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1.
连续多重PCR牛胚胎性别鉴定 总被引：7，自引：0，他引：7
本实验以BOV97M序列和牛的1．715卫星DNA序列设计引物进行PCR扩增，其中前者为雄性特异扩增，后者为雌雄共同扩增，以进行牛的性别鉴定。PCR扩增共进行43个循环，其中前11个循环为雄性特异扩增，在随后的33个循环中，再加入内标引物，即进行多重PCR扩增，其灵敏度可达到10pg级(约3个细胞)。 相似文献
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牛SRY序列的体外扩增 总被引：3，自引：0，他引：3
建立了用PCR(polymerase chain reaction)技术扩增牛SRY序列的方法.在牛、猪、山羊和绵羊的SRY同源序列高度保守区设计一对引物,两条引物均为22NT,对公牛SRY序列的163 bp进行体外扩增.提取牛基因组DNA,用作PCR扩增的模板,采用3×2×3因子组合,建立了PCR扩增牛SRY序列的最适条件.应用设计的引物和最适条件扩增了20头牛的DNA样品.结果表明,公牛样品均出现预期的SRY特异性扩增带,大小为163 bp,而母牛样品不能扩增出特异带.因此所扩增的序列为公牛特异的SRY序列,且片段大小与设计的序列完全一致. 相似文献
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为从动物饲料中快速检测所含牛源组织成分以有效防止疯牛病传入，根据牛线粒体基因核苷酸序列设计1对引物，应用CheleX法分离饲料中牛源组织成分的DNA．对分离的DNA进行PCR扩增、基因克隆及核苷酸序列分析，并建立饲料中牛源组织成分的PCR检测方法．用建立的PCR方法对羊、猪、鸡、兔和鱼组织基因组DNA进行扩增，均无特异条带；将牛组织基因组DNA倍比稀释，分别对各个稀释度的DNA进行PCR扩增，结果表明，该方法对牛组织DNA检测的敏感度可达25．2pg／μL．用该研究建立的方法对含不同量牛肉粉的鱼粉进行检测，其最小检测量达0．05％（质量分数），整个过程约需3h． 相似文献
4.
为获得一种高效的牛胚胎性别鉴定方法,采用高特异性和灵敏度的巢式PCR进行扩增。结果表明:公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255bp的β-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255bp的β-珠蛋白基因片段。巢式PCR只需3～8个细胞就可以观察到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以牛胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。 相似文献
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牛结核杆菌病PCR检测方法的建立及初步应用 总被引：3，自引：0，他引：3
根据PCR技术原理.建立了牛结核病PCR诊断方法,并测定出该方法的敏感性为1.025 Pg,茵细胞的灵敏度为200个茵左右.特异性试验表明,除牛结核分枝杆菌的特异扩增带(317 bp)外,其他的细茵均未出现特异性扩增带.采用PCR检测方法,通过对94份奶牛奶样的检测.得到牛结核分枝杆茵的阳性率为11.7%(11/94),PCR和胶体金方法检出率有明显的差异.PCR方法敏感性强,特异性高,是一种提高牛结核病临床诊断的好方法. 相似文献
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牛环形泰勒虫病PCR诊断方法的建立及其应用研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]建立快速检测牛环形泰勒病的PCR诊断方法.[方法]根据牛环形泰勒虫裂殖子的表面抗原(Tams1)基因,设计一对特异性引物,以地方阳性病例提取的DNA为模板,用PCR扩增出目的条带,经克隆、测序分析后,通过优化反应体系,建立牛环形泰勒虫病的PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行验证试验.[结果]测序结果表明,扩增的目的片段与已知基因序列相似性为99;;该方法检测与牛的其他血液原虫无交叉反应,其最低检出限量为1.6×102 copies/μL.应用所建立的PCR检测方法对新疆吐鲁番市周边疑似地区419份牛全血进行了检测,结果阳性率为52.3; (219/419),而血液涂片检出率为43.7;(183/419).[结论]建立的牛环形泰勒虫PCR快速诊断方法具有有一定的特异性和敏感性,可用于牛环形泰勒虫病的分子诊断和流行病学调查. 相似文献
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蒙古牛肌肉生长抑制素基因编码序列检测分析 总被引：10，自引：0，他引：10
肌肉生长抑制素(myostatin)基因是影响骨骼肌生长和发育重要的候选基因。实验以2头双肌皮埃蒙特牛和30头蒙古牛基因组DNA为模板，针对牛myostatin基因设计了3对引物并扩增了3个外显子和部分5’调控区。对PCR扩增片段克隆、测序结果显示，2头皮埃蒙特牛均在编码序列938处发生G到A突变，使编码氨基酸由半胱氨酸变为酪氨酸，符合前人检测结果。首次在蒙古牛中发现在6个不同位点存在单核苷酸突变，其中3个无义突变，3个突变引起了编码氨基酸变化，反映了牛myostatin基因在进化过程中具有较高的突变性。 相似文献
