-4):173-186
This paper describes the isolation and identification of a duck plague virus (DP) and a paramyxovirus (PMV6), from the livers and intestines collected in 4-month old mule ducks, under fattening, exhibiting 75% mortality and necrotic-haemorrhagic gross lesions. These viruses were isolated in specific pathogen free (SPF) muscovy duck eggs and SPF chicken eggs respectively. Then the DP virus was adapted to duck and chicken fibroblasts. The disease was reproduced in 2-week old SPF muscovy ducklings, intramuscularly inoculated with the previous organs, as well as in contact ducks. From them, only the DP virus was isolated again. Experimentally the intramuscular inoculation of the duck plague French vaccinal strain, 4 h post contact, did not prevent the disease and did not decrease its severity.
Regarding the DP virus, the typical signs and lesions observed in experimentally infected muscovy ducks as well as the presence of intranuclear inclusions of the epithelial cells of their oesophagus, intestines, bursa of Fabricus and liver on the one hand, and on the other hand, of the epithelial cells of the duck egg chorio-allantoïc membrane and fibroblasts inoculated with the samples first defined, allowed the characterization of the virus. Direct electron microscopy, as well as the results of seroneutralization tests with different specific avian Herpes virus antisera confirmed the DP virus identification. Moreover the DP isolate was not antigenically different from the serotype actually known.
The haemagglutinating virus (PMV6) was characterized by direct electron microscopy as well as with 18 specific avian Myxovirus antisera; its identification was confirmed too by the specific seroconversion observed 4 weeks post-inoculation of this virus, in 11 weeks old SPF muscovy ducklings.
Finally an assay was carried out to appreciate the pathogenicity of theses viruses inoculated either separately or associated. It showed the high pathogenicity of the DP strain. The PMV6 was apathogenic and no synergic effect with the DP virus was demonstrated. It appears to be the first isolation of PMV6 in France, to our knowledge. The epidemiological circumstances related to theses isolations are discussed. The failure of the emergency vaccination in contact ducks, might be attributed to the high virulence of the DP strain. 相似文献