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罗非鱼 (Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｓｐｐ )的雄鱼比雌鱼长得快、长得大 (叶冀雄 ,1983) [1] 。有两种方法可生产全雄或超雄罗非鱼用作商品鱼 :其一是激素法(马仲波 ,1984 ;胡逸农等 ,1979) [2 ,3] ,在鱼苗开始吃食时人工哺拌有甲基睾丸酮的饲料以促使雌鱼雄性化 ,但是对人体和生态环境的影响受到质疑 ;另一种是通过杂交法产生 (江山 ,1984 ) [4 ] ,如奥利亚雄鱼 (性染色体组成是ＺＺ)与尼罗罗非鱼雌鱼 (性染色体组成是ＸＸ)杂交 ,由于染色体Ｚ的雄性性别决定基因强于Ｘ染色体上的雌性基因 ,所以其子代鱼应该全是ＺＸ型雄鱼 ,但如果其它染色体… 相似文献
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根据生物素与链霉亲和素的亲和原理，采用生物素-磁珠富集微卫星，与传统放射性同位素杂交法相结合，构建筛选大黄鱼的微卫星文库。用生物素-微卫星捕捉单链限制性酶切片段（含有接头和大黄鱼微卫星序列），经PCR扩增单链目的片段形成双链，然后连接至T载体上，转化感受态细胞。将移至硝酸纤维素膜的重组菌用^32P标记的放射性同位素探针50[γ-^32P]ATP（CA）15筛选出阳性克隆菌。测序结果发现，阳性克隆率为71.9％，105个微卫星位点。其中选取设计合成30对并筛选出22对可用引物。说明所建大黄鱼微卫星文库是一个高质量的文库，可为大黄鱼基因组结构分析、大黄鱼精密微卫星连锁图谱构建、分子进化和系统发育研究、分子标记辅助育种以及经济性状的QTL定位提供大量的微卫星标记。 相似文献
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脂肪酸结合蛋白(FABPs)是一类来自共同祖先基因的小分子蛋白质,相对分子质量为14~16 ku,广泛存在于动物肠道、心脏、脑、脂肪和肌肉等多种组织的细胞内,占细胞内可溶性蛋白总量的1%~8%[1]。研究表明,机体内脂肪酸跨膜运输是被动扩散或由膜蛋白介导的过程,脂肪酸结合蛋白主要结合细胞内游离的脂肪酸(FA)和其他疏水性配体,并将其输送到过氧化物酶体、线粒体和细胞核等细胞器,进而调控脂肪酸氧化和甘油三酯及磷脂合成等脂代谢过程[2](图1)。脂肪酸结合蛋白家族成员的命名是根据其首次分离或鉴定出的组织来命名的,例如肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)等。然而,很多组织中往往有多种脂肪酸结合蛋白基因(fabps基因)同时表达,研究者又对不同的脂肪酸结合蛋白基因按阿拉伯数字命名[3],如fabp1基因(肝型)、fabp2基因(肠型)、fabp3基因(心脏型)等。 相似文献
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通过FIASCO(Fast Isolation by AFLP Sequences Containing repeats)法构建鳜鱼(Siniperca chuatsi)基因组微卫星富集文库,分离微卫星DNA序列并对其特征进行分析。鳜鱼基因组DNA经MseⅠ限制性内切酶消化后,选取200~800 bp的片段与MseⅠ接头连接,用生物素标记的寡核苷酸探针(AC)8、(CT)8、(AT)7、(GATA)8、(GATT)7与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,变性洗脱获得单链目的片段,经PCR扩增形成双链,然后克隆到pGEM-T载体上,转化至DH5α中,首次成功构建鳜鱼基因组微卫星富集文库。对其中100个阳性克隆进行测序,60个(60%)含有微卫星序列(GenBank Accession Number:DQ789247~DQ789306)。成功设计了47对鳜鱼微卫星引物,并合成21对引物进行PCR扩增,结果筛选出18个多态性微卫星标记。结果表明:FIASCO法能有效提高筛选微卫星标记的效率。本研究筛选的微卫星标记可以用于鳜鱼遗传背景分析和遗传连锁图谱构建,并将为鳜鱼基因组结构分析、标记辅助育种以及数量性状位点(QTL)基因的定位等研究提供候选微卫星标记。 相似文献
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磁珠富集法制备大口鲶的微卫星分子标记 总被引：10，自引：0，他引：10
通过磁珠富集的方法分离大口鲶（Silurus meriaionalis）的微卫星分子标记。将基因组DNA酶切，梯度离心收集400～900bp片段并纯化，连接Brown接头，用生物素标记的寡核苷酸（CA）15作探针与其杂交，杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上，然后将这些片段洗脱，PCR扩增，进行克隆构建“基因组文库”，再通过同位素标记的探针（CA）15进行2次杂交筛选，所得到的阳性克隆测序。从所获得593个阳性克隆中选取178个经测序，97．19％（173个）含有微卫星序列，90．60％重复数在10以上，75．98％为完美型。除探针中使用的CA重复单元外，还观察到Cr、GA、ATG的重复序列。设计获得120对微卫星引物，合成40对经PCR筛选，结果31对引物扩增出多态性条带。显示出，磁珠富集法是获得微卫星分子标记的一种有效的方法，可成为今后发展该标记的主要方法。同时，制备出的微卫星标记可为今后研究大口鲶的分子遗传育种提供有用的遗传标记。 相似文献