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为建立快速、准确的检测牛呼吸道主要病原菌牛支原体(Mycoplasma bovis)、牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)及牛结核分枝杆菌(M.tuberculosis)的方法,对牛支原体oppD基因序列、牛多杀性巴氏杆菌Pm-kmt基因序列、牛结核分枝杆菌IS6110基因序列分别设计特异性引物,对单一PCR检测方法进行优化后建立三重PCR检测方法。结果表明:三重PCR的最佳扩增条件为94℃预变性10min;94℃1min,60℃50s,72℃1min,循环30次;72℃延伸10min。建立的三重PCR方法能对同一样本中的3种病原菌进行扩增,特异性强。牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌和牛结核分枝杆菌的最低检测DNA浓度分别为5.306×10~(-3)ng/μL、3.075×10~(-2)ng/μL和1.605×10~(-4)ng/μL。建立的三重PCR方法临床检测牛支原体肺炎鼻拭子、牛结核分枝杆菌、结核菌素与单一PCR检测方法的阳性符合率为100%。三重PCR检测方法可用于牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌、牛结核分枝杆菌的单一和混合感染鉴别诊断,具有快速、准确、简便的特点。 相似文献
10.
对牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系及反应程序进行了优化。结果显示,选用双套引物和连续复合PCR方法,先用雄性特异性引物进行10个循环,然后再加入牛特异性引物进行22个循环,共32个循环,可实现两种基因片段的同时扩增,保证了PCR的准确性。胚胎移植结果显示该方法准确可靠。 相似文献
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屠宰年龄、体重相近45头优质南阳黄牛,对高档部位-西冷进行中温、低温和低温电刺激处理,测定高档牛肉在三种条件下成熟WB-S、pH的变化。试验结果表明:在低温电刺激条件下pH值很快下降,第1天达5.82,第2天最低达5.5,然后开始缓慢上升;第4天WB-S值达3.16,三种处理在第4天从肌肉组织状态、颜色和持水性比较,以低温电刺激为最好。 相似文献
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根据小鼠SRY基因，设计并合成内外两对巢式PCR引物；同时。根据ZFY—ZFX基因的同源性，设计合成其共同的巢式PCR引物，对昆白小鼠组织DNA样品进行了性别鉴定。雄性样品可扩增262bp的SRY基因和137bp的ZFY—ZFX基因片断，而雌性样品只能扩增137bp的ZFY-ZFX基因片断，其鉴定结果与已知性别一致。将2-细胞、4-细胞、8-细胞和16细胞胚胎视为微量细胞样品进行PCR扩增，通过常规PCR与巢式PCR、复合PCR的比较。确立了巢式及复合PCR的扩增体系。结合核型分析和PCR法共鉴定21枚胚胎，其中雄性12枚，雌性8枚，鉴定准确率为95．2％。 相似文献
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【目的】为了在短期内获得大量凡纳滨对虾肌肉组织的功能基因表达信息,为深入了解功能基因在凡纳滨对虾肌肉组织中的表达提供分子生物学依据。【方法】通过构建凡纳滨对虾肌肉组织的全长cDNA文库,并进行EST测序分析。【结果】文库质量分析表明,初始文库库容约8．50×10^6 CFU,重组率在95％左右,插入片断大小为0．5～4．0kb,多数在1．0kb以上。随机测序72条cDNA,可得到有功能注释的37条全长cDNA和18条编码未知蛋白的基因序列。通过Gene Ontology功能分类可将有功能注释的37个基因分为蛋白质合成、细胞骨架、细胞信号传导、代谢、转运、能量、转录、抗病及防御、生殖发育和未知功能基因等10类,其中蛋白质合成类基因最多（27．03％）,与细胞骨架（13．51％）、细胞信号传导（13．51％）及代谢类基因（13．51％）共占67．56％。【结论】构建凡纳滨对虾肌肉组织的全长cDNA文库,可实现短期内获得大量凡纳滨对虾肌肉组织的功能基因表达信息. 相似文献
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[目的]采用2种方法复核检出牛肉中金黄色葡萄球菌阳性结果,确保检测结果的准确性。[方法]按照GB 4789.10—2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》方法前增菌、选择性分离培养、革兰氏染色和血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌,应用SN/T1870—2007《食品中致病菌检测方法实时PCR法》对疑似阳性结果进行了进一步验证和复核。[结果]经过2种方法验证可疑菌落,该批牛肉中检出金黄色葡萄球菌。[结论]分离并鉴定牛肉中金黄色葡萄球菌可疑样品时,可采用不同方法进行验证和复核,该方法可提高检测结果的准确性,可用于畜禽肉中致病菌的检测。 相似文献