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采用人工合成的生物素标记(AG)15探针及磁珠富集法构建了脊尾白虾基因组微卫星富集文库.将脊尾白虾基因组DNA经HaeⅢ酶切后,收集400 ～1 200 bp片段,连接特定接头,与生物素标记(AG)15探针杂交并捕获含有微卫星的DNA片段,然后连接到pMD18-T载体中,构建脊尾白虾微卫星富集文库.随机挑取947个克隆,经菌落PCR检验,其中667个为阳性克隆.从阳性克隆中随机选取184个克隆进行测序,有150个克隆含有微卫星序列,共获得199个微卫星序列,其中完美型158个(79.4％),非完美型27个(13.6％),复合型14个(7.0％).根据微卫星序列,设计了119对微卫星引物,64对扩增出稳定的具有特异性的条带,经30个脊尾白虾个体进行多样性评价后,有26个位点表现出多态性.26个微卫星位点获得的等位基因数从3 ～ 16个不等,平均每个位点扩增得到6.5个等位基因.观测杂合度(Ho)、期望杂合度(4)及多态性信息含量值(PIC)的范围分别为0.111 ～ 0.929、0.246 ～0.932、0.231 ～0.909.本研究开发的微卫星位点将为脊尾白虾种群多样性研究、家系识别和种质鉴定提供有效的工具. 相似文献
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以荷包红鲤(Cyprinus carpio var.wartanensis)耐寒品系(♂,耐低温)与云南大头鲤(cyprinus pellegnini pellegniniTchang)(♀,不耐低温)的杂交F2为研究对象,研究抑制消减杂交技术构建的鲤耐低温差异表达基因cDNA文库中2个具有多态性的新差异表达基因[克隆号为CC005(GenBank_Accn为FF339846)和CC062(13enBank_Accn为FF677502)]与低温下鲤红细胞膜形态之间关联性,结果显示,活力正常的实验鱼红细胞膜边缘有数个棘状凸起,直径在500 nm左右,高度为300nm左右;两个未知新基因CC005和CC062在膜表面结构凸起组和正常组(相对正常)之间基因型组合分布存在极显著差异(X2=21.345,P＜0.01,),推测这2个与低温相关的基因对低温下鲤红细胞膜表面出现的凸起结构有协同效应,这一实验结果将为鲤的耐低温机理研究和标记辅助选择育种提供理论依据. 相似文献
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以青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)为研究对象,采用半定量和定量PCR法研究HCO-3分泌相关基因SLC4(solute carrier family 4)和SLC26(solute carrier family 26)家族slc4a1、slc4a2、slc4a4和slc26a6基因组织分布情况,并对不同盐碱环境下肠道中SLC基因家族的表达情况进行定量分析,揭示青海湖裸鲤适应盐碱环境的肠道调节机制。结果表明,slc4a1、slc4a2、slc4a4和slc26a6基因在青海湖祼鲤鳃、肝脏、肾脏和肠道等多个组织中均有表达,且在肠道中的表达量较高,其中slc26a6在肠道中高表达,而在鳃中表达量极低,表现出组织特异性;在碱度组[盐度1.31±0.02,碳酸盐碱度(30.66±0.08)mmol·L-1]、盐度组[盐度15.02±0.02,碳酸盐碱度(2.12±0.05)mmol·L-1]和湖水组[盐度14.84±0.03,碳酸盐碱度(29.57±0.11)mmol·L-1]青海湖裸鲤肠slc4a1、slc4a2、slc4a4和slc26a6基因的表达量在胁迫4 d过程中均呈现出先升高后回落的现象,其中湖水组裸鲤肠SLC4、SLC26家族基因表达量上调最为明显,尤其是slc26a6基因表达量最高上升为对照组的4.9倍,同时,湖水组裸鲤直肠排泄HCO-3浓度也最高,说明盐碱环境下青海湖裸鲤通过肠道Cl–/HCO-3交换子(slc4a1、slc4a2、slc26a6)、Na+–HCO-3联合转运子(slc4a4)分泌和排泄机体内积累的碱,这一调节途径有助于青海湖裸鲤补偿因水环境中盐碱度升高而造成的渗透及酸碱失衡。 相似文献
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《水产科学》2021,(5)
钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)为参与细胞内pH及细胞增殖调控的关键因子。用RACE末端PCR方法得到黑鲷CHP2(AsCHP2)基因全长cDNA,并利用生物信息学方法分析该基因的序列特征与同源性;同时利用实时荧光定量PCR方法检测AsCHP2的mRNA在黑鲷整体仔鱼,90 d、180 d黑鲷,杂交F_2(真鲷♂×黑鲷♀)及回交F_1(黑鲷♂×杂交F_1♀)的脑、心脏、肌肉、肝脏和性腺等组织中的表达。研究结果表明:(1)AsCHP2 cDNA序列全长1722 bp, 5′-非编码区(UTR)长度69 bp, 3′-UTR长度1069 bp,开放阅读框长度为585 bp,编码194个氨基酸;其结构域包含2个EF-hand结构及1个核输出信号;其蛋白分子质量为21.87 ku,理论等电点为4.89;同源建模获得了CHP2的二级与三维结构。AsCHP2基因的核苷酸序列与其他鱼类的相似性为86%～81%,编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性为80%～72%。邻接系统树显示了黑鲷CHP2氨基酸序列与其他鱼类的进化关系。序列比对与结构分析表明,AsCHP2基因具有典型的CHP2基因结构。(2)AsCHP2的mRNA在黑鲷的仔鱼期(5～35 d)及大规格个体的脑、肝脏及肌肉组织中均有表达,在90 d个体各组织中的表达量均高于在180 d个体各组织中的表达量;在180 d黑鲷、杂交F_2及回交F_1的个体中,基因在脑、肝脏、肌肉及性腺等不同组织中均有表达,且均在心脏中高表达、在性腺中低表达。这些结果显示,CHP2基因在海水鱼类的生长、发育过程中发挥功能。 相似文献
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为比较甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18S rRNA和β-actin基因在脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)作内参基因的优劣,本研究采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾GAPDH基因全长cDNA序列(GenBank登录号:KX893516),通过实时荧光定量PCR(quantative real-time PCR,qPT-PCR)技术,检测3种基因在脊尾白虾不同组织及不同蜕壳后时间点的表达量变化,在此基础上进行内参稳定性分析。结果显示,脊尾白虾GAPDH基因全长1514 bp,开放读码框1002 bp,编码333个氨基酸,二级结构预测显示GAPDH蛋白具有一个高度保守的NAD~+结合功能域(NAD binding domain)和行使糖运输和代谢的催化功能域。分析qRT-PCR结果并结合ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3种软件的分析发现,在不同组织和不同蜕壳后时间点,3种内参基因的稳定性由高到低依次为18S r RNA、GAPDH、β-actin。因此,在脊尾白虾不同组织和不同蜕壳后时间点的定量分析中,选取单内参基因时,推荐使用18S rRNA为内参基因,双内参时推荐18S rRNA和GAPDH,而18S rRNA、β-actin和GAPDH在其他生理条件下作内参基因的稳定性还有待进一步研究。 相似文献
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探讨铁蛋白ferritin基因在罗氏沼虾中的组织表达分布及外源Fe3+对ferritin mRNA表达的影响。通过RT-PCR表明,ferritin mRNA在罗氏沼虾精巢、卵巢、肌肉、心脏、中肠腺和血淋巴中均有表达;荧光定量PCR结果证实了ferritin mRNA在中肠腺中表达量最高,其次是精巢。对罗氏沼虾进行FeCl3溶液肌肉注射后,荧光定量PCR结果表明,肌肉中ferritin mRNA表达量在注射后3 h增加了61倍,高水平的表达一直维持到8 h,随后在12 h表达量急剧地下降;卵巢中ferritin mRNA表达量在3 h有近4倍显著增加,在注射后48 h内一直维持在较高水平;心脏ferritin mRNA表达量在24 h后增加了8倍,48 h后表达量开始下降;在血淋巴、中肠腺和精巢注射前后均未发现有显著性差异(P>0.05)。以上实验结果表明,外源Fe3+可以诱导罗氏沼虾铁蛋白mRNA的表达。 相似文献
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以0(对照)、50、100和150 mg/kg饲料的剂量将左旋咪唑(LMS)添加于基础饲料中制成颗粒饲料投喂罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)14 d,采样测定了罗氏沼虾血细胞吞噬活性、血清酚氧化酶(PO)、溶菌酶(LSZ)及超氧化物岐化酶(SOD)活性,并以6×105cells/mL浓度的致病性嗜水气单胞菌(Aerom onas hydrophila)对罗氏沼虾进行肌肉注射(20μL/尾),记录接种7 d后罗氏沼虾的累积死亡率。结果表明,3个LMS处理组的罗氏沼虾血细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清PO、LSZ及SOD活性均显著地高于对照组(P<0.05);LMS处理组的罗氏沼虾对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。因此,饲喂适量的LMS能促进罗氏沼虾的免疫力和抗病力;在本试验条件下,100 mg/kg饲料的剂量为最适添加剂量。 相似文献
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The development and the application of a quantitative duplex real‐time PCR for the detection of Neoparamoeba perurans and the elongation factor α 1 gene (ELF) of Atlantic salmon, Salmo salar L., and rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), are described. A set of primers and probe was designed to amplify a 139‐bp fragment specific to the N. perurans 18S rRNA gene. The test was shown to be very sensitive, being able to detect as little as 13.4 DNA copies per μL corresponding to 0.15 fg of template DNA. In addition, the reaction that detected N. perurans was found to have a high degree of repeatability and reproducibility, to have a linear dynamic range (R2 = 0.999) extending over 5 log10 dilutions and to have a high efficiency (104%). The assay was applied to DNA samples extracted from 48 formalin‐fixed, paraffin‐embedded (FFPE) salmon gill tissues showing varying degrees of gill histopathology and amoebic gill disease (AGD)‐type histopathology ranging from absent to severe (each scored 0–3). Neoparamoeba perurans DNA was detected in all the blocks