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为分析鳜鱼(Siniperca chuatsi)生肌调节因子基因(mrf4)的特征,阐明其在鳜鱼不同组织以及胚胎发育不同时期的表达规律,用反转录PCR法扩增鳜鱼mrf4 的cDNA序列,并将其连入克隆载体,进行测序、分析;用荧光定量PCR检测mrf4基因在不同组织及胚胎发育不同阶段的表达情况。结果：克隆的鳜鱼mrf4 cDNA全长为726 bp,编码的蛋白质含241个氨基酸,具有生肌调节因子的典型的碱性螺旋–环–螺旋结构;mrf4在成体鳜鱼白肌、红肌、心脏、脑以及不同发育阶段的胚胎中均有表达,在红肌中的表达量显著高于在其他组织中的表达量(P<0.05);在胚胎发育阶段的原肠期、尾芽期、肌肉效应期,mrf4的表达量呈递增趋势,而在胚胎发育的心搏期、血液循环期、仔鱼期,mrf4的表达量呈递减趋势,肌肉效应期mrf4的表达量明显高于胚胎发育的其他阶段的mrf4表达量(P<0.05)。 相似文献
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Cultured beef is a method where stem cells from skeletal muscle of cows are cultured in vitro to gain edible muscle tissue. For large-scale production of cultured beef, the culture technique needs to become more efficient than today's 2-dimensional(2D) standard technique that was used to make the first cultured hamburger. Options for efficient large-scale production of stem cells are to culture cells on microcarriers, either in suspension or in a packed bed bioreactor, or to culture aggregated cells in suspension. We discuss the pros and cons of these systems as well as the possibilities to use the systems for tissue culture. Either of the production systems needs to be optimized to achieve an efficient production of cultured beef. It is anticipated that the optimization of large-scale cell culture as performed for other stem cells can be translated into successful protocols for bovine satellite cells resulting in resource and cost efficient cultured beef. 相似文献
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矿物元素对肉牛组织中铜铁锌与镉相关性的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为给制定降低牛肉组织中镉元素含量的技术措施提供科学依据,选用40头杂交肉牛,进行了饲料中添加解毒剂(硒)、拮抗剂(铜、锌、铁)、吸附剂(蒙脱石)等几种矿物质与镉在牛肝脏、肾脏、肌肉等组织中的相关性试验。结果表明:在自然饲养状态下,通过在肉牛饲料中添加微量元素硒、铜、锌、铁和蒙脱石均不能有效降低镉在肝脏、肾脏和肌肉中的蓄积,相反增加了镉在肾脏或肝脏组织中的积累。 相似文献
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保存温度与时间对动物组织DNA提取质量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
［目的］研究不同保存温度、不同保存时间对蟹肉总DNA提取质量的影响，为同类研究提供借鉴。［方法］将样品在4、-20和-40℃下分别保存4、8和15 d，提取螯足内肌肉总DNA，测定总DNA的紫外吸收值，并设计引物扩增其mtDNA ND6基因，采用琼脂糖凝胶电泳分别对提取的总DNA及PCR结果进行检测。［结果］由鲜活蟹组织提取的DNA A260与A280的比值因蛋白污染而较低；15 d内4 ℃与-40 ℃条件下保存的DNA提取率和条带检出率均无明显差异，而-20 ℃下的保存效果受时间影响明显。各处理组合总DNA的 A260与A280比值在1.79～2.00；利用上述DNA作模板，扩增其特定基因mtDNA ND6均可获得预期长度的PCR条带。［结论］短期保存组织宜选择4 ℃，若需较长时间保存时则宜选择-40 ℃以下的低温。 相似文献