where AGD‐type histopathology was diagnosed microscopically and in 43.6% of the blocks showing signs of gill pathology. The association between parasitic load and gill histopathology and AGD‐type histopathology severity was also investigated. This study also describes the development and the application of a second real‐time PCR for the generic detection of Neoparamoeba spp., Page, 1987. A set of primers and probe conserved among the Neoparamoeba spp. was designed to amplify a 150‐bp fragment within the 18S rRNA gene. Applied to N. perurans‐negative gill tissues, the method was used to exclude the presence of other Neoparamoeba spp. in those blocks where gill pathology was observed microscopically. 相似文献
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Deepak Jose Harikrishnan Mahadevan Jenson Victor Rozario Padmaja Jayaprasad Pradeep Saswata Maitra Sameera Shamsudheen 《Aquaculture Research》2020,51(2):687-695
This study presents the molecular barcoding results of giant freshwater prawns and allied products collected from inland landing centres, markets and stores of Vembanad Lake (Kerala state, India) which is recognized as a natural abode for Macrobrachium rosenbergii. Prawns collected from landing centres of the lake could be easily identified as the above with their large size and morphological characters. There were certain ‘alien’ prawns and prawn products (headless shell on, peeled and deveined) traded in the markets and stores of this region as M. rosenbergii. Genotyping of all these samples using COI and 16S rRNA gene sequences confirmed the speciation of individuals from inland landing centres as M. rosenbergii, ‘alien’ prawns and certain prawn products as M. malcolmsonii. To ensure the same and to detect the presence of any other congeners of genus Macrobrachium inhabiting Vembanad Lake, additional homologous COI and 16S rRNA sequences available in NCBI were acquired and incorporated for molecular analyses. Results generated from NJ tree and genetic distance data confirmed the trade of non‐indigenous Macrobrachium species M. malcolmsonii in Kerala for the first time and its use as a species substituent for M. rosenbergii. 相似文献
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长期以来,国内进行罗氏沼虾人工繁殖一直以池塘饲养的成虾作亲本,由此造成该虾种质退化,养殖经济效益下降.为提高其种质和养殖经济效益,于1996年和1997年从马来西亚引进野生原种繁育虾苗,进行复壮技术的研究.研究结果表明,野生种子代和杂交种子代的体长、体重明显高出本地的驯养种.种群间具有标准差、变异系数、第二步足与体长的比值相对较小、额齿数相对较多的特点.通常野生原种体形细长、体色淡黄透明、摄食旺盛、抗病力强、性成熟个体较大.野生种子代和杂交种子代幼体活力强,摄食旺盛,变态期延长,但人工育苗的难度大.研究结果显示,采用繁育难度相对较低的雌(本地驯养种)×雄(野生种)配组方式繁育杂交苗,难度较小,效果好. 相似文献
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为缩短乌鳢养殖周期,笔者于1997-1998年,在沅江市鱼类良种繁育场选择2口面积均为333m^2的池塘,进行了使用乌鳢当年孵化的鱼苗,当年养成商品鱼的高产试验,现综述如下： 相似